• MeSH
• elektroforéza v polyakrylamidovém gelu metody   normy   MeSH
• masné výrobky analýza   normy   MeSH

The success of bottom-up proteomic analysis frequently depends on the efficient removal of contaminants from protein or peptide samples before LC-MS/MS. For a peptide clean-up workflow, single-pot solid-phase-enhanced peptide sample preparation on carboxylate-modified paramagnetic beads (termed SP2) was evaluated for sodium dodecyl sulfate or polyethylene glycol removal from Arabidopsis thaliana tryptic peptides. The robust and efficient 40-min SP2 protocol, tested for 10-ng, 250-ng, and 10-μg peptide samples, was proposed and benchmarked thoroughly against the ethyl acetate extraction protocol. The SP2 protocol on carboxylated magnetic beads proved to be the most robust approach, even for the simultaneous removal of massive sodium dodecyl sulfate (SDS) and polyethylene glycol (PEG) contaminations from AT peptide samples in respect of the LC-MS/MS data outperforming ethyl acetate extraction.

• MeSH
• benchmarking MeSH
• chromatografie kapalinová metody   MeSH
• dodecylsíran sodný MeSH
• kapalinová chromatografie-hmotnostní spektrometrie * MeSH
• peptidy analýza   MeSH
• polyethylenglykoly * MeSH
• proteomika metody   MeSH
• tandemová hmotnostní spektrometrie metody   MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

• MeSH
• dodecylsíran sodný MeSH
• peptidy izolace a purifikace   MeSH
• poloxamer MeSH
• povrchově aktivní látky MeSH
• proteiny izolace a purifikace   MeSH

• MeSH
• adjuvancia imunologická farmakologie   MeSH
• dodecylsíran sodný farmakologie   MeSH
• lidé MeSH
• lyzozomy enzymologie   účinky léků   MeSH
• myeloidní leukemie imunologie   MeSH
• neutrofily imunologie   účinky léků   MeSH
• respirační vzplanutí účinky záření   MeSH
• tetradekanoylforbolacetát farmakologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• chinolony analýza   MeSH
• dodecylsíran sodný MeSH
• elektroforéza v polyakrylamidovém gelu metody   MeSH
• oxidace-redukce MeSH

Two methods recommended for analysis of denatured proteins, automated Experion chip electrophoresis and SDS-PAGE, are compared. The Experion method is a novel technique based on combination of the LabChip microfluidic separation technique (Caliper Life Sciences) and sensitive fluorescent detection. Both methods were compared in molecular weight (MW) determination of a protein standard mixture, resolution of protein pairs of near molecular weights and estimation of the abundance of a target protein in the mixture to be purified. Both the methods are appropriate for MW determination and in purification of proteins. The accuracy of the methods is approximately the same (ca. 8 %), but the Experion method shows better reproducibility (ca. 1.48 %) than SDS-PAGE (ca. 2.17 %).

• MeSH
• elektroforéza mikročipová metody   přístrojové vybavení   MeSH
• elektroforéza v polyakrylamidovém gelu metody   přístrojové vybavení   MeSH
• financování organizované MeSH
• proteiny analýza   MeSH
• reprodukovatelnost výsledků MeSH

Cíl studie: Stanovení antispermatozoálních protilátek (ASA) a elektroforetická analýza (SDS PAGE) cervikálního ovulačního hlenu (OCM), za účelem porovnání výsledků Kremerova penetračního testu (mucus sperm capillary penetration test) a nepřímého MAR (indirect mixed antiimmunoglobulin reaction) testu s elektroforetickou analýzou SDS PAGE. Typ studie: Retrospektivní studie. Název a sídlo pracoviště: Gynekologicko-porodnická klinika LF UK a FN Plzeň. Soubor a metodika: Do studie jsme zařadili 94 pacientek (22–40 let, průměrný věk 32,3 roku), kterým jsme v Poradně reprodukční imunologie Gynekologicko-porodnické kliniky LF UK v Plzni odebrali ovulační cervikální sekret (OCM). V OCM jsme vyšetřovali antispermatoidní protilátky (ASA) pomocí Kremerova testu a nepřímého MAR-testu pro IgG, IgA, IgM a IgE. Pro polyakrylamidovou gelovou elektroforézu (PAGE) jsme připravili OCM inkubací se vzorkovým pufrem s obsahem denaturačního činidla (SDS) a sledovali jednotlivé bílkovinné frakce. Výsledky: Penetrace spermií v kapilárách naplněných ovulačním hlenem (Kremer test) dosahovala hodnot od 0 do 10 cm za hodinu (průměrná hodnota u žen bez ASA 2,43 cm/hod., u pacientek s ASA pak 1,4 cm/hod.). Výskyt spermaglutinačních protilátek nad 45 % v IgA jsme prokázali u 6 (6,38 %) pacientek, v IgG u 5 (5,32 %), u 5 žen (5,32 %) jsme zjistili sperm-cytotoxické protilátky, přítomnost IgE jsme našli ve 3 případech (3,19 %) do 30%, IgM aktivitu vůbec. Individuální spektra bílkovin získaných metodou SDS PAGE vykazovala hodnoty molekulových hmotností v rozsahu 14,4–350 kDa. Metodou SDS PAGE jsme zachytili přítomnost protilátek v IgG a /nebo v IgA v 53 případech (56,38 %): u 40 (75,47 %) jsme neprokázali jejich ASA aktivitu i-MAR testem, u 13 ano (24,53 % korelace s i-MAR testem); 6 ASA pozitivních pacientek (31,58 %) metoda neodhalila. Závěr: Analýza 94 OCM metodou SDS PAGE ukázala některé signifikantní korelace, jejichž specifikace bude založena na dalším výzkumu typu immunoblottingu.

Objective: To evaluate the presence and activity of local sperm antibodies and electrophoretic analysis of ovulatory cervical mucus (OCM) to prove the correlation of results of Kremer mucus sperm capillary penetration test and i-MAR (mixed antiimmunoglobulin reaction) test with SDS-PAGE. Design: Retrospective study. Setting: Department of Obstetrics and Gynecology, Medical Faculty of Charles University, Pilsen. Methods: 94 patients aged 22–40 (average age 32.3 years) were chosen for our study. Ovulatory cervical mucus was taken from uterine cervical canal in Consultation for Reproductive Immunology. Kremer test and indirect mixed antiglobulin reaction test for IgG, IgA, IgM and IgE were used for detection of sperm antibodies. For the SDS-PAGE analysis, OCM was incubated with sodium dodecyl sulfate. We studied separated protein fractions from OCM. Results: Sperm-capillary ovulatory mucus penetration test (Kremer) was 0–10 cm/hour in our group (average value in patiens without sperm antibodies was 2.43 cm/hour, with sperm agglutinating antibodies 1.4 cm/hour), significant levels (>45%) of spermagglutinating antibodies were detected in IgA in 6 patients (6.38%), IgG in 5 (5.32%) patients, sperm-cytotoxic levels (IgA and/or IgG) in 5 patients (5.32%); levels of IgE less than 30% in 3 patients (3.19%). Individual immunological factors gained by SDS-PAGE showed the spectrum of various molecular weights with range of 14.4– 350 kDa. The presence of IgG and/or IgA was in 53 cases (56.38%), with 13 ASA positivities (24.53% correlation with i-MAR test) and no ASA activity in 40 cases (75.47%); 6 ASA positive patiens (31.58%) were not detected by SDS-PAGE. Conclusions: Analysis of 94 OCM by SDS-PAGE showed several significant correlates, but their specifications will be based on further immunoblot research.

• MeSH
• aglutinace spermií MeSH
• cervikální hlen imunologie   MeSH
• elektroforéza metody   MeSH
• fertilizace in vitro MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• imunoglobuliny analýza   MeSH
• molekulová hmotnost MeSH
• protilátky MeSH
• ženská infertilita diagnóza   etiologie   terapie   MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH

• MeSH
• dodecylsíran sodný MeSH
• indikátory a reagencie MeSH
• povrchově aktivní látky analýza   MeSH
• Publikační typ
• farmakopea MeSH

• MeSH
• dodecylsíran sodný chemie   MeSH
• elektroforéza kapilární metody   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH

• MeSH
• dodecylsíran sodný MeSH
• kultivační média MeSH
• Mycobacterium tuberculosis růst a vývoj   MeSH
• sputum analýza   MeSH