Specifické přestavby chromozómů představují významné cytogenetické charakteristiky nádorových buněk a mnohočetný myelom (MM) není výjimkou. Změny v karyotypu jsou často doprovázeny řadou epigenetických modifi kací, jak na úrovni DNA, tak i histonů. Mnoho změn v methylacích DNA nebo methylačních a acetylačních profi lech histonů bylo popsáno pro geny zodpovědné za nádorovou transformaci buněk. Ve sdělení uvádíme přehled námi používaných metod při studiu epigenetiky u mnohočetného myelomu.
Chromosomal rearrangements can be frequently observed in tumor cells and multiple myeloma is not an exception. Karyotypic abnormalities of MM are accompanied by changes in the epigenome, including aberrant DNA/histone methylation and histone acetylation. Changes in DNA and/or histone methylation and histone acetylation were described for genes responsible for tumor cell transformation. Here we present methods used to study multiple myeloma epigenetics.
- MeSH
- chromatinová imunoprecipitace * MeSH
- DNA analýza MeSH
- epigeneze genetická * genetika MeSH
- epigenomika metody MeSH
- exprese genu MeSH
- histony genetika MeSH
- lidé MeSH
- mnohočetný myelom diagnóza genetika MeSH
- polymerázová řetězová reakce * MeSH
- výzkumný projekt MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- přehledy MeSH
V našich experimentech jsme se zaměřili na studium CD138+ a CD138- buněk izolovaných z kostní dřeně pacientů s diagnostikovaným mnohočetným myelomem (MM). Studovali jsme epigenetické modifi kace u myelomových buněčných linií, které byly ovlivněny klinicky využívanými cytostatiky. Chromatinová imunoprecipitace (ChIP) v kombinaci s polymerázovou řetězovou reakcí (PCR) nám umožnila studovat epigenetické profi ly, jako je H3K9 acetylace a H3K9 dimethylace v promotorech a exonech genů, které jsou zodpovědné za patogenezi MM. Epigenetické modifi kace těchto lokusů byly rovněž analyzovány u myelomových buněčných linií po ovlivnění vybranými cytostatiky. Pomocí ChIP-on-chip microarray analýzy jsme studovali v promotorech stovek genů zastoupení H3K9 acetylace, která je spojována se zvýšenou genovou expresí. Studium epigenetických změn u nádorových buněk je v současné době otázkou základního výzkumu. Naše výsledky ukazují originální výstupy z ChIP-PCR a ChIP-on-chip analýz u buněk pacientů s diagnostikovaným MM a buněčných linií ovlivněných cytostatiky. Naše experimenty poskytují užitečný návod, jak testovat a posoudit terapeutický potenciál cytostatik, které významně ovlivňují histonový kód.
Epigenetic changes such as histone acetylation and di-methylation at promoters and coding regions of genes which play an important role in the pathogenesis of multiple myeloma (MM) can be analyzed using methods such as chromatin immunoprecipitation (ChIP) in combination with polymerase chain reaction (PCR). We have studied epigenetic changes in MM cells treated by selected cytostatics that are used in MM therapy. ChIP-on-chip or with microarrays (chip) analyses of histone acetylation enabled us to study epigenetic status of hundreds of genes after cytostatic treatment. This type of epigenetic modifi cation is associated with increased gene expression. We have applied the ChIP-PCR and ChIP-on-chip methods to study epigenetics in MM cell lines as well as in clinical samples. Our experiments have led to the development of a useful method of assessing the therapeutic potential of cytostatic agents which have a signifi cant impact on the histone code.
- MeSH
- acetylace * účinky léků MeSH
- antitumorózní látky alkylující MeSH
- chromatinová imunoprecipitace metody MeSH
- cytostatické látky farmakologie MeSH
- epigeneze genetická * genetika MeSH
- histony genetika MeSH
- kostní dřeň MeSH
- lidé MeSH
- melfalan farmakologie MeSH
- mnohočetný myelom * genetika patologie MeSH
- polymerázová řetězová reakce MeSH
- syndekan-1 MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Rodina lidských MAGE genů, které patří mezi tzv. nádorové testikulární antigeny (CTA), kóduje produkty, které mohou být rozpoznávány autologními cytotoxickými T lymfocyty. Pro skupinu CTA je charakteristická exprese u mnoha typů nádorů, v normální zdravé tkáni exprese těchto antigenů popsána nebyla s výjimkou varlete a placenty. CT antigeny jsou hojně exprimovány u mnohočetného myelomu a tím reprezentují vhodné kandidáty pro nádorově specifi ckou imunoterapii MM. Korelace mezi expresí těchto genů a stádiem onemocnění je již známá. Analyzovali jsme expresi genů MAGE-A1 a MAGE-A3 v kostní dřeni u souboru pacientů s monoklonální gamapatií (MGUS) a u pacientů časného a pokročilého stádia mnohočetného myelomu.
The human MAGE gene family which is a group of „cancer/testis antigens“ (CTA) encodes products that can be recognized by autologous cytotoxic T cells. CT antigens are expressed in several malignant tumors, but not in normal tissues except for testis and placenta. CT antigens are frequently expressed in MM and represents promising candidates for cancer- specifi c immunotherapy in multiple myeloma. An obvious correlation between the expression of these genes and the stage of the disease has been observed. We examined the expression of MAGE-A1 and MAGE-A3 in bone marrow in a group of patiens with monoclonal gammapathy and in patients with early and advanced stage of the multiple myeloma.
- MeSH
- antigeny nádorové analýza diagnostické užití MeSH
- dospělí MeSH
- exprese genu * MeSH
- glukosa-6-fosfatasa genetika MeSH
- kvantitativní polymerázová řetězová reakce * MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mnohočetný myelom * genetika MeSH
- monoklonální gamapatie nejasného významu * genetika MeSH
- nádorové biomarkery MeSH
- nádorové proteiny genetika MeSH
- RNA analýza MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- stupeň závažnosti nemoci MeSH
- testikulární nádory * diagnóza genetika MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Studium polymorfizmů v genech asociovaných s mnohočetným myelomem (MM) je atraktivní oblastí výzkumu, který může přispět k celkovému pochopení této nemoci. Výzkumy v oblasti polymorfi zmů u MM jsou zatím na experimentální úrovní. Cílem této práce je demonstrovat na vybraných zahraničních prácích možnost klinického využití polymorfi zmů v oblasti MM.
Study of polymorphisms in genes associated with multiple myeloma (MM) is promising fi eld of research. Study of this field could bring important piece to a global understanding of this illness. Research of polymorphisms associated with MM still remain at experimental stage. The aim of this work is to demonstrate a possible clinical utilization of polymorphisms in MM field.
- MeSH
- jednonukleotidový polymorfismus * genetika MeSH
- lidé MeSH
- mnohočetný myelom genetika MeSH
- molekulární biologie MeSH
- oprava DNA MeSH
- výzkumný projekt MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Základní metodou pro studium exprese proteinů je kombinace dvourozměrné elektroforézy s hmotnostní spektrometrií. Pro analýzu proteomu u pacientů s mnohočetným myelomem je možno využít plazmatické buňky či plazmu pacientů před léčbou, po léčbě a v průběhu onemocnění, což umožní monitorování léčebných odpovědí a možnost objevení nových biomarkerů zodpovědných za rezistenci či senzitivitu k podávanému léčivu.
Two-dimensional gel electrophoresis combined with mass spectrometry has become a fundamental technique for the study of protein expression. Proteomic analysis of plasma cells or plasmatic proteins can be done before and after treatment. Proteomics offers the possibility of identifi cation of disease-associated protein markers for prognostic evaluation and for the selection of targets for specific drug therapy.
- MeSH
- 2D gelová elektroforéza metody MeSH
- exprese genu MeSH
- hmotnostní spektrometrie MeSH
- krevní plazma cytologie MeSH
- laboratoře MeSH
- lidé MeSH
- mnohočetný myelom * genetika MeSH
- postup MeSH
- proteiny analýza MeSH
- proteomika * metody MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Dokonalé poznání klíčových molekul signálních drah je atraktivní strategií pro vývoj a volbu nových mnohem efektivnějších léků. Tato práce se zaměřuje na využití proteomických metod při studiu mnohočetného myelomu a předkládá stručný přehled doposud publikovaných zahraničních prací zaměřených na toto téma.
Comprehensive knowledge of signaling pathways in cancer should lead to the development of novel and more effective treatment strategies. This review focuses on applications of proteomics in multiple myeloma and includes a brief literature survey of this topic.
- MeSH
- lidé MeSH
- mnohočetný myelom * genetika patofyziologie MeSH
- molekulární biologie MeSH
- proteiny analýza MeSH
- proteomika * metody MeSH
- signální transdukce MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Měření mikrovaskulární density (MVD) je první metodou hodnocení angiogeneze u mnohočetného myelomu. Hlavním cílem této práce bylo zavedení standardní metodiky a získání údajů o silném prognostickém znaku v našich podmínkách. Hodnoceno bylo celkem 59 vzorků kostní dřeně pacientů s mnohočetným myelomem, lečených podle jednotného schématu. Pacienti byli rozděleni na skupiny s nízkou, střední a vysokou MVD. Zastoupení v jednotlivých skupinách bylo následující : 17 pacientů s nízkým stupněm, 28 se středním a 14 pacientů s vysokým stupněm MVD. Byla provedena korelace s dobou přežití pacientů a stupněm mikrovaskulární denzity a bylo statisticky signifi kantně prokázáno (p = 0,002), že vysoká mikrovaskulární denzita (medián přežití 31 měsíců) úzce koreluje se špatnou prognózou mnohočetného myelomu. U pacientů s nízkým stupněm MVD je naopak medián přežití více než dvojnásobný (78 měsíců).
Bone marrow microvascular density evaluation is a confi rmed prognostic factor in myeloma patients. We described our primary results and experiencies with this Metod. We evaluated together 59 patients bone marrow samples, who were treated according to same protocol. Patients were diveded into three groups. Patients with low degree of MVD 29% (17/59) , 47% (28/59) patients with midle degree of MVD and 24% (14/59) patients with high degree of MVD. Patients with high degree of MVD had statisticaly signifi cantly (p=0,002) decreased median of overall survival (31month) comparable to patients with low degree of MVD (78 month).
- MeSH
- biopsie MeSH
- imunohistochemie metody MeSH
- kostní dřeň krevní zásobení MeSH
- lidé MeSH
- mnohočetný myelom * krevní zásobení MeSH
- patologická angiogeneze * diagnóza MeSH
- prognóza MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Real-time PCR je citlivá metoda pro analýzu RNA založená na základě měření fl uorescence. Je využívána v základním výzkumu, molekulární medicíně a v biotechnologiích. Kvantitativní PCR je jednoduchá, s vysokou citlivostí a spolehlivostí. Tato technika se rychle rozvíjí s objevem nových enzymů, chemikálií a přístrojů a slouží mimo jiné k potvrzení dat získaných pomocí sledování genové exprese mikročipovou analýzou. Tato práce seznamuje s principem real-time PCR a popisuje její využití ve studiu mnohočetného myelomu a celkově v hematologii.
Real-time PCR is a sensitive method for RNA analysis based on fl uorescence measurement. It is used in basic research, applied molecular medicine, and biotechnology. Real-time PCR assays are easy to perform and combine high sensitivity with reliability. The technology is evolving rapidly with the introduction of new reagents and instrumentation. It can be used for the confi rmation of data acquired by microarray analysis of gene expression. We review basic principles of real-time PCR and describe its application in hematology and especially in multiple myeloma research.
Heterogenní podstata mnohočetného myelomu a nedostatečnost současných klasifi kačních systémů a laboratorních parametrů neumožňuje přesné stanovení vysoce rizikových případů s MM (high-risk, HR). Potřeba nových prognostických nástrojů vedla k vytvoření řady klasifi kačních schémat defi nujících jednotlivé varianty MM na základě genetických/cytogenetických markerů získaných analýzou expresních profi lů a pomocí cytogenetických technik.
Heterogeneity of multiple myeloma and insuffi ciency of current classifi cation systems and laboratory parameters do not facilitate defi nition of patients with high-risk outcome. The need of new prognostic tools lead to the range (in creation of plenty) of classification scheme describing variants of MM based on detection of genetics/cytogenetics markers by gene expression profi ling and cytogenetics.
Význam inhibitorů angiogeneze na rozdíl od aktivátorů není u mnohočetného myelomu doposud zcela jasně defi nován. Naší hypotézou, kterou jsme ověřovali v této práci, bylo zvýšení hladiny inhibitorů u pacientů s dobrou léčebnou odpovědí, tedy zvýšená inhibice angiogeneze u těchto pacientů. ELISA metodou byly měřeny hladiny aktivátorů a inhibitorů angiogeneze v periferní plazmě u celkem 88 pacientů a plazmě kostní dřeně u celkem 95 pacientů. Pacienti byli rozděleni na skupiny podle dosažené léčebné odpovědi na tři skupiny: 1. alespoň velmi dobrá parciální remise (VGPR), 2. parciální remise (PR), 3. nedostatečná léčebná odpověď. Bylo porovnáno, zda se liší hladiny jednotlivých faktorů měřených v době stanovení diagnozy mezi pacienty s rozdílnou léčebnou odpovědí. Výsledky u skupiny 41 pacientů s ≥VGPR, byly zaznamenány signifi kantně nižší hodnoty HGF než u skupiny 33 pacientů s dosaženou PR a u 14 pacientů s nedostatečnou léčebnou odpovědí. Stejně tak v plazmě kostní dřeně byla hodnota HGF nižší u pacientů s dosažena VGPR oproti ostatním. U parametru thrombospondin byl v kostní dřeni prokázán statisticky signifi kantní rozdíl mezi jednotlivými skupinami. U 14 pacientů s nedostatečnou odpovědí byla v porovnání s 36 pacienty s dosaženou, PR statisticky signifi kantně nižší hodnota trombospondinu; p=0,036. Rovněž tak pacienti s dosaženou ≥VGPR vykazovali statisticky signifikantně vyšší hodnotu trombospondinu oproti pacientům s nedostatečnou léčebnou odpovědí (p=0,001) a skupině pacientů s PR (p=0,049). Hodnoty VEGF, FGF, angiostatinu a endostatinu se v jednotlivých skupinách nelišily v PP ani PKD.
Angiogenesis is involved in the development and progression of multiple myeloma (MM.) Role of angiogenesis activators in myeloma seems to be confi rmen but role of angiogenesis inhibitors in MM remains very unclear. The aim of this study was to evaluate the role of VEGF, HGF, bFGF, thrombospondin, endostatin, and angiostatin peripheral plasma (PP) and bone marrow plasma (BM)levels in a group of patients with MM who underwent autologous stem cell transplant (ASCT) and their infl uence on treatment response. Patients were divided into three groups according to treatment response: group A) 43 patients who achieved at least very good partial response (VGPR); group B) 35 patients who achieved partial response (PR) ; group C) 14 patients who did not achieved evenPR. HGF concentration at the time of diagnosis in both PP and BM is signifi cantly lower at group A (PP-median=472 pg/L; 95%IS 417-823pg/L. BM-median= 886 pg/L; 95%IS 928-2111pg/L) than at group B (PP-median=623 pg/L; 95%IS 493-990pg/L;/p= 0,025/. BM-median= 1165 pg/L; 95%IS 1140-2656pg/L/;p= 0,001/ ) and group C (PP-median=1870 pg/L; 95%IS 522-4971pg/L;/p= 0,001/. BM-median= 2605 pg/L; 95%IS 1328-5355pg/L/;p= 0,001/ ). Thrombospondin concentration at the time of diagnosis only in BM not in PP is signifi cantly lower at group C (BM-median= 188 pg/L; 95%IS 38-678pg/L) than at group B (BM-median= 303 pg/L; 95%IS 249-705p/L/;p= 0,036) and group A (BM-median= 351pg/L; 95%IS 437-916pg/L/;p= 0,001/. VEGF, bFGF, endostatin and angiostatin concentrations at diagnosis time did not differ signifi cantly in PP and BM in patiensts with VGPR, PR and no response. Our results confi rmed that key angiogenesis activators in MM is HGF. If the treatment is successful low levels of HGF occurs only. There is important fi nding that thrombospondin in BM is higher in patients with successful treatment. It means, that angiogenesis is more inhibited in patients with VGPR than in other.
- MeSH
- autologní transplantace MeSH
- ELISA * MeSH
- indukce remise * MeSH
- kostní dřeň krevní zásobení MeSH
- lidé MeSH
- mnohočetný myelom krevní zásobení MeSH
- patologická angiogeneze diagnóza MeSH
- prognóza MeSH
- transplantace hematopoetických kmenových buněk * MeSH
- výsledek terapie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
