Deficit kobalaminu (Cbl, B12) se projevuje v kojeneckém věku neprospíváním, makrocytární anemií, hypotonií, opožděním/regresem vývoje, mikrocefalií a epilepsií. Jednou z příčin deficitu B12 u novorozenců je in utero získaný deficit maternálního původu. Po vzoru jiných zemí EU představujeme průběžné výsledky pilotního projektu novorozeneckého laboratorního screeningu (NLS) deficitu Cbl probíhajícího na spolupracujících pražských pracovištích. Metody: Pro podezření na deficit B12 stačí odchylka alespoň 1 primárního markeru: propionylkarnitin > 3,8 μmol/l, poměr propionylkarnitin/acetylkarnitin > 0,3, methionin < 7 μmol/l, poměr propionylkarnitin/methionin > 0,5 (stanoveno tandemovou hmotnostní spektrometrií). Jako druhostupňové markery využíváme kyselinu methylmalonovou (MMA) > 2,5 μmol/l a celkový homocystein (tHcy) > 12 μmol/l. U pozitivních nálezů provádíme u novorozence i matky test vstřebávání Cbl a stanovujeme celkový B12 (stanoveno elektrochemiluminiscenční imunoanalýzou), holoTC (stanoveno chemiluminiscenční imunoanalýzou), foláty (stanoveno elektrochemiluminiscenční imunoanalýzou), sérovou MMA (stanoveno kapalinovou chromatografií s tandemovou hmotnostní spektrometrií), tHcy (stanoveno vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií) a vybrané sirné metabolity. U matek dále stanovujeme markery chronické gastritidy. Výsledky: K 21. 02. 2024 byl deficit B12 vyšetřen v 20 419 krevních kapkách (86,1 % z celkového počtu odebraných vzorků). 863 novorozenců mělo pozitivní alespoň 1 z prvostupňových markerů (2nd tier 4,2 %). Celkově jsme zachytili 6 novorozenců s elevovanými hodnotami MMA, ve 4 případech se jednalo o pravou pozitivitu, 1 případ byl falešně pozitivní, 1 případ byl záchyt kombinované malonové/methylmalonové acidurie. V našich předběžných výsledcích dosahoval neonatální deficit B12 incidenci 1 : 5105 (95% CI 1 : 1994 – 1 : 8735). Závěr: Předběžná data z naší studie prokazují vysokou incidenci neonatálního deficitu B12 ve spolupracujících pražských porodnicích. Výsledky mohou sloužit jako vědecký podklad k rozšíření NLS v České republice. Práce vznikla s podporou grantového projektu AZV NU22-07-00126, RVO-VFN64165 a programu Cooperatio, vědní oblasti „Pediatrie“ a „Metabolické a endokrinní nemoci“.
Cobalamin (Cbl, B12) deficiency manifests in infancy as failure to thrive, macrocytic anemia, hypotonia, developmental delay/regression, microcephaly, and epilepsy. One of the causes of B12 deficiency in newborns is in-utero acquired deficiency caused by maternal deficiency. Following the example of other EU countries, we present interim data from a pilot project of newborn laboratory screening (NLS) for Cbl deficiency, which has been conducted at cooperating Prague hospitals. Methods: At least one abnormal primary marker is required for suspected B12 deficiency: propionylcarnitine > 3.8 μmol/l, propionylcarnitine/acetylcarnitine ratio > 0.3, methionine < 7 μmol/l, propionylcarnitine/methionine ratio > 0.5 (determined by tandem mass spectrometry). Secondary markers include methylmalonic acid (MMA) > 2.5 μmol/l and total homocysteine (tHcy) > 12 μmol/l. In the case of NLS positivity, both the newborn and the mother undergo a Cbl absorption test. We determine total B12 (measured by electrochemiluminescence immunoassay), holoTC (measured by chemiluminescence immunoassay), folates (measured by electrochemiluminescence immunoassay), serum MMA
- MeSH
- adherence k farmakoterapii * MeSH
- alopurinol * terapeutické užití MeSH
- antiuratika * terapeutické užití MeSH
- dna (nemoc) farmakoterapie MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- oxypurinol * terapeutické užití MeSH
- senioři MeSH
- Check Tag
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- dopisy MeSH
Direct infusion of lipid extracts into the ion source of a mass spectrometer is a well-established method for lipid analysis. In most cases, nanofluidic devices are used for sample introduction. However, flow injection analysis (FIA) based on sample infusion from a chromatographic pump can offer a simple alternative to shotgun-based approaches. Here, we describe important modification of a method based on FIA and tandem mass spectrometry (MS/MS). We focus on minimizing contamination of the FIA/MS both to render the lipidomic platform more robust and to increase its capacity and applicability for long-sequence measurements required in clinical applications. Robust validation of the developed method confirms its suitability for lipid quantitation in human plasma analysis. Measurements of standard human plasma reference material (NIST SRM 1950) and a set of plasma samples collected from kidney cancer patients and from healthy volunteers yielded highly similar results between FIA-MS/MS and ultra-high-performance supercritical fluid chromatography (UHPSFC)/MS, thereby demonstrating that all modifications have practically no effect on the statistical output. Newly modified FIA-MS/MS allows for the quantitation of 141 lipid species in plasma (11 major lipid classes) within 5.7 min. Finally, we tested the method in a clinical laboratory of the General University Hospital in Prague. In the clinical setting, the method capacity reached 257 samples/day. We also show similar performance of the classification models trained based on the results obtained in clinical settings and the analytical laboratory at the University of Pardubice. Together, these findings demonstrate the high potential of the modified FIA-MS/MS for application in clinical laboratories to measure plasma and serum lipid profiles.
- MeSH
- krevní plazma chemie MeSH
- lidé MeSH
- lipidomika * metody MeSH
- lipidy analýza MeSH
- průtoková injekční analýza MeSH
- tandemová hmotnostní spektrometrie * metody MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
Chirurgická léčba nehmatných lézí prsu vyžaduje jejich přesnou předoperační lokalizaci. Mezi řadou lokalizačních metod v poslední době vyniká lokalizace pomocí radioaktivního jódového zrna. Uvádíme první zkušenosti s touto metodou na našem pracovišti. Popisujeme strukturu lokalizačního jódového zrna, princip předoperačního zavedení a peroperační detekce zrna, postup při transportu resekátu, histopatologickém vyšetření, uchování a likvidaci zrna, aspekty radiační ochrany.
Surgical therapy of non-palpable malignant breast lesions requires precise preoperative localisation. Recently, radioactive iodine seed localisation has excelled among the number of localisation methods. We present our first experience with this method at our department. We describe the structure of the radioactive iodine seed, the principles of preoperative localisation and peroperative detection of the seed, the specimen transport process, histopathological examination, storage and disposal of the seed, as well as aspects of radiation protection.
- Klíčová slova
- radioaktivní zrno, nehmatné léze prsu,
- MeSH
- léčba šetřící orgány metody MeSH
- lidé MeSH
- mastektomie MeSH
- nádory prsu * chirurgie MeSH
- radioizotopy jodu MeSH
- segmentální mastektomie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- přehledy MeSH
PURPOSE: To assess how the current practice of newborn screening (NBS) for homocystinurias compares with published recommendations. METHODS: Twenty-two of 32 NBS programmes from 18 countries screened for at least one form of homocystinuria. Centres provided pseudonymised NBS data from patients with cystathionine beta-synthase deficiency (CBSD, n = 19), methionine adenosyltransferase I/III deficiency (MATI/IIID, n = 28), combined remethylation disorder (cRMD, n = 56) and isolated remethylation disorder (iRMD), including methylenetetrahydrofolate reductase deficiency (MTHFRD) (n = 8). Markers and decision limits were converted to multiples of the median (MoM) to allow comparison between centres. RESULTS: NBS programmes, algorithms and decision limits varied considerably. Only nine centres used the recommended second-tier marker total homocysteine (tHcy). The median decision limits of all centres were ≥ 2.35 for high and ≤ 0.44 MoM for low methionine, ≥ 1.95 for high and ≤ 0.47 MoM for low methionine/phenylalanine, ≥ 2.54 for high propionylcarnitine and ≥ 2.78 MoM for propionylcarnitine/acetylcarnitine. These decision limits alone had a 100%, 100%, 86% and 84% sensitivity for the detection of CBSD, MATI/IIID, iRMD and cRMD, respectively, but failed to detect six individuals with cRMD. To enhance sensitivity and decrease second-tier testing costs, we further adapted these decision limits using the data of 15 000 healthy newborns. CONCLUSIONS: Due to the favorable outcome of early treated patients, NBS for homocystinurias is recommended. To improve NBS, decision limits should be revised considering the population median. Relevant markers should be combined; use of the postanalytical tools offered by the CLIR project (Collaborative Laboratory Integrated Reports, which considers, for example, birth weight and gestational age) is recommended. tHcy and methylmalonic acid should be implemented as second-tier markers.
- MeSH
- acylkarnitin metabolismus MeSH
- fenylalanin metabolismus MeSH
- glycin-N-methyltransferasa nedostatek metabolismus MeSH
- homocystein metabolismus MeSH
- homocystinurie diagnóza metabolismus MeSH
- karnitin analogy a deriváty metabolismus MeSH
- kyselina methylmalonová metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- methionin metabolismus MeSH
- methylentetrahydrofolátreduktasa (NADPH2) nedostatek metabolismus MeSH
- novorozenec MeSH
- novorozenecký screening metody MeSH
- psychotické poruchy diagnóza metabolismus MeSH
- svalová spasticita diagnóza metabolismus MeSH
- vrozené poruchy metabolismu aminokyselin diagnóza metabolismus MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- novorozenec MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Novorozenecký screening dědičných metabolických poruch je preventivní celopopulační program, který umožňuje včasnou diagnostiku a účinnou léčbu pacientů s tímto typem vzácných nemocí a který podstatně zlepšuje kvalitu jejich života. Novorozenecké screeningové programy se díky pokrokům v technologiích a léčbě celosvětově rozšiřují. V České republice byl novorozenecký screening zahájen v roce 1975 vyhledáváním fenylketonurie, pro další dědičné metabolické poruchy se rozšiřoval v letech 2009 a 2016. Nyní se vyhledává 15 cílových dědičných metabolických poruch, screeningový program může zachytit i další onemocnění, která nejsou primárně vyhledávána. Základní metodou pro novorozenecký screening dědičných metabolických poruch je stanovení vybraných metabolitů pomocí tandemové hmotnostní spektrometrie nebo stanovení enzymových aktivit v suché krevní kapce. Správná technika odběru krve na speciální filtrační papírky je základním předpokladem pro získání relevantních výsledků. Jako všechny screeningové programy i novorozenecký screening poskytuje falešně pozitivní nálezy, pravděpodobnost falešné pozitivity při screeningu dědičných metabolických poruch je v současnosti 1:1000. Mnohem vzácnější jsou nálezy falešně negativní, ale i na ně je třeba v klinické praxi myslet. Od roku 2010 bylo novorozeneckým screeningem zachyceno celkem 268 pacientů s některou z cílových nemocí nebo klinicky relevantním stavem jako je deficit vitaminu B12 či parciální deficit biotinidázy. Celková incidence 15 dědičných metabolických poruch zjišťovaných novorozeneckým screeningem v populaci České republiky je přibližně 1:2500 a je srovnatelná s dobře fungujícími zahraničními screeningovými programy.
Newborn screening of inherited metabolic diseases is a preventative program; it enables an early diagnosis and effective treatment of patients with these rare diseases and thus improves their quality of life. Newborn screening programs are expanding worldwide due to the progress in technology and treatment. In the Czech Republic, the newborn screening program started by detecting phenylketonuria in 1975 and expanded gradually by addition of other inherited metabolic disorders in 2009 and 2016. At present 15 inherited metabolic disorders are searched for as primary targets, however, the screening program may detect other diseases that are not primarily searched for. Determination of metabolites by tandem mass spectrometry or of enzyme activities by fluorimetry in dried blood spots are the primary approaches for newborn screening of inherited metabolic disorders. The quality of dried blood spots is the prerequisite for achieving relevant results. Newborn screening may generate false positive results; the likelihood of false positivity in screening of inherited metabolic disorders is currently 1:1000. False negative results are rare, but it is necessary to think about such possibility. Since 2010, a total of 268 patients with targeted diseases or relevant condition such as vitamin B12 deficiency or partial biotinidase deficiency were detected. The overall incidence of 15 inherited metabolic disorders in newborn screening in the population of the Czech Republic is approximately 1:2500 and it is comparable to well-functioning screening programs abroad.
- MeSH
- lidé MeSH
- novorozenec MeSH
- novorozenecký screening * metody MeSH
- tandemová hmotnostní spektrometrie metody MeSH
- test suché kapky krve metody MeSH
- vrozené poruchy metabolismu * diagnóza MeSH
- vzácné nemoci diagnóza MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- novorozenec MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- přehledy MeSH
- Geografické názvy
- Česká republika MeSH
BACKGROUND: Disorders of homocysteine and B-vitamin metabolism represent a significant problem in clinical practice. Establishing the diagnosis requires specialized tests with demanding preanalytical requirements. To advance the detection of patients with these disorders, we developed a method for the simultaneous determination of cystathionine (Cysta), methionine (Met) and total homocysteine (tHcy) in dried blood spots (DBSs). METHODS: A punch from a DBS sample was mixed with a solution of isotopically labeled internal standards, and analytes were extracted using methanol/0.1% formic acid/0.5mol/L dithiothreitol. The extract was injected into an LC-MS/MS system operating in MRM mode. RESULTS: The analytical performance of the method employing DBS is adequate for its purpose and the type of sample. Compared with Cysta, tHcy and Met plasma levels, our method exhibited a negative bias between -3.8% and -42.2% due to the lower concentrations of these analytes in erythrocytes. The tHcy level and the Met/Cysta ratio in DBS enabled the clear detection of 12 patients with disorders of transsulfuration and with genetic and nutritional remethylation defects. CONCLUSIONS: The ease of collecting and transporting DBS samples may advance diagnostic procedures in patients with neuropsychiatric disorders and thromboembolism. Consequently, this approach may facilitate detection and simplify the monitoring of patients with homocystinuria.
- MeSH
- chromatografie kapalinová metody využití MeSH
- cystathionin krev MeSH
- dítě MeSH
- homocystein krev MeSH
- homocystinurie krev diagnóza MeSH
- kojenec MeSH
- lidé MeSH
- management nemoci MeSH
- methionin krev MeSH
- mladiství MeSH
- novorozenec MeSH
- předškolní dítě MeSH
- tandemová hmotnostní spektrometrie metody využití MeSH
- test suché kapky krve metody využití MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- kojenec MeSH
- lidé MeSH
- mladiství MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- novorozenec MeSH
- předškolní dítě MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- randomizované kontrolované studie MeSH
- srovnávací studie MeSH
