Bude využita a zavedena metoda genového skanování, komparativní genomová hybridizace (CGH) a fluorescenční hybridizace in situ (FISH) k rychlé a časné detekci genových a chromosomálních mutací a k určení pohlaví z mikrokvant buněk. Budou získány biopsiíblastomer, výplachem dutiny děložní, coelocentesou, biopsií choria či placenty, amniocentézou a kordocentézou od I. do III. trimestru.Zdokonalení časné prenatální prevence vrozených vad a chorob už od preimplantační fáze vývoje.; We will use methods of genescanning,comparative genomic hybrization(CGH),fluorescent in situ hybridization(FISH) for rapid detection of genomic and chromosomal mutations and/or sexing from minimal amounts of cells. These cells will be obtained by blastomere biopsy,uterine lavage,coelomocentesis,chorion or placental biopsy,amnicentesis,cordocentesis during the period from the Ist to the IIIrd trimester of gravidity. We will improve early prenatal prevention of most common inborn malformations and diseases since the preimplantation stage of embryonal development.

• MeSH
• genetické poradenství využití   metody   MeSH
• genetické techniky využití   MeSH
• genetické testování využití   metody   MeSH
• hybridizace in situ fluorescenční využití   metody   MeSH
• polymerázová řetězová reakce využití   metody   MeSH
• prenatální diagnóza využití   metody   MeSH
• reprodukční lékařství metody   MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• chemie, klinická chemie
• genetika, lékařská genetika
• reprodukční lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Monografie, pojednávající o základech prenatální genetické diagnostiky, prevenci a léčbě, chce přispět k omezení narození dětí s těžkými poruchami.

• MeSH
• genetické nemoci vrozené prevence a kontrola   diagnóza   ultrasonografie   MeSH
• genetické poradenství MeSH
• genetické testování MeSH
• prenatální diagnóza metody   klasifikace   MeSH
• ultrasonografie prenatální využití   metody   klasifikace   MeSH
• Publikační typ
• monografie MeSH

• Konspekt
• Gynekologie. Porodnictví
• NLK Obory
• chemie, klinická chemie
• gynekologie a porodnictví
• embryologie a teratologie
• genetika, lékařská genetika
• gynekologie a porodnictví

• MeSH
• diagnostické techniky porodnicko-gynekologické MeSH
• novorozenecký screening MeSH
• prenatální diagnóza MeSH
• Společenství nezávislých států MeSH
• Publikační typ
• abstrakt z konference MeSH
• Geografické názvy
• Evropa MeSH
• Rusko MeSH
• Společenství nezávislých států MeSH
• východní Evropa MeSH

• Konspekt
• Pediatrie
• NLK Obory
• gynekologie a porodnictví
• perinatologie a neonatologie

• Publikační typ
• abstrakt z konference MeSH

We report a large genomic deletion of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene, viz., a deletion that is frequently observed in Central and Eastern Europe. The mutation, termed CFTRdele2,3(21 kb), deletes 21,080 bp spanning introns 1-3 of the CFTR gene. Transcript analyses have revealed that this deletion results in the loss of exons 2 and 3 in epithelial CFTR mRNA, thereby producing a premature termination signal within exon 4. In order to develop a simple polymerase chain reaction assay for this allele, we defined the end-points of the deletion at the DNA sequence level. We next screened for this mutation in a representative set of European and European-derived populations. Some 197 CF patients, including seven homozygotes, bearing this mutation have been identified during the course of our study. Clinical evaluation of CFTRdele2,3(21 kb) homozygotes and a comparison of compound heterozygotes for deltaF508/CFTRdele2,3(21 kb) with pairwise-matched deltaF508 homozygotes indicate that this deletion represents a severe mutation associated with pancreatic insufficiency and early age at diagnosis. Current data show that the mutation is particularly common in Czech (6.4% of all CF chromosomes), Russian (5.2%), Belorussian (3.3%), Austrian (2.6%), German (1.5%), Polish (1.5%), Slovenian (1.5%), Ukrainian (1.2%), and Slovak patients (1.1%). It has also been found in Lithuania, Latvia, Macedonia and Greece and has sporadically been observed in Canada, USA, France, Spain, Turkey, and UK, but not in CF patients from Bulgaria, Croatia, Romania or Serbia. Haplotype analysis has identified the same extragenic CF-haplotype XV-2c/KM. 19 "A" and the same infrequent intragenic microsatellite haplotype 16-33-13 (IVS8CA-IVS 17bTA-IVS 17bCA) in all examined CFTRdele2,3(21 kb) chromosomes, suggesting a common origin for this deletion. We conclude that the 21-kb deletion is a frequent and severe CF mutation in populations of Eastern- and Western-Slavic descent.

• MeSH
• alely MeSH
• cystická fibróza epidemiologie   genetika   MeSH
• dítě MeSH
• fenotyp MeSH
• frekvence genu MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mutační analýza DNA MeSH
• novorozenec MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí MeSH
• předškolní dítě MeSH
• protein CFTR * genetika   MeSH
• sekvenční delece MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• novorozenec MeSH
• předškolní dítě MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• Geografické názvy
• Evropa MeSH

Cíl studie: Porucha cytochrom c oxidázy (COX) se projevuje závažným postižením funkce centrál-ní nervové soustavy, svalů nebo myokardu. Prenatální diagnostika je obtížná, protože poruchaCOX může být způsobena mutacemi genů v jaderné nebo mitochondriální DNA. Studie přinášívýsledky prenatální diagnostiky u dvou rodin, ve kterých zemřelo první dítě na generalizovanouporuchu COX způsobenou nízkým obsahem enzymu.Předmět studie: V první rodině podstoupila matka během druhého těhotenství amniocentézu.V kultivovaných amniocytech byla nalezena snížená aktivita COX a snížená produkce ATP. Napřání rodičů bylo těhotenství přerušeno a porucha COX byla následně potvrzena ve fetálníchtkáních. Ve druhé rodině se pomocí transmitochondriálních cybridů pocházejících z COX defekt-ních fibroblastů nemocného dítěte podařilo prokázat, že defekt je jaderného původu. Protože přidalším těhotenství měla matka dvojčata, byla u obou plodů provedena kombinovaná biopsie cho-riových klků s amniocentézou. Při prenatální diagnostice byly použity tři metody pro určeníporuchy COX. V kultivovaných buňkách byla měřena aktivita COX, byla studována schopnostbuněk tvořit ATP a bylo stanoveno proteinové množství komplexu COX. Výsledky všech vyšetřeníu obou plodů ukázaly normální funkci a složení COX. Obě děti jsou ve věku 2,5 let zdrávy.Závěr: Prenatální diagnostika poruch COX je dostupná v rodinách, ve kterých je onemocněnívyvoláno mutacemi v jaderných genech. Při prenatální diagnostice je vhodné charakterizovatCOX v kultivovaných amniocytech a choriových klcích na funkční, enzymatické i proteinovéúrovni.

Objective: Cytochrome c oxidase (COX) deficiency presents with severe impairment of brain,muscle or heart. Prenatal diagnosis in affected families is difficult because the disease may be caused by mutations in nuclear or mtDNA. This study shows the results of prenatal diagnosis intwo families where the first child died because of a generalised COX defect. In both cases the lowactivity of COX was accompanied by a low content of the enzyme.Subjects: In the first family the amniocentesis was performed during the second pregnancy andcultured amniocytes showed a marked decrease of COX activity and ATP production. Based ondecision of the parents the pregnancy was terminated. Analysis of the foetal tissues confirmeda generalised COX defect. In the second family the nuclear origin of the COX defect was foundusing transmitochondrial cybrids derived from COX-deficient fibroblasts of the affected child. Inthe successive pregnancy with dizygotic twins a combined amniocentesis and chorionic villi bio-psy has been performed. Prenatal diagnosis was based in both foetuses on three independentapproaches. COX activity, the ATP production and protein content of COX complex was measuredin cultivated foetal cells. The results of all investigations excluded a putative COX defect and bothchildren are healthy at the age of 2 and half years.Conclusion: Prenatal diagnosis of COX disorders is available in families with the generalised formof the disease based on a nuclear origin of COX deficiency. Three independent approaches tocharacterise COX at a functional, enzymatic and protein level may be used.

• MeSH
• deficit cytochrom-c-oxidázy MeSH
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• mitochondriální DNA MeSH
• prenatální diagnóza metody   MeSH
• respirační komplex IV analýza   MeSH
• vrozené vady diagnóza   vrozené   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH
• přehledy MeSH

• MeSH
• chorion MeSH
• dospělí MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• kultivované buňky metody   MeSH
• lidé MeSH
• placenta MeSH
• plodová voda MeSH
• prenatální diagnóza metody   MeSH
• těhotenství MeSH
• trimestry těhotenství MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• těhotenství MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH
• srovnávací studie MeSH

Cíl studie: Koncentrace jaderných erytroblastů cirkulujících v periferní krvi gravidních žen proúčely neinvazivní prenatální diagnostiky.Typ studie: Pilotní studie.Název a sídlo pracoviště: II. dětská klinika 2. LF UK, Fakultní nemocnice Motol, Praha, Českárepublika.Metodika: Z 13 - 28 ml periferní krve 78 gravidních žen v rozmezí 13. - 37. týdnu gravidity bylyizolovány mononukleární buňky. Mateřské leukocyty byly odstraněny z frakce mononukleárníchbuněk pomocí anti-CD14 a anti-CD45 monoklonálních protilátek značených superparamagnetic-kými částicemi metodou magnetické separace buněk (MACS) na zařízení VarioMACS. Jadernéerytroblasty byly následně koncentrovány z CD14 - /CD45 - frakce pozitivní selekcí pomocí anti-CD71 monoklonální protilátky na zařízení MiniMACS. Jednotlivé frakce byly analyzovány tříba-revnou analýzou na průtokovém cytometru (FACS).Výsledky: U 68 těhotných žen z 78 testovaných (87 %) byly nalezeny po dvojité magnetické separa-ci buněk (doubleMACS) zahrnující depleci leukocytů a pozitivní selekci jaderné erytroblastyv rozmezí 2x10 5 - 1,02 x 10 6 . Faktor celkového zkoncentrování se pohyboval v rozmezí 4,2 - 526,0(Ć 138,4). Z našeho souboru vyšetřených je patrné, že počet CD71 + jaderných erytroblastů koncen-trovaných metodou doubleMACS je značně individuální. Jaderné erytroblasty cirkulující v krev-ním oběhu gravidních žen bylo možno zkoncentrovat již v 13. týdnu gravidity.Závěr: Naším cílem je vypracovat a standardizovat metodu koncentrace jaderných erytroblastůcirkulujících v periferii gravidních žen a ověřit možnost použití tohoto alternativního zdroje proúčely neinvazivní prenatální diagnostiky.

Objective: Enrichment of nucleated red blood cells (NRBCs) from maternal blood for non-invasiveprenatal diagnosis.Design: Pilot study.Setting: 2 nd Clinic of Paediatrics, University Hospital Motol, Prague, Czech Republic.Methods: Mononuclear cells were isolated from 13 - 28 ml of peripheral maternal blood between 13and 37 weeks of gestation. Leukocytes from maternal peripheral blood were depleted from mono-nuclear cells by treatment with anti-CD14 and anti-CD45 microbeads and high-gradient magneticcell separation (MACS) on VarioMACS. NRBCs were sorted from CD14 - /CD45 - fraction by positiveselection using anti-CD71 microbeads on MiniMACS. All sorting steps were analysed by three-co-lour cytometric analysis with FACScan flow cytometer.Results: In 68 out of 78 pregnant woman (87 %) NRBCs were found in range 2x10 5 - 1,02 x 10 6.NRBC were enriched with an average enrichment rate of 138-fold ranging from 4 - 526 fold. In ourcohort of pregnant woman the number of isolated NRBCs was individual. We identified NRBCsfrom the 13 th week of gestation.Conclusion: The aim of the study is to establish and standardise the method of enrichment ofNRBCs from maternal blood samples and verify the applicability of this alternative source fornon-invasive prenatal diagnosis.

• MeSH
• biologický transport MeSH
• dospělí MeSH
• erytroblasty krev   MeSH
• lidé MeSH
• maternofetální výměna látek MeSH
• monoklonální protilátky diagnostické užití   MeSH
• prenatální diagnóza MeSH
• průtoková cytometrie metody   přístrojové vybavení   MeSH
• těhotenství MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• těhotenství MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Východisko. Prenatální diagnostika představuje důležitou formu prevence dědičných metabolických chorob a její dostupnost je zatím nejúčinnější pomocí postiženým rodinám. Cílem studie bylo zavedení prenatální diagnózy závažných dědičných lysozomálních onemocnění spadajících do skupiny lipidóz, mukopolysacharidóz, glykopro- teinóz a mukolipidóz. Metody a výsledky. Metodické postupy jsou založeny především na stanovení aktivit specifických lysozomálních hydroláz, které u dané choroby chybí nebo jsou neaktivní. Tyto metody byly doplněny souborem podpůrných analýz, především ultrastrukturálním důkazem lysozomálního střádání nedegradovaného substrátu, DNA analýzou proka- zující mutaci zjištěnou v rodině, event. biochemickou analýzou plodové vody. Vyšetřovaným materiálem byly nekultivované vzorky placentárních biopsií (choriové klky), kultivované vzorky buněk choriových klků a plodové vody a plodová voda. Celkem bylo sledováno 17 těhotenství v rodinách s dítětem postiženým některou z lysozomál- ních enzymopatií. Šlo o 7 různých onemocnění: GM2 gangliosidóza (2x), Fabryho choroba (3x), Krabbeho choroba (1x), Niemannova-Pickova choroba typu A (1x), mukopolysacharidóza I (5x), mukopolysacharidóza II (4x), muko- lipidóza (I-cell disease) (1x). Ve třech případech byl prokázán u plodu hluboký deficit enzymu (a-galaktosidázyA u Fabryho choroby, galaktocerebrosidázy u Krabbeho choroby a-iduronidázy u mukopolysacharidózy I) a těhoten- ství bylo na žádost matky ukončeno. Diagnóza byla potvrzena biochemickou analýzou tkání potracených plodů. U dvou z nich (Fabryho choroba a mukopolysacharidóza I) byly již ultrastrukturálně prokazatelné změny příslušného fenotypu. Ve dvou případech nepřerušeného těhotenství byl na základě snížené enzymové aktivity zjištěn heterozy- gotní stav plodu. V případě autosomálně recesivního deficitu sfingomyelinázy (Niemannova-Pickova choroba typu A) byl výsledek přímo potvrzen DNA analýzou, u gonozomálně recesivní Fabryho nemoci nepřímo rozdílem aktivit a-galaktosidázy v nekultivovaných a kultivovaných buňkách. Paralelně byl vytvořen soubor kontrolních hodnot enzymových aktivit pro jednotlivé typy zpracovávaných materiálů (nativní a kultivované choriové klky, kultivované amniocyty, supernatant plodové vody). Závěry. Dědičné lysozomální enzymopatie představují důležitou indikaci pro prenatální diagnostiku, která je na našem pracovišti dostupná. Condicio sine qua non je však biochemicky event. molekulárně geneticky definovaná porucha u probanda v rodině.

Background. Prenatal diagnosisi represents the important fprm of prevention of the inherited metabolic diseases and its accessibility becomes the most effective assistance to involved families. The aim of the study was to introduce prenatal diagnisis of major inherited lysosomal disorders of the group of lipidoses, micopolysaccharidoses, glycop- roteinoses, and mucolipidoses. Methods and Results. Methodological approach is based on the activity estimation of the specific lysosomal hydrolases that are missing or inactive. Methods were extended by a set of supportive analyses, namely by ultrastructural identification of the lysosomal storage of the non-degraded substrate, DNA analysis showing mutation in the family or by biochemical analysis of the amniotic fluid. Uncultured cultured chorionic villi, cultured amniotic fluid cells yand samples of the amniotic fluid were examined. Altogether 17 pregnancies at risk for seven different lysosomal enzymopathies were followed: GM2 gangliosidosis (2 cases), Fabra disease (3 cases), Krabbe disease (1 case), Niemann-Pick disease type A (1 case), mucopolysaccharidosis I (5 cases), mucopolysaccharidosis II (4 cases), mucolipidosis II (I-cell disease) (1 case). Profound deficiency of enzyme activities (a-galactosidase A in fabry disease, galactocerebrosidase in Krabbe disease, a-iduronidase in mucopolysaccharidosis I) was identified in three pregnancies, which were terminated on the mother´s decision. The diagnose was confirmed by the biochemical analysis of tissues of aborted foetuses. In two of them (Fabry disease, mucopolysaccharidosis I) ultrastructural sings of storage werw proved. In two cases the foetal heterozygote state was identified. In case at risk for Niemann-Pick disease type A, the diagnosis was confirmed also by DNA analysis. In the pregnancy at risk for Fabry disease, heterozygous state was confirmed indirectly according to the difference of a-galactosidase activities in cultured and uncultured cells. A set control values of enzyme activities in individual types of processed material (native and cultured chorionic villi, cultured amniocytes, and amniotic fluid supernatant) has been established. Conclusions. Inherited lysosomal enzymopathies represent important indication for prenatal diagnosis available now in our department. Condicio sine qua non is the biochemical or molecular genetic confirmation of diagnosis in the family involved.

• MeSH
• alfa-galaktosidasa MeSH
• biopsie MeSH
• choriové klky MeSH
• dospělí MeSH
• enzymy nedostatek   MeSH
• Fabryho nemoc MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• lidé MeSH
• lyzozomální nemoci z ukládání diagnóza   etiologie   MeSH
• mutační analýza DNA MeSH
• prenatální diagnóza metody   MeSH
• těhotenství MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• těhotenství MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH
• srovnávací studie MeSH

• MeSH
• choriogonadotropin analýza   MeSH
• chromozomální aberace diagnóza   MeSH
• genetické techniky MeSH
• lidé MeSH
• prenatální diagnóza MeSH
• těhotenství MeSH
• vrozené vady diagnóza   vrozené   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• těhotenství MeSH