Flow cytometric analysis of B cells and plasma cells subtypes in healthy volunteers and monoclonal gammopathy patients. Identification of clonal cells in compartment of plasma cells or B cells and their purification for other purposes. Evaluation of predictive and prognostic value of analysed markers for identification of patients with a high-risk of progression/relapse, for minimal residual disease monitoring and for assessment of the prognosis of patients.

Flowcytometrická analýza zastoupení subtypů B lymfocytů a plazmocytů u zdravých osob ve srovnání s pacienty s monoklonální gamapatií. Identifikace klonálních buněk na úrovni plazmocytů či příp. B lymfocytů a jejich separace pro účely dalších analýz. Vyhodnocení prediktivního a prognostického přínosu studovaných markerů pro identifikaci pacientů s vysokým rizikem progrese/relapsu onemocnění, pro monitorování minimální reziduální nemoci a pro určení prognózy pacientů.

• MeSH
• B-lymfocyty MeSH
• fenotyp MeSH
• mnohočetný myelom MeSH
• monoklonální gamapatie nejasného významu MeSH
• nádorová transformace buněk MeSH
• plazmatické buňky MeSH
• průtoková cytometrie MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• onkologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

• MeSH
• algoritmy * MeSH
• buňky kostní dřeně * cytologie   MeSH
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• plazmatické buňky * cytologie   MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• separace buněk * metody   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• dopisy MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• validační studie MeSH

• MeSH
• aneuploidie * MeSH
• B-lymfocyty patologie   MeSH
• centrozom * MeSH
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom * genetika   patologie   MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• Publikační typ
• dopisy MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

Pri monoklonálnej gamapatii nejasného významu (MGUS) a asymptomatickom myelóme je dlhodobé riziko progresie do aktívneho ochorenia v podobe symptomatického mnohopočetného myelómu alebo inej malignity. Prediktormi rizika malígnej transformácie MGUS môžu byť veľkosť a typ monoklonálneho imunoglobulínu (monoklonálny proteín, M-proteín, M-Ig), pomer hladín voľných ľahkých reťazcov kappa a lambda v sére, infiltrácia kostnej drene klonálnymi plazmatickými bunkami, počet cirkulujúcich klonálnych plazmatických buniek v periférnej krvi, imunofenotyp plazmocytov a iné možné rizikové faktory.

Monoclonal gammopathy of undeterminated significance (MGUS) and asymptomatic form of myeloma are associated with a long-term risk of progression to active disease symptomatic multiple myeloma or related malignancy. As far as the malignant transformation of MGUS is concerned, size and type of the serum monoclonal immunoglobulin (monoclonal protein, M-protein, M-Ig), serum kappa and lambda free light chain ratio, number of clonal plasma cells in bone marrow, number of clonal plasma cells in peripheral blood, immunophenotype of plasma cells, and another factors seem to play a predictive role.

• Klíčová slova
• asymptomatický mnohočetný myelom,
• MeSH
• buněčné klony MeSH
• chromozomální aberace MeSH
• financování organizované MeSH
• imunoglobuliny - kappa-řetězce krev   MeSH
• imunoglobuliny - lambda-řetězce krev   MeSH
• imunoglobuliny krev   MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom diagnóza   genetika   patologie   MeSH
• monoklonální gamapatie nejasného významu genetika   krev   patologie   MeSH
• nádorová transformace buněk patologie   MeSH
• nádorové cirkulující buňky MeSH
• prekancerózy diagnóza   genetika   patologie   MeSH
• prognóza MeSH
• progrese nemoci MeSH
• průtoková cytometrie využití   MeSH
• rizikové faktory MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

This manuscript is an introduction to the topic of multiple myeloma. Definition, incidence, etiology, pathogenesis and principles of diagnostics and treatment of multiple myeloma are described briefly in this work. It corresponds with Guidelines for diagnostics and treatment of the myeloma section of the Czech Hematological Society and the Czech Myeloma Group.

• Klíčová slova
• diagnostika,
• MeSH
• financování organizované MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom diagnóza   patofyziologie   terapie   MeSH
• prognóza MeSH
• terapie MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Monoklonální gamapatie nejasného významu (MGUS) je prekanceróza, která zahrnuje dva různé druhy: lymfatický/lymfoplazmatický MGUS a MGUS plazmatických buněk, který představuje zhruba 85 % všech případů MGUS. Tento typ MGUS má nízké, ale trvalé tendence k transformaci v maligní onemocnění, především mnohočetný myelom (MM), s frekvencí cca 1 % ročně. Pomocí známých modelů stratifikace rizika je možné určit na základě klinických parametrů skupiny pacientů, kteří progredují v rozmezí od 0,26 % do 12 % ročně. Avšak vzhledem k nedostatku jasných genetických a/nebo fenotypových znaků je rozlišení MGUS a MM těžké. Nejsme schopni předvídat, zda a kdy bude u jednotlivých pacientů MGUS progredovat do MM. Současně se částečně překrývají molekulární abnormality sdílené MGUS a MM. Lepší pochopení patogeneze MGUS a MM pomocí molekulárně-genetického přístupu pomůže odhalit mechanizmy vzniku myelomu, a to může být také užitečné pro identifikaci nových molekulárních cílů. Konečným cílem pro nejbližší budoucnost je vytvořit lepší ukazatele pro vymezení vysoce rizikových MGUS pacientů, kteří budou kandidáty na včasnou léčebnou intervenci.

Monoclonal gammopathy of undetermined significance (MGUS) is a precancerosis comprising two different kinds of cancer: lymphoid/lymphoplasmocytoid MGUS and plasma cell MGUS that represents about 85% of all MGUS cases. This type of MGUS has low but persistent tendency to transform to malignant disease, mainly multiple myeloma (MM), with frequency of about 1% per year. Using known risk stratification models based on clinical parameters, it is possible to identify patients’ groups with average rates of progression as low as 0.26% and as high as 12% per year. However, due to the lack of clear genetic and/or phenotypic markers distinguishing MGUS from MM, we are not able to predict if and when MGUS will progress to MM in individual patients. There are partially overlapping molecular pathogenic events shared by MGUS and MM. Better understanding of pathogenesis of MGUS and MM using molecular-genetic approaches will help disclose the mechanisms of myeloma genesis; it can be also useful for identification of novel molecular targets. The ultimate goal for the near future is to develop better markers for definition of high-risk MGUS patients who will be candidates for early treatment intervention.

• Klíčová slova
• molekulárně- genetická vyšetření, progrese,
• MeSH
• financování organizované MeSH
• imunoglobulin M MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom etiologie   MeSH
• monoklonální gamapatie nejasného významu diagnóza   komplikace   MeSH
• prekancerózy MeSH
• progrese nemoci MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

V tomto úvodním článku pro ostatní metodiky využívané na našem pracovišti při studiu mnohočetného myelomu a monoklonálních gamapatií jsme se zaměřili na postupy vlastního zpracování biologického materiálu, principy separace buněk a nastavené algoritmy dalších postupů. Běžně používaná metodika magnetické separace buněk MACS je vhodná pouze pro vzorky se vstupní infiltrací plazmatickými buňkami > 5 %. Pro nízce zastoupené populace buněk pak využíváme výhradně metodu fluorescencí aktivované separace FACS. Izolované plazmatické buňky jsou dále využívány pro molekulárně biologické studie, pro cytogenetická vyšetření a k proteinovým analýzám. Dále se v této práci zmiňujeme o úskalích, která souvisejí s výzkumem mnohočetného myelomu, některá z nich již umíme překonat, s jinými se zatím neúspěšně potýkáme.

In this paper, initial processing of biological material, cell separation algorithms and other procedures are discussed. For samples with initial infiltration of plasma cells > 5%, CD138 MicroBeads and Auto-Magnetic-Activated Cell Sorting program are used. Fluorescence-Activated Cell Sorting is used exclusively for cell populations with low-abundance; these samples are detected using fluorescently labeled antibodies only. Isolated plasma cells are further processed for molecular biological studies, for cytogenetics and protein analyses. Furthermore, this work examines the pitfalls of research related to multiple myeloma; some of them we have overcome, while the others are still problematic.

• Klíčová slova
• CD138, monoklonální gamapatie,
• MeSH
• banky biologického materiálu MeSH
• biomedicínský výzkum MeSH
• financování organizované MeSH
• kostní dřeň patologie   MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom diagnóza   MeSH
• odběr biologického vzorku MeSH
• plazmatické buňky imunologie   klasifikace   MeSH
• průtoková cytometrie metody   MeSH
• separace buněk MeSH
• syndekan-1 analýza   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Technologický rozvoj průtokové cytometrie (flow cytometry, FC) spolu s nejnovějšími poznatky z oblasti imunofenotypizace monoklonálních gamapatií (MG) odhalil nezbytnost tohoto vyšetření zejména pro jeho diagnostický, prognostický a prediktivní význam. Cílem Evropské myelomové sítě (European Myeloma Network, EMN) je standardizovat tuto analytickou metodu a zařadit ji mezi rutinní klinická vyšetření. Jelikož celkový význam a možné aplikace FC jsou stále analyzovány, je zřejmé, že standardizace může napomoci zisku relevantních klinických výstupů z oblasti patofyziologie MG.

The technological development of flow cytometry (FC) together with new findings reveal the need for immunophenotyping in research of monoclonal gammopathy (MG) because of its diagnostic, prognostic and predictive significance. The aim of the European Myeloma Network (EMN) is to standardize this analytical method and implement it into routine clinical examination. Since the overall significance and application of FC are still analysed, standardisation could help obtain more clinical relevant information in terms of MG pathophysiology.

• Klíčová slova
• plazmatická buňka,
• MeSH
• CD antigeny analýza   MeSH
• financování organizované MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom MeSH
• paraproteinemie imunologie   patologie   MeSH
• plazmatické buňky imunologie   klasifikace   MeSH
• průtoková cytometrie metody   normy   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Mnohočetný myelom (MM) je onemocnění plazmatických buněk (PC), které bývá často spojeno s poruchami imunity. Fenotypizace a stanovení počtu regulačních T lymfocytů (Tregs) pomocí průtokové cytometrie může být využito k monitorování stavu imunity u myelomových pacientů. Charakterizace funkčního stavu Tregs pomocí proliferačních či inhibičních testů pak může odhalit jejich možnou poruchu. V naší studii bylo zjištěno, že u pacientů s MM jsou počty Tregs zvýšeny oproti zdravým kontrolám, což u těchto pacientů svědčí o deregulaci imunity.

Multiple myeloma (MM) is a plasma cell (PC) disorder and associated with immune impairments. Flow cytometry based phenotyping and quantification of regulatory T cells (Tregs) enable to monitor the immune status of myeloma patients. Apart from enumeration of Tregs, functional characterization using proliferation or suppression assay adds key value in demonstrating the functional value of Tregs. Our study revealed that in MM patients Tregs are elevated compared to healthy subjects, which demonstrate the immune deregulation in MM.

• Klíčová slova
• Treg buňky,
• MeSH
• financování organizované MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom imunologie   terapie   MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• regulační T-lymfocyty imunologie   klasifikace   MeSH
• thalidomid MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Mnohočetný myelom je druhé nejčastější hematoonkologické onemocnění. Je to velmi heterogenní onemocnění charakterizované komplexitou genomu, opakujícími se amplifikacemi a/nebo delecemi, které vedou k rozdílnému klinickému projevu nemoci, ale i přežití u pacientů. Zejména nové metody genomiky hrají klíčovou roli v pochopení příčin patogeneze, progrese nemoci, ale i klasifikace MM.

Multiple myeloma (MM) is the second most common hematological cancer. It is a very heterogeneous disease characterized by large genomic complexity, recurrent amplifications and/or deletions in the genome leading to different clinical manifestations and survival of patients. Thus, genomics plays an important role in identifying agents responsible for pathogenesis, prognosis and disease stratification of MM.

• Klíčová slova
• patogeneze, GEP, SNP, real-time PCR,
• MeSH
• celogenomová asociační studie MeSH
• financování organizované MeSH
• genomika MeSH
• jednonukleotidový polymorfismus MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom genetika   MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• prognóza MeSH
• stanovení celkové genové exprese MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH