reporter
Dotaz
Zobrazit nápovědu
Sledovat ovlivnění či průběh genové exprese je v mnoha studiích velmi důležitou součástí výzkumu. V současné době dochází k rozvoji mnoha metod usnadňujících sledování regulace genové exprese, jedním z takových příkladů je využití tzv. genových reportérových testů (z angl. gene reporter assays). Tyto systémy představují rozsáhlý soubor nástrojů ke studiu regulačních sekvencí promotorů, zesilovačů a transkripčních faktorů. Existuje celá řada testů využívajících reportérové buňky pro stanovení biologické aktivity studovaných sloučenin. Cílem tohoto přehledového článku je představit přípravu reportérových plasmidů, což je vždy prvním krokem u testů využívajících reportérové geny. Následně budou popsány nejčastější druhy reportérových testů a představeny příklady jejich použití v testování in vitro.
Monitoring the influence or process of gene expression is a very important part of research in many studies. Currently, many methods are being developed to facilitate the monitoring of gene expression regulation, the use of gene reporter assays being one of the examples. These systems represent an extensive set of tools to study the regulatory sequences of promoters, enhancers, and transcription factors. There are several assays using reporter cells to determine the biological activity of the compounds studied. The aim of this review article is to present the preparation of reporter plasmids, which is always the first step in assays using reporter genes. Subsequently, the most common types of reporter test are described, and examples of their use in in vitro testing are presented.
sv.
- MeSH
- chemický průmysl ekonomika MeSH
- Publikační typ
- periodika MeSH
- Konspekt
- Chemie. Mineralogické vědy
- NLK Obory
- chemie, klinická chemie
^^^sv. ; 27 cm
elektronický časopis
sv.
- MeSH
- chemický průmysl ekonomika MeSH
- Publikační typ
- periodika MeSH
- Konspekt
- Chemie. Mineralogické vědy
- NLK Obory
- chemie, klinická chemie
elektronický časopis
- MeSH
- ošetřovatelství MeSH
- Konspekt
- Lékařské vědy. Lékařství
- NLK Obory
- ošetřovatelství
- NLK Publikační typ
- elektronické časopisy
sv.
Glucocorticoids are widely used drugs in human pharmacotherapy. There is an increasing demand for tools allowing detection of the ligands for glucocorticoid receptor (GR), with regard to pre-clinical drug testing and environmental applications. We constructed human luciferase reporter gene cell line AZ-GR derived from HeLa human cervix carcinoma cells, which were stably transfected with reporter plasmid containing three copies of glucorticoid response element (GRE) upstream of luciferase reporter gene. We isolated five dexamethasone-responsive clones, and we further characterized two most responsive ones (AZ-GR). Dose-response analyses were performed with 22 different natural and synthetic steroids and the values of EC(50) were calculated. AZ-GR cells displayed high specificity and sensitivity to glucocorticoids, very low responsiveness to mineralocorticoids, but no responsiveness to estrogens, gestagens or androgens. Time-course analyses revealed that AZ-GR cells allow detection of GR activators soon after 14 h of the treatment (6-10-fold induction by 100 nM dexamethasone). Functionality of AZ-GR cells was not affected with cryopreservation. Generated reporter gene cell lines fully maintained responsiveness to glucocorticoids for 32 days in the culture and over 16 passages without significant alterations. The sensitivity of the assay allows high throughput format using 96-well plates. Collectively, we present here glucocorticoid-responsive stable reporter gene cell line that allows high throughput, rapid, sensitive and selective detection of GR activators, with possible use in pre-clinical research and environmental applications.
- MeSH
- glukokortikoidy farmakologie MeSH
- HeLa buňky MeSH
- lidé MeSH
- luciferasy genetika MeSH
- receptory glukokortikoidů metabolismus MeSH
- reportérové geny genetika MeSH
- rychlé screeningové testy * MeSH
- steroidy farmakologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
