Chorioamnionitida je jednou z nejčastějších příčin předčasného porodu, která velmi často vede k rozvoji syndromu systémové zánětlivé odpovědi plodu (fetal inflammatory response syndrome - FIRS). FIRS je vysoce rizikovým faktorem perinatální mortality a dlouhodobé neonatální morbidity (myokardiální dysfunkce, bronchopulmonální dysplázie a poškození mozku). FIRS je definován zvýšenou systémovou koncentrací cytokinů plodu. Nedávno publikované práce prokazují, že krevní destičky a destičkové mikropartikule mají důležitou úlohu při zánětové odpovědi organismu. Náš projekt je zaměřen na zjištění stavu destiček a přítomnosti destičkových mikropartikulí v pupečníkové krvi u nedonošených dětí ve vztahu k chorioamnionitidě pomocí kvantitativní průtokové cytometrie. Výsledky dostatečně reprezentativního vzorku u nezralých novorozenců budou analyzovány ve vztahu k závažným klinickým komplikacím. Cílem našeho projektu je vývoj nové diagnostické metody FIRS, která by umožňovala lepší predikci závažných klinických komplikací a vedla k individualizaci péče u předčasně narozených dětí.; The most common cause of preterm birth is chorioamnionitis which often leads to the development of fetal inflammatory response syndrome (FIRS). FIRS is a major risk factor for perinatal mortality, but also for early ad long-term neonatal morditidy, such as impaired cardiac function, bronchopulmonary dysplasia and brain injury. FIRS is defined by increased systemic inflammatory cytokine concentrations. Recently it became clear that blood platelets and platelet microparticles play an important role in many inflammatory conditions. Our project is aimed on a study of platelet status and presence of platelet microparticles in cord blood of preterm infants with and without chorioamnionitis. We plan to utilize quantitative flow cytometry for gathering representative data and correlate the results with the clinical outcome of the enrolled preterm birth infants. The goal of our project is to develop new diagnostic method of FIRS which would allow better prediction of clinical complications and individualization of the clinical care for preterm born infants.

• MeSH
• Chorioamnionitis diagnosis   etiology   MeSH
• Fetal Blood MeSH
• Pregnancy Complications, Infectious MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles pathology   MeSH
• Morbidity MeSH
• Infant, Premature MeSH
• Fetus cytology   pathology   MeSH
• Premature Birth MeSH
• Flow Cytometry MeSH
• Systemic Inflammatory Response Syndrome diagnosis   etiology   MeSH
• Platelet Function Tests MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH

• Conspectus
• Pediatrie
• NML Fields
• perinatologie a neonatologie
• infekční lékařství
• cytologie, klinická cytologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Outer membrane vesicles (OMVs), nanoparticles released by Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC), have been identified as novel efficient virulence tools of these pathogens. STEC O157 OMVs carry a cocktail of virulence factors including Shiga toxin 2a (Stx2a), cytolethal distending toxin V (CdtV), EHEC hemolysin, flagellin, and lipopolysaccharide. OMVs are taken up by human intestinal epithelial and microvascular endothelial cells, the major targets during STEC infection, and deliver the virulence factors into host cells. There the toxins separate from OMVs and are trafficked via different pathways to their target compartments, i.e., the cytosol (Stx2a-A subunit), nucleus (CdtV-B subunit), and mitochondria (EHEC hemolysin). This leads to a toxin-specific host cell injury and ultimately apoptotic cell death. Besides their cytotoxic effects, STEC OMVs trigger an inflammatory response via their lipopolysaccharide and flagellin components. In this chapter, we describe methods for the isolation and purification of STEC OMVs, for the detection of OMV-associated virulence factors, and for the analysis of OMV interactions with host cells including OMV cellular uptake and intracellular trafficking of OMVs and OMV-delivered toxins.

• MeSH
• Bacterial Toxins metabolism   MeSH
• Endothelial Cells metabolism   microbiology   pathology   MeSH
• Escherichia coli O157 * metabolism   pathogenicity   MeSH
• Virulence Factors metabolism   MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles metabolism   MeSH
• Shiga Toxin 2 metabolism   MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH
• Publication type
• Journal Article MeSH
• Research Support, Non-U.S. Gov't MeSH

BACKGROUND: Microparticles (MPs) are heterogeneous vesicles derived from membranes of different cells. Between 70 to 90% of MPs detected in blood originate from platelets. The release of MPs is associated with proinflammatory and procoagulant states. Elevated levels of MPs have been found in different diseases. We investigated MPs levels in patients with chronic hepatitis C (CHC) and changes in level during treatment using direct-acting antivirotics (DAA). PATIENTS AND METHODS: Thirty-six patients with CHC and forty healthy volunteers were included in the study. Concentrations of MPs were determined indirectly by measuring their procoagulant activity in plasma at baseline, end of therapy (EOT), and 12 weeks after EOT when the sustained virological response was assessed (SVR12). RESULTS: All patients achieved SVR12, which was associated with rapid improvement of markers of liver damage and function as well as liver stiffness (P=0.002). MPs levels were significantly higher in CHC patients than in healthy volunteers (P<0.001). No statistically significant decrease was found observed between baseline and SVR12 (P=0,330). Analysis of subpopulations with minimal fibrosis F0-1 (P=0.647), advanced fibrosis F2-4 (P=0.370), women(P=0.847), men (P=0.164) and genotype 1 (P=0.077) showed no significant changes during the follow-up period. CONCLUSIONS: MPs levels are higher in CHC patients and remain elevated shortly after achieving SVR. Higher concentrations of MPs in plasma are probably caused by a chronic uncontrolled exaggerated inflammatory response caused by CHC. Longer observation would probably confirm the significance of MPs levels decrease because normalization of liver function, inflammation, and structure after SVR requires more than 12 weeks.

• MeSH
• Antiviral Agents therapeutic use   MeSH
• Hepatitis C, Chronic * drug therapy   MeSH
• Fibrosis MeSH
• Liver Cirrhosis drug therapy   MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles * MeSH
• Sustained Virologic Response MeSH
• Inflammation MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH
• Male MeSH
• Female MeSH
• Publication type
• Journal Article MeSH

BACKGROUND/AIM: This work aimed to prospectively evaluate the clinical significance of circulating microparticles (MPs) in relation to thrombotic risk factors and thrombotic complications in patients with BCR/ABL1-negative myeloproliferative neoplasms (MPN). PATIENTS AND METHODS: In a cohort of 206 patients with MPN, MPs' procoagulant activity was measured by the Zymuphen functional assay in 429 samples, while platelet- and erythrocyte-MPs were enumerated by flow cytometry in 558 samples. RESULTS: MPN patients had higher MP levels than the control group. The levels of MPs were higher in male patients, smokers, and those who were older than 60 years, and in the presence of JAK2V617F mutation, history of thrombosis, platelets >400×109/l, hematocrit >45%, or leukocytes >10×109/l. Cytoreductive treatment reduced MP levels, with anagrelide being associated with lower MP levels than hydroxyurea. CONCLUSION: The relationship with thrombotic risk factors indicates a possible role of MPs in the complex thrombotic mechanism, though cytoreductive treatment seems to affect this role through reducing MP levels.

• MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles * MeSH
• Myeloproliferative Disorders * drug therapy   genetics   MeSH
• Neoplasms * MeSH
• Blood Platelets MeSH
• Thrombosis * etiology   genetics   MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH
• Male MeSH
• Publication type
• Journal Article MeSH

Roztroušená skleróza (RS) je chronické zánětlivé onemocnění centrálního nervového systému. Deregulace imunitního systému, migrace imunitních buněk přes hematoencefalickou bariéru a jejich podíl na vzniku demyelinizačních lézí hrají kritickou roli v patogenezi tohoto onemocnění. Přesná a spolehlivá diagnóza a sledování progrese onemocnění jsou komplikovány absencí spolehlivých a specifických laboratorních testů. Buněčné mikrovesikuly (MVs) přítomné v krvi, mozkomíšním moku a dalších tělních tekutinách představují donedávna neznámý mechanismus mezibuněčné komunikace podílející se na patologických procesech včetně RS. MVs nesou tkáňově-specifické informace a jsou tedy i nosiči specifické informace z tkání účastnících se vzniku a rozvoje onemocnění. MVs jsou proto vysoce slibným potenciálním diagnostickým nástrojem pro mnoho různých onemocnění. Podrobná molekulární charakterizace MVs z krve a mozkomíšního moku pacientů s RS a zhodnocení potenciálu MVs pro diagnostiku a monitorování RS je cílem tohoto projektu.; Multiple sclerosis is chronic inflammatory disease of central nervous system. Dysregulation of immune system, migration of immune cells across blood brain barrier and their participation in development demyelinating lesions play pivotal role in the disease pathogenesis. Diagnosis and disease progression monitoring is hindered by absence of reliable, sensitive, and specific laboratory tests reflecting accurately and specifically the disease activity. Cellular microvesicles (MVs) present in blood, CSF and other body fluids represent previously unrecognized means of cell communication which takes part in many pathological conditions, including MS. As such MVs carrying tissue-specific information are new and highly promising diagnostic targets for number of diseases and evaluation of their potential in MS is of utmost interest. Detailed molecular characterization of MVs present in CSF and blood of MS patients is the aim of the proposed project.

• MeSH
• Blood Chemical Analysis MeSH
• Biomarkers blood   cerebrospinal fluid   MeSH
• Exosomes MeSH
• Immunity MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles MeSH
• Cerebrospinal Fluid MeSH
• Multiple Sclerosis diagnosis   MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH

• Conspectus
• Patologie. Klinická medicína
• NML Fields
• neurologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Nespecifické střevní záněty (např. Crohnova choroba) jsou onemocnění se stále narůstající incidencí, jejichž současná farmakoterapie není zcela efektivní. Existuje ovšem celá řada přírodních aktivních látek s pozitivním vlivem při terapii střevních zánětů, které jsou intenzivně zkoumány. Prozatím ale nebyla testována možná terapeutická synergie mezi těmito látkami a glukany, přírodními sacharidy s dobře zdokumentovaným imunomodulačním účinkem. Glukanové částice mohou sloužit jako nosiče biologicky aktivních látek, což zjednoduší aplikaci ve vodě nerozpustných látek do organismu a zároveň skýtá možnost razantního zesílení protizánětlivého účinku. Na základě předchozích in vivo a klinických studií byly vytipovány chemicky různorodé přírodní látky, které jsou slibné pro terapii chronických zánětlivých onemocnění a lze je enkapsulovat do glukanových částic. Cílem projektu je pomocí in vitro a in vivo studií ověřit, zda je vhodné použít glukanové mikročástice jako nosiče těchto protizánětlivých látek k terapii střevních zánětů a optimalizovat složení kompozitu glukan-aktivní látka.; Inflammatory Bowel Diseases (IBD), e.g. Crohn’s Disease, are disorders with constantly increasing incidence and not completely effective pharmacotherapy. Number of active natural compounds with positive effect in therapy of IBD is intensively studied. Therapeutic synergy between them and glucans - natural saccharides with well-documented immunomodulatory effect - was not tested so far. Glucan microparticles can serve as carriers for biologically active compounds to simplify the administration of water insoluble drugs into organism and to open the possibility of significant amplification of anti-inflammatory effect as well. Based on previous in vivo and clinical trials, chemically diverse natural compounds, which may be encapsulated into glucan particles, were chosen as promising for therapy of chronic inflammatory disorders. The aim of project is to prove via in vitro and in vivo studies the suitability of utilization the glucan microparticles as vectors of these anti-inflammatory compounds in the therapy of IBD and to optimize the composition of glucan-active compound composite.

• MeSH
• Anti-Inflammatory Agents MeSH
• Biological Factors MeSH
• Glucans therapeutic use   MeSH
• Inflammatory Bowel Diseases drug therapy   MeSH
• Intravital Microscopy MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles MeSH
• Drug Carriers MeSH
• In Vitro Techniques MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH
• Publication type
• Evaluation Study MeSH

• Conspectus
• Farmacie. Farmakologie
• NML Fields
• gastroenterologie
• farmacie a farmakologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Patologické stavy v perinatálním období ovlivňují významně novorozeneckou mortalitu a morbiditu. Patologické stavu u matky mohou vést k předčasnému porodu, hypoxii, nebo infekcím novorozence. Novorozenecké patologie - nezralost, hypoxie a infekce u donošených i předčasně narozených novorozenců - jsou hlavními komplikacemi s negativním vlivem na přežívání novorozenců. Orgánové dysfunkce u postižených novorozenců jsou doprovázeny zánětovou odpovědí spouštěnou endotelem. V průběhu této reakce dochází ke stimulaci, aktivaci a poškození endotelových buněk. Markery poškození endotelu je možno detekovat v krvi. Cílem projektu je detekce biomarkerů endoteliální aktivace a poškození v perinatálním období. Solubilní endoteliální faktory a endoteliální mikropartikule budou analyzovány v pupečníkové a periferní krvi zralých a nezralých novorozenců matek s chorioamniitidou a preeklampsií a novorozenců s infekcemi a perinatální hypoxií. Průkaz biomarkerů endoteliálního poškození může významně zlepšit časnou diagnostiku závažných zánětových komplikací a snížit novorozeneckou mortalitu a morbiditu.; Pathological events during perinatal period influence significantly neonatal mortality and long-term morbidity. Maternal pathologies may lead to preterm delivery, hypoxic injury and neonatal infections. Neonatal pathologies - prematurity, infections of term and preterm neonates and asphyxia - are the main perinatal complications influencing neonatal survival and morbidity. Organ dysfunctions in affected neonates are associated with inflammatory response, which include endothelial activation and damage. Biomarkers of endothelial injury can be detected in blood. The aim of our study is to explore biomarkers of endothelial activation and damage during perinatal period. Soluble endothelium-specific proteins and endothelial microparticles will be evaluated in cord blood and peripheral blood of the newborns in preeclampsia, chorioamnionitis, neonatal infections, hypoxia and prematurity. The introduction of endothelial injury biomarkers may significantly improve early diagnosis of potentially severe inflammatory complications in neonates and may decrease neonatal mortality and morbidity.

• MeSH
• Biomarkers MeSH
• Early Diagnosis MeSH
• Endothelium pathology   MeSH
• Fetal Blood MeSH
• Infant Mortality MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles MeSH
• Morbidity MeSH
• Infant, Newborn MeSH
• Inflammation diagnosis   MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH
• Infant, Newborn MeSH

• Conspectus
• Pediatrie
• NML Fields
• perinatologie a neonatologie
• NML Publication type
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

OBJECTIVES: HIV-infected individuals are at higher risk of non-AIDS diseases associated with procoagulant status. Microparticles are elevated in disorders associated with thrombosis (e.g., cardiovascular diseases). We investigated the association between microparticle levels in untreated and treated HIV-infected subjects, and determined the association with immune status, viral replication, and duration of antiretroviral therapy. PATIENTS AND METHODS: We included 144 HIV-infected subjects, including 123 on antiretroviral therapy (ART) and 21 before treatment initiation. A control group of 40 HIV-negative healthy adults matched for age and sex was used for comparison of microparticle levels. Treated subjects were divided into five groups depending on the period of antiretroviral exposure. Statistically significant differences were determined by Kruskal-Wallis test and Chi2 test. The relation between microparticles and other parameters was assessed using Spearman's coefficient of correlation. RESULTS: Microparticle levels were significantly higher in treated and untreated HIV-infected subjects than in non-HIV-infected controls (P<0.001). The microparticle level was similar between the groups on treatment (P=0.913). No association between the microparticle level and CD4+ count, CD4+/CD8+ ratio, number of HIV-1 RNA copies, or duration of exposure to antiretroviral treatment was observed. CONCLUSION: Increased levels of microparticles may be due to processes independent of viral replication and CD4+ cell count, and microparticle release might persist even during viral suppression by antiretroviral treatment. Elevated microparticle levels might occur in response to other triggers.

• MeSH
• Adult MeSH
• Blood Coagulation * MeSH
• HIV Infections blood   MeSH
• Middle Aged MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles * MeSH
• Young Adult MeSH
• Check Tag
• Adult MeSH
• Middle Aged MeSH
• Humans MeSH
• Young Adult MeSH
• Male MeSH
• Female MeSH
• Publication type
• Journal Article MeSH

• MeSH
• Antigens classification   MeSH
• Biomarkers MeSH
• Extracellular Vesicles physiology   classification   MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles * physiology   immunology   classification   pathology   MeSH
• Infant, Newborn MeSH
• Fetus physiopathology   MeSH
• Systemic Inflammatory Response Syndrome * diagnosis   physiopathology   MeSH
• Blood Platelets physiology   MeSH
• Check Tag
• Humans MeSH
• Infant, Newborn MeSH
• Publication type
• Research Support, Non-U.S. Gov't MeSH

Východiska: Mikropartikule (MP) jsou malé vezikuly (0,1-1 μm) uvolněné v průběhu aktivace nebo apoptózy, na jejichž povrchu je exprimován fosfatidylserin spolu s antigeny indikujícími jejich buněčný původ. Je známo, že hladina MP je zvýšena u tromboembolických onemocnění a malignit; předpokládá se, že MP nejen zesilují, ale mohou také iniciovat proces trombogeneze. BCR/ABL negativní myeloproliferativní choroby (myeloproliferative neoplasms – MPN) jsou klonální onemocnění krvetvorby, která zahrnují pravou polycytemii, esenciální trombocytemii a primární myelofibrózu. Jednou z hlavních komplikací u pacientů s MPN je vysoké riziko a incidence trombózy, které ovlivňují přežití, kvalitu i délku života. Soubor pacientů a metody: Klinický význam cirkulujících MP byl hodnocen u skupiny 179 pacientů s BCR/ABL negativními MPN. Analýza MP byla provedena použitím průtokové cytometrie u 417 vzorků a prokoagulační aktivita MP byla provedena pomocí funkčního testu Zymuphen MP-activity (Hyphen Biomed, Neuville-sur-Oise, Francie) u 274 vzorků. Výsledky: Významně vyšší absolutní a relativní počet destičkových MP byl nalezen u pacientů s MPN ve srovnání s vyšetřením zdravých dárců (p = 0,001; p = 0,043). Erytrocytární MP byly také významně vyšší u pacientů s MPN než u zdravých jedinců (p = 0,001). Prokoagulační aktivita MP byla rovněž významně vyšší u pacientů než ve skupině zdravých dárců (p = 0,001). Pacienti s primární myelofibrózou měli významně nižší absolutní a relativní počet destičkových MP ve srovnání s pacienty s pravou polycytemií a esenciální trombocytemií (p = 0,008; p = 0,014). Přítomnost mutace JAK2V617F byla spojena s vyšším absolutním a relativním počtem destičkových MP (p = 0,045; p = 0,029). Závěr: Ačkoliv některá literární data podporují hypotézu o přímém vztahu mezi MP a trombotickými událostmi u pacientů s MPN, pro vyhodnocení klinického významu MP ve vztahu k hyperkoagulačnímu stavu těchto pacientů jsou nezbytné další klinické studie.

Background: Microparticles (MPs) are small (0.1-1 μm) cell-derived vesicles released during activation or apoptosis, with a surface-exposed phosphatidylserine along with antigens indicating the cellular origin. The level of MPs is known to be elevated in thromboembolic diseases and malignancies; it is believed that MPs are not only amplifying but can also initiate the thrombogenesis processes. BCR/ABL negative myeloproliferative neoplasms (MPNs) are clonal haematopoietic diseases, which include polycythemia vera, essential thrombocythemia and primary myelofibrosis. One of the main problems of MPN patients is high risk and incidence of thrombosis which affect the survival, quality of life and life expectancy. Patients and methods: The clinical significance of circulating MPs was assessed in a group of 179 patients with BCR/ABL-negative MPNs. Analysis of MPs was done using flow cytometry on 417 samples, and MPs procoagulation activity was performed using a functional assay called Zymuphen MP-activity (Hyphen Biomed, Neuville-sur-oise, France) on 274 samples. Results: Significantly higher absolute and relative count of platelet MPs was found in MPN patients when compared with healthy group, respectively (p = 0.001, p = 0.043). Erythrocyte MPs were also significantly higher in MPN patients than in the healthy group (p = 0.001). Procoagulation activity of MPs was as well significantly higher in patients compared to the control group (p = 0.001). Patients with primary myelofibrosis had decreased absolute and relative count of platelet MPs compared to polycythemia vera and essential thrombocythemia patients, respectively (p = 0.008, p = 0.014). Presence of JAK2V617F mutation was associated with higher absolute and relative count of platelet MPs, respectively (p = 0.045, p = 0.029). Conclusion: Although some literature data support the hypothesis of a direct relation between MPs and thrombotic events in MPN patients, further studies are needed to evaluate the clinical implication of MPs in the hypercoagulation state of MPN patients.

• Keywords
• prokoagulační aktivita,
• MeSH
• Adult MeSH
• Janus Kinase 2 MeSH
• Clinical Studies as Topic MeSH
• Middle Aged MeSH
• Humans MeSH
• Cell-Derived Microparticles * MeSH
• Myeloproliferative Disorders * diagnosis   complications   blood   MeSH
• Aged MeSH
• Thrombosis MeSH
• Check Tag
• Adult MeSH
• Middle Aged MeSH
• Humans MeSH
• Male MeSH
• Aged MeSH
• Female MeSH
• Publication type
• Research Support, Non-U.S. Gov't MeSH