Cryptococcus neoformans is an encapsulated yeast that can cause cryptococcosis and cryptococcal meningitis, which conventional treatment involves antifungal drugs such as polyenes, flucytosine, azoles, and their combinations. However, the high cost, toxicity, and increase in fungi resistance to antifungal agents stimulate the search for therapeutic strategies such as drug repurposing and combination therapy. This study evaluated the activity of the antihypertensive verapamil (VEH) alone and combined with amphotericin B (AmB) against C. neoformans. VEH exhibited antifungal activity against C. neoformans with minimum inhibitory concentration and minimum fungicidal concentration of 118 μg per mL. The combination of VEH and AmB exhibited synergism, reducing at least eightfold both drugs' concentrations. Moreover, the combination decreased the size and glucuronoxylomannnan content of C. neoformans capsule. However, no difference was observed in ergosterol levels of C. neoformans after treatment with VEH and AmB in combination. Altogether, VEH in combination with AmB exhibits potential as a candidate as for the development of anti-cryptococcal drug.
- MeSH
- amfotericin B farmakologie terapeutické užití MeSH
- antifungální látky farmakologie terapeutické užití MeSH
- Cryptococcus neoformans * MeSH
- flucytosin farmakologie terapeutické užití MeSH
- kryptokokóza * farmakoterapie mikrobiologie MeSH
- mikrobiální testy citlivosti MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
Gene-directed enzyme/prodrug therapy represents one of the experimental treatment approaches. The system based on conversion of nontoxic prodrug 5-fluorocytosine to chemotherapeutic 5-fluorouracil by cytosine deaminase or fusion cytosine deaminase::uracil phosphoribosyl transferase belongs to the most frequently used. The detailed analysis of 5-fluorocytosine, 5-fluorouracil and its metabolites enables to understand various responses of tumour cells to treatment as well as mechanisms of resistance. A fast, sensitive and accurate methods based on liquid chromatography with high-resolution mass spectrometry (LC-HRMS) for the identification and quantification of 5-fluorocytosine, 5-fluorouracil and its major metabolites were developed. Two different hybrid high-resolution mass spectrometers sufficient for study of metabolic pathways were used. The LC-ESI IT-TOF MS method was successfully used for identification of 5-fluorocytosine, 5-fluorouracil and its metabolites in complex biological matrices (mesenchymal stromal cells and tumour cells media) and for confirmation of the metabolic conversion of 5-fluorocytosine even in chemoresistant tumour cells media samples. For quantification, the LC-HESI QExactive MS method was developed and validated. The developed method demonstrated a very good linear range for 5-fluorocytosine from 1 ng/mL to 1000 ng/mL and for its major metabolites from 5 ng/mL to 1000 ng/mL. The limits of detection and limits of quantification ranged from 1.1 to 26 ng/mL and from 3.6 to 87 ng/mL, respectively. Both developed methods confirmed the ability of gene-directed enzyme prodrug therapy to metabolically convert 5-fluorocytosine to 5-fluorouracil and its major metabolites in real samples of tumour cell media and mesenchymal stromal cells.
Chemotherapeutics are pharmaceutical compounds the occurrence of which in the environment is of growing concern because of the increase in treatments against cancer diseases. They can reach the aquatic ecosystems after passing through wastewater treatment plants without complete removal. One of the most frequently used chemotherapeutics is 5-fluorouracil which exhibits a strong cytostatic effect. In this paper, an analytical methodology was developed, validated, and applied to determine 5-fluorouracil, its precursor, 5-fluorocytosine, and its major active metabolite, 5-fluorouridine, in hospital wastewater samples. Due to the expected low concentrations after dilution and interferences present in such a complex matrix, a very selective and sensitive detection method is required. Moreover, an extraction method must be implemented prior to the determination in order to purify the sample extract and preconcentrate the target analytes at micrograms per liter concentration levels. Solid-phase extraction followed by liquid chromatography with tandem mass spectrometry was the combination of choice and all included parameters were studied. Under optimized conditions for wastewater samples analysis, recoveries from 63 to 108% were obtained, while intraday and interday relative standard deviations never exceeded 20 and 25%, respectively. Limits of detection between 61 and 620 ng/L were achieved. Finally, the optimized method was applied to samples from hospital wastewater effluents.
- MeSH
- chemické látky znečišťující vodu analýza MeSH
- extrakce na pevné fázi MeSH
- flucytosin analýza MeSH
- fluoruracil analýza MeSH
- molekulární struktura MeSH
- nemocnice * MeSH
- odpadní voda chemie MeSH
- tandemová hmotnostní spektrometrie MeSH
- uridin analogy a deriváty analýza MeSH
- vysokoúčinná kapalinová chromatografie MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
The natural behavior of mesenchymal stem cells (MSCs) and their exosomes in targeting tumors is a promising approach for curative therapy. Human tumor tropic mesenchymal stem cells (MSCs) isolated from various tissues and MSCs engineered to express the yeast cytosine deaminase::uracil phosphoribosyl transferase suicide fusion gene (yCD::UPRT-MSCs) released exosomes in conditional medium (CM). Exosomes from all tissue specific yCD::UPRT-MSCs contained mRNA of the suicide gene in the exosome's cargo. When the CM was applied to tumor cells, the exosomes were internalized by recipient tumor cells and in the presence of the prodrug 5-fluorocytosine (5-FC) effectively triggered dose-dependent tumor cell death by endocytosed exosomes via an intracellular conversion of the prodrug 5-FC to 5-fluorouracil. Exosomes were found to be responsible for the tumor inhibitory activity. The presence of microRNAs in exosomes produced from naive MSCs and from suicide gene transduced MSCs did not differ significantly. MicroRNAs from yCD::UPRT-MSCs were not associated with therapeutic effect. MSC suicide gene exosomes represent a new class of tumor cell targeting drug acting intracellular with curative potential.
- MeSH
- cytosindeaminasa genetika metabolismus MeSH
- exozómy genetika metabolismus MeSH
- flucytosin metabolismus MeSH
- fluoruracil metabolismus farmakologie MeSH
- fungální proteiny genetika metabolismus MeSH
- genetická terapie metody MeSH
- kvasinky genetika metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- mezenchymální kmenové buňky metabolismus MeSH
- nádorové buněčné linie MeSH
- nádory prsu genetika metabolismus patologie MeSH
- pentosyltransferasy genetika metabolismus MeSH
- prekurzory léčiv metabolismus MeSH
- proliferace buněk účinky léků genetika MeSH
- protinádorové antimetabolity metabolismus farmakologie MeSH
- transgeny sebevražedné genetika MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Kryptokoková meningitída je závažná neuroinfekcia spôsobená kvasinkou Cryptococcus neoformans. Často sa vyskytuje ako oportúnna infekcia, vzácne sa môže prejaviť aj u zdravých ľudí. Najčastejším zdrojom infekcie je vdýchnutie infikovaného vtáčieho trusu. V pľúcach a v priľahlých lymfatických uzlinách môžu kryptokoky perzistovať dlhú dobu. Klinické prejavy pľúcnej infekcie nie sú žiadne, alebo sú len mierne. K manifestácii ochorenia dochádza často až po prieniku kryptokokov do CNS. Prezentovaná kazuistika dokumentuje výskyt kryptokokovej meningitídy u imunokompetentnej pacientky. Bola diagnostikovaná mikroskopickým nálezom kvasiniek z cerebrospinálnej tekutiny. Nález bol potvrdený dôkazom kryptokokovej DNA v likvore a následne kultiváciou. Napriek okamžitému zahájeniu antimykotickej terapie a komplexnej starostlivosti sa stav pacientky skončil úmrtím.
Cryptococcal meningitis is a severe neurological infection caused by the yeast Cryptococcus neoformans. It often occurs as an opportunistic infection; rarely, it may be seen in healthy people as well. The most common source of the infection is inhalation of infected bird droppings. The cryptococci may persist in the lungs and nearby lymph nodes for a long time. There are no or mild clinical manifestations of the pulmonary infection. The disease often manifests only after the cryptococci penetrate into the CNS. The case report documents the development of cryptococcal meningitis in an immunocompetent patient. It was diagnosed by microscopic detection of the yeast in the cerebrospinal fluid. The finding was confirmed by detecting cryptococcal DNA in the cerebrospinal fluid and culture. Despite immediate initiation of antifungal therapy and intensive care, the patient died.
- MeSH
- Cryptococcus neoformans MeSH
- diagnostické zobrazování metody MeSH
- flucytosin terapeutické užití MeSH
- klinické laboratorní techniky metody MeSH
- kryptokoková meningitida * diagnóza terapie MeSH
- lidé MeSH
- senioři MeSH
- sepse MeSH
- smrt MeSH
- výsledek terapie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- kazuistiky MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
Kryptokokální meningitida (KM) je potenciálně fatální onemocnění. Popisujeme úspěšnou léčbu pomocí Ommaya rezervoáru a intratekální injekce amfotericinu B ke zvládnutí refrakterní cerebrální kryptokokózy způsobené Cryptococcus gattii AFLP4/VGI. U 63letého pacienta s hypertermií a bolestmi hlavy v trvání 2 týdnů byla diagnostikována KM. Byla zahájena kombinovaná léčba amfotericinem B a 5-flucytosinem a následována léčbou flukonazolem. Po 7 měsících byl refrakterní k tradiční léčbě KM a byla zvolena záchranná léčba pomocí Ommaya rezervoáru a intratékální injekce amfotericinu B. Neurologické příznaky postupně odezněly bez zřejmého relapsu během 12 měsíců sledování. Izolát byl přešetřen kultivací na médiu s kanavaninem, glycinem a bromthymolovou modří a molekulární typizací pomocí URA5 byl identifikován Cryptococcus gattii AFLP4/VGI. Ommaya rezervoár lze doporučit jako alternativní léčbu KM vyvolané Cryptococcus gattii AFLP4/VGI, která špatně odpovídá na standardní léčebné režimy.
Cryptococcal meningitis (CM) is a potentially fatal disease. We report successful treatment with the Ommaya reservoir and intrathecal injection of amphotericin B for the control of refractory cerebral cryptococcosis due to Cryptococcus gattii AFLP4/VGI. A 63-year-old male patient presented with a 2-week history of fever and headache, and was he diagnosed with CM. Combined amphotericin B and 5-flucytosine treatment was initiated and followed by fluconazole therapy. After 7 months, he was refractory to traditional CM treatment and received salvage therapy with an Ommaya reservoir and intrathecal injection of amphotericin B. His neurological symptoms recovered gradually with no evidence of relapse during 12-month follow-up. The isolate was re-identified by culturing in canavanine-glycine-bromothymol Blue media and by molecular typing using URA5 as Cryptococcus gattii AFLP4/VGI. The Ommaya reservoir could serve as an alternative treatment for Cryptococcus gattii AFLP4/VGI-induced CM, which responds poorly to standard regimens.
- Klíčová slova
- Ommaya rezervoár,
- MeSH
- amfotericin B terapeutické užití MeSH
- antifungální látky terapeutické užití MeSH
- Cryptococcus gattii izolace a purifikace MeSH
- flucytosin terapeutické užití MeSH
- flukonazol MeSH
- hydrocefalus etiologie MeSH
- kombinovaná farmakoterapie MeSH
- kryptokoková meningitida * diagnóza farmakoterapie patofyziologie MeSH
- léková rezistence MeSH
- lékové transportní systémy MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mozkové komory * účinky léků MeSH
- recidiva MeSH
- spinální injekce MeSH
- zaváděcí katétry * MeSH
- Check Tag
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- kazuistiky MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
A systematic study of the cleavage of DNA sequences containing 5-fluorocytosine or 5-fluorouracil by type II restriction endonucleases (REs) was performed and the results compared with the same sequences containing natural pyrimidine bases, uracil or 5-methylcytosine. The results show that some REs recognize fluorine as a hydrogen on cytosine and cleave the corresponding sequences where the presence of m5dC leads to blocking of the cleavage. However, on uracil, the same REs recognize the F as a methyl surrogate and cleave the sequences which are not cleaved if uracil is incorporated instead of thymine. These results are interesting for understanding the recognition of DNA sequences by REs and for manipulation of the specific DNA cutting.
Mezi nejčastější oportunní patogeny ohrožující nemocného s maligním onemocněním patří kandidy, aspergily a vzácně rovněž zygomycety. Lékem první volby v terapii invazivního kandidového onemocnění jsou echinokandiny, u aspergilózy představuje první léčebnou volbu vorikonazol a v léčbě mukormykózy amfotericin B, respektive jeho lipidové formy.
Patients suffering from malignant diseases are at risk of opportunistic infections most often caused by candida, aspergillus andzygomyces species. Echinocandins represent the drug of first choice in the treatment of invasive candidiasis, while voriconazole is indicated as first line treatment in aspergillosis and amphotericin B or rather its lipid forms are indicated in cases of mucormycosis.
- MeSH
- amfotericin B farmakologie terapeutické užití MeSH
- antifungální látky aplikace a dávkování farmakologie škodlivé účinky MeSH
- aspergilóza farmakoterapie patofyziologie MeSH
- echinokandiny farmakokinetika farmakologie terapeutické užití MeSH
- flucytosin farmakologie terapeutické užití MeSH
- imidazoly farmakologie terapeutické užití MeSH
- kandidóza farmakoterapie patofyziologie MeSH
- lidé MeSH
- monoklonální protilátky terapeutické užití MeSH
- mukormykóza farmakoterapie patofyziologie MeSH
- mykózy * farmakoterapie mikrobiologie MeSH
- oportunní infekce * farmakoterapie mikrobiologie MeSH
- premedikace metody MeSH
- rizikové faktory MeSH
- triazoly farmakologie terapeutické užití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
- Klíčová slova
- Amolorfin, Cyklopyroxolamin (cyklopirox),
- MeSH
- allylamin analogy a deriváty MeSH
- antifungální látky farmakologie terapeutické užití MeSH
- azoly farmakologie kontraindikace terapeutické užití MeSH
- flucytosin MeSH
- lékové interakce MeSH
- lidé MeSH
- morfoliny terapeutické užití MeSH
- mykózy * diagnóza epidemiologie etiologie farmakoterapie klasifikace MeSH
- polyeny MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Systémová antimykotika jsou určena pro léčbu systémových mykóz. Zahrnují polyeny, antimetabolity, azoly, echinokandiny i jiné skupiny. Hlavním představitelem polyenů je amfotericin B. Pro snížení jeho toxicity byly vyvinuty preparáty, v nichž je molekula amfotericinu B vázána na tukový nosič, a to lipozomy (lipozomální amfotericin B), cholesterolový nosič, s nímž tvoří lipidový komplex (ABLC), a tuky ve formě koloidní disperze (ABCD). Důležitou skupinou jsou azoly: starší azoly (imidazoly) zahrnují ketokonazol a mikonazol, nové azoly (triazoly) představují flukonazol, itrakonazol, vorikonazol, posakonazol a ravukonazol. Hlavním zástupcem nové skupiny - echinokandinů je kaspofungin, počítá se se zavedením dalších léků: micafunginu a anidulafunginu. V článku je uvedena charakteristika jednotlivých skupin, základních zástupců i některé důležité konkrétní indikace s uvedením dávek. Základní indikace jsou doloženy výsledky klinických studií.
Systemic antifungal agents are useful to treat systemic mycoses. Drugs include polyens, antimetabolites, azoles, echinocandins, and others. Main representative of polyens is amphotericin B. To reduce its toxicity, lipid-based formulations were developed. Amphotericin B molecule is bound to lipid vehicle, namely liposome (liposomal amphotericin B), cholesterol disks, with its forms of lipid complex (ABLC), and amphotericin B colloidal dispersion with cholesterol (ABCD). Important group is represented by azoles: older azoles (imidazoles) include ketoconazole and miconazole, newer ones (triazoles) include fluconazole, itraconazole, voriconazole, posaconazole, and ravuconazole. Caspofungin is a representative of new group antifungals, other drugs - micafungin and anidulafungin - are expected. The article mentions single groups, principal representatives and some specific use with suggested dosing schedules. Main indications are documented by results of clinical studies.
- MeSH
- allylamin aplikace a dávkování farmakokinetika škodlivé účinky MeSH
- antifungální látky aplikace a dávkování kontraindikace škodlivé účinky aplikace a dávkování kontraindikace škodlivé účinky MeSH
- aspergilóza farmakoterapie MeSH
- echinokandiny aplikace a dávkování farmakokinetika škodlivé účinky MeSH
- flucytosin aplikace a dávkování kontraindikace škodlivé účinky MeSH
- kandidóza farmakoterapie MeSH
- kryptokokóza farmakoterapie MeSH
- lékové interakce MeSH
- mykózy farmakoterapie MeSH
- oportunní infekce farmakoterapie MeSH
