K rozvoji chronické myeloidní leukémie (CML) vede patologická BCR-ABL tyrozinkináza. Vývoj léků, které blokují BCR-ABL tyrozinkinázu, vedl k významnému zlepšení prognózy pacientů s CML. Inhibitor BCR-ABL imatinib vede k hematologickým a cytogenetickým remisím u pacientů s CML a stal se v současnosti lékem volby u CML. Nicméně je zde skupina nemocných s CML, kteří jsou na imatinib rezistentní nebo lék netolerují. Rezistence na imatinib bývá způsobena mutacemi BCR-ABL nebo aktivací alternativních onkogenních drah v leukemických buňkách. Dasatinib je nový a velmi účinný tyrozinkinázový inhibitor. Preklinická a klinická data ukazují, že dasatinib může být účinný u pacientů s CML, u nichž není imatinib účinný, čímž zlepšuje prognózu nemocných s CML.

BCR-ABL, a constitutively active tyrosine kinase, causes chronic myeloid leukaemia (CML). Rational development of drugs targeting BCR-ABL has significantly improved the treatment of CML. Imatinib (a BCR-ABL tyrosine kinase inhibitor) produces haematological and cytogenetic remissions across all phases of CML and is the present standard of care. However, imatinib resistance occurs in a significant proportion of patients and mechanisms of resistance include BCR-ABL mutations and activation of alternate oncogenic pathways. Dasatinib is a novel, potent, multi-targeted oral kinase inhibitor. Preclinical and clinical investigations demonstrate that dasatinib effectively overcomes imatinib resistance and has further improved the treatment of CML.

• MeSH
• akcelerovaná fáze myeloidní leukemie farmakoterapie   MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny MeSH
• chronická fáze myeloidní leukemie farmakoterapie   MeSH
• léková rezistence MeSH
• lidé MeSH
• monoklonální protilátky farmakologie   klasifikace   terapeutické užití   MeSH
• transplantace hematopoetických kmenových buněk využití   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• klinické zkoušky MeSH

• MeSH
• chronická myeloidní leukemie MeSH
• hematologie MeSH
• transplantace kmenových buněk MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• kolektivní monografie

• MeSH
• cytogenetika MeSH
• myeloidní leukemie MeSH
• nádorová transformace buněk MeSH

• MeSH
• chronická myeloidní leukemie MeSH
• cytotoxické testy imunologické MeSH
• doxorubicin farmakologie   MeSH
• metamizol farmakologie   MeSH
• nežádoucí účinky léčiv MeSH
• techniky in vitro MeSH

• MeSH
• bepridil toxicita   MeSH
• blokátory kalciových kanálů MeSH
• chronická myeloidní leukemie MeSH
• mitoxantron toxicita   MeSH

Východisko. Nové biočipové technologie umožňují současné sledování velkého počtu genů včetně semikvantita- tivního vyhodnocení jejich aktivity. V souvislosti s výzkumným zaměřením oddělění molekulární genetiky Ústavu hematologie jsme pomocí této nové techniky vyšetřili několik pacientů s diagnózou chronické myeloidní leukémie (CML), u které za jednu z hlavních patogenních změn je považován vznik fúzního bcr/abl genu, jehož produktem je protein s konstitutivní tyrozin kinázovou aktivitou, která se vymyká normální regulaci. Cílem studie bylo stanovení profilu genové exprese buněk periferní krve pacientů s chronickou myeloidní leukémií (s přestavbou bcr/abl) v době plně rozvinutého, ale ještě neléčeného onemocnění v porovnání s normálními buňkami zdravých osob. Metody a výsledky. Pro sledování genové exprese jsme využili Atlas Array technologii (firma CLONTECH), která zahrnuje izolaci RNA, přepis RNA na cDNA za současného radioaktivního značení 32 P. Radioaktivně značená cDNA byla hybridizována na Atlas Human Cancer cDNA Expression Array s 588 geny. Detekce signálů byla provedena autoradiograficky a pro vyhodnocení expresní aktivity byl použit software AtlasImage 1.5 (CLONTECH). Genová exprese byla studována u pěti pacientů s diagnózou CML a jedné kontrolní zdravé osoby. Z periferní krve byly izolovány leukocyty a u tří pacientů byly leukocyty separovány na granulocyty a mononukleární buňky. Genová exprese pacientů byla porovnána s genovou expresí kontrolní osoby. Expresní profily pacientů se dosti překrývaly a my jsme se zaměřili na největší rozdíly v expresi genů ve srovnání s kontrolou. Mezi geny, které u pacientů vykazovaly shodné změny v expresi, patří c-jun N-terminální kináza, MMP-8, MMP-9, integrin a E, integrin b, PDGF (zvýšená exprese) a ZAP-70, IRF1, MCL-1, STAT 5B, RARA, CDC25B, RPSA, TNFR (snížená exprese). Druhou skupinu tvoří geny, jejichž exprese se výrazně lišila od kontroly, ale u pacientů se vyskytují nepravidelně („jednotlivě”) - PCNA, MMP-17, CD59, rho G, CRAF1, PIG7 (zvýšená exprese) a notch, caspase 8, caspase 4, interleukin 6 receptor, rho B, TIMP1 (snížená exprese) atd. Závěry. Sledování expresních profilů u pacientů se stejnou diagnózou může přispět k odhalení genů, které participují na rozvoji daného onemocnění. Všeobecně se soudí, že ačkoliv je vznik bcr/abl fúzního genu hlavní příčinou, není jedinou determinantou určující rozvoj CML. Předkládaná studie vedla k odhalení změn genové exprese, které byly zřetelně vyjádřeny u všech pacientů a které lze proto považovat za typické, a ukázala změny vyjádřené jen v některých vzorcích. Ty ukazují na individuální variabilitu.

Background. The new technologies that have the DNA laboratory over recent years and the general progress in knowledge of the human genome, have allowed the simultaneous observation of the activity of a large number of genes. Chronic myeloid leukemia is characterized with abnormal tyrosine kinase activity of the fused bcr/abl gene, which is most often product of translocation between chromosomes 9 an 22. It is as yet unknown whether this is the only and sufficient cause of the disease, or whether other supporting and co-active abnormalities exist. It is also not yet clear whether an increase of proliferating activity or reduced programmed cell death plays the dominant role. The aim of this study was to make further steps in resolving the question as to which of these hypotheses fits better. Methods and Results. Membrane macroarrays (Clontech 7742-1: Human Cancer cDNA Expression Array with 588 gene probes) were used throughout the study, on which cDNA reverse-transcribed from total RNA in turn isolated from peripheral white blood cells and labelled with 32 P was hybridized. Cells obtained from 5 patients with confirmed diagnoses by cytogenetic and molecular (bcr/abl) analyses, but who had not yet been treated by chemotherapy, were the source of the material. In some cases mononuclears and granulocytes were also isolated by Ficoll-Paque centrifugation. Radioactivity was detected by autoradiography or by a Phosphorimager (Fujifilm FLA-2000). Comparison with normal gene expression (healthy donor) was made by subtraction using Clontech AtlaImage 1.5 software. Although changes of expression of identical genes were not observed in all of patients examined, the majority of them were concordant. Values at least double those of the controls applied to the activity of c-jun N-terminal kinase, MMP-8, MMP-9, integrin a E, integrin b and PDGF, whereas the expression of ZAP-70, IRF1, MCL-1, STAT 5B, RARA, CDC25B, RPSA, TNFR decreased. Increases of PCNA, MMP-17, CD59, rho G, CRAF1 and PIG7 or decreases of notch, caspase 8, caspase 4, interleukin 6 receptor, rho B and TIMP1 were observed only in some cell samples. Conclusions. It seems that some maturation processes and transmembrane signalling are blocked, as well as the effectors of apoptosis. On the other hand, the reduced activity of ZAP-70, IRF1 and MCL-1 also indicated that proliferation breaks were weakened. The involvement of both processes-released replication and ineffective apoptosis - was evident; the problem of bcr/abl gene fusion being the necessary first and sufficient step on the way towards developing chronic myeloid leukemia, however, remained unresolved.

• MeSH
• chronická fáze myeloidní leukemie diagnóza   genetika   MeSH
• DNA sondy MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• lidé MeSH
• regulace genové exprese u nádorů MeSH
• výpočetní biologie metody   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Chronická myeloidná leukémia (CML) je klonálne myeloproliferatívne ochorenie. Je asociovaná s translokáciou chromozómov 9 a 22 za vzniku tzv. Philadelphia chromozómu. Zvyčajne je diagnostikovaná v chronickej fáze, ale CML má potenciál progresie do agresívnej formy. Imatinib, inhibítor tyrozínových kináz, spôsobil prevrat v liečbe tohto ochorenia a je odporúčaný ako štandardná terapia chronickej fázy. Interferon alfa je akceptovaná alternatívna terapia u pacientov, ktorí netolerujú imatinib. Ak zlyhá liečba štandardnými dávkami imatinibu, je indikované navýšenie jeho dávok, tyrozínkinázové inhibítory druhej generácie alebo transplantáciakrvotvorby.

Chronic myeloid leukemia (CML) is a clonal myeloproliferative disorder. It is associated with translocation of chromosomes 9 and 22 and a so-called Philadelphia chromosome is formed. It is usually diagnosed in its chronic phase but CML has the potential of progression to an aggressive form. Imatinib, an inhibitor of tyrosine kinases, has revolutionized the treatment of this disease and is recommended as a standard therapy of its chronic phase. Interferon alpha is an accepted altemative therapy in patients who are intolerant to imatinib. If treatment with standard doses of imatinib fails, it is indicated to increase its doses, to use second generation tyrosine kinase inhibitors or hematopoietic transplantation.

• MeSH
• chemorezistence MeSH
• chronická fáze myeloidní leukemie diagnóza   patologie   terapie   MeSH
• cytogenetické vyšetření metody   MeSH
• lidé MeSH
• piperaziny aplikace a dávkování   MeSH
• polymerázová řetězová reakce metody   využití   MeSH
• prognóza MeSH
• pyrimidiny aplikace a dávkování   MeSH
• thiazoly aplikace a dávkování   MeSH
• transplantace hematopoetických kmenových buněk metody   trendy   využití   MeSH
• tyrosinkinasy antagonisté a inhibitory   terapeutické užití   MeSH
• vyšetřování kostní dřeně metody   využití   MeSH
• vztah mezi dávkou a účinkem léčiva MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Chronická myeloidní leukémie (CML) je charakterizována přítomností hybridního genu BCR-ABL, který vzniká v důsledku reciproké translokace t(9;22)(q34;q11) karyotypicky detekovatelné jako Ph chromozóm. Gen BCR-ABL kóduje hybridní protein s konstitutivně zvýšenou tyrozinkinázovou aktivitou, o kterém bylo prokázáno, že hraje zásadní roli v patogenezi onemocnění. Gen BCR-ABL je typickým znakem CML sloužícím k upřesnění diagnózy a sledování úspěšnosti léčby. Nejcitlivější metodou pro zjištění přítomnosti této aberace je reverzní transkriptázová polymerázová řetězová reakce (RT-PCR) detekující transkript BCR-ABL, se schopností zjistit 1 leukemickou buňku mezi 105–106 normálních leukocytů. Pro sledování změn v hladině transkriptů BCR-ABL je využívána kvantitativní RT-PCR (Q-RT-PCR), která má vysoký prognostický význam. Nárůst a vysoká hladina transkriptu BCR-ABL jednoznačně signalizují špatnou odpověď na léčbu a špatnou prognózu, naproti tomu pokles a nízká hladina BCR-ABL dobrou odpověď na léčbu a dobrou prognózu. Pomocí Q-RT-PCR je možno zjistit změny stavu onemocnění o několik týdnů i měsíců dříve než ostatními metodami. V ÚHKT v Praze byla Q-RT-PCR zavedena v roce 1994 pro potřebu časného zjištění relapsu u pacientů po transplantaci kmenových buněk (TKB) a nyní je využívána pro monitorování úspěšnosti léčby všech pacientů s CML. Potvrdili jsme, že tato citlivá, přesná a neinvazivní vyšetřovací metoda má pro sledování stavu pacientů s CML zásadní význam.

Chronic myeloid leukemia (CML) is characterized by the presence of BCR-ABL fusion gene resulting from the reciprocal chromosome translocation t(9;22)(q34;q11), karyotypically detected as Ph chromosome. BCR-ABL gene was proved to play the principal role in CML pathogenesis. It is a hallmark of CML used in diagnostics and monitoring of the response to the therapy. The most sensitive method of detecting BCR-ABL aberration is RT-PCR which is able to find a single in leukemic cell betweey 106 normal leukocytes. Monitoring of BCR-ABL transcript level by quantitative RT-PCR is of the high prognostic value. High or increasing BCR-ABL transcript number signalizes bad response to treatment and a bad prognosis. On the contrary RT-PCR negativity, low level, or decreasing BCR-ABL transcript number denotes good response to treatment and good prognosis. Q-RT-PCR can detect changes in disease status several weeks or even months earlier than other methods. In 1994 the Q-RT-PCR was introduced at the Institute of Hematology and Blood Transfusion in Prague and was used for early detection of relapse after transplantation. At present it is used in all patients with CML for monitoring of response to the treatment. We have confirmed that this precise, sensitive and non-invasive method is of the principal importance for monitoring of disease status in CML patients.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny farmakokinetika   genetika   krev   MeSH
• chronická myeloidní leukemie diagnóza   genetika   terapie   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• lidé MeSH
• methansulfonáty aplikace a dávkování   MeSH
• polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí ekonomika   metody   statistika a číselné údaje   MeSH
• přehledová literatura jako téma MeSH
• prognóza MeSH
• transplantace kmenových buněk MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Chronická myeloidní leukémie je myeloproliferativní onemocnění charakterizované přítomností abnormálního fúzního genu BCR-ABL, který kóduje konstitutivně aktivní Bcr-Abl tyrozinovou kinázu. Aktivita této kinázy je nezbytná a dostačující k buněčné transformaci, a proto je ideálním cílem farmakoterapie. Imatinib mesylát (Glivec®), specifický inhibitor Bcr-Abl kinázy, se stal pro vysokou účinnost a nízkou toxicitu lékem první volby u nemocných s nově diagnostikovanou chronickou myeloidní leukémií. Jedním z problémů terapie imatinibem je vznik rezistence. Mechanizmy vzniku rezistence na imatinib lze rozdělit do dvou základních skupin – závislé a nezávislé na Bcr-Abl kináze. V první skupině imatinib vůbec nebo nedostatečně inhibuje Bcr-Abl kinázu. Na molekulární úrovni jsou nejčastějšími příčinami tohoto typu rezistence amplifikace BCR-ABL genu, zvýšená exprese Bcr-Abl proteinu, či mutace v Abl kinázové doméně. Do první skupiny příčin rezistence patří abnormální exprese proteinových pump či alfa-1-kyselého glykoproteinu, které zabrání molekule imatinibu v přístupu k Bcr-Abl proteinu. U druhého typu rezistence je Bcr- Abl sice inhibována imatinibem, ale aktivovány jsou jiné signální molekuly udržující nádorový charakter buňky (např. jiné onkogenní kinázy). K rozlišení mechanizmu rezistence u pacienta lze kromě standardního cytogenetického vyšetření využít stanovení fosforylace specifického substrátu Bcr-Abl a/nebo mutační analýzu Abl kinázové domény na úrovni transkriptu. Výsledek těchto vyšetření může přispět k rozhodování o léčbě nemocného.

Chronic myeloid leukemia (CML) is a myeloproliferative disorder characterized by an abnormal fusion gene BCRABL. BCR-ABL encodes a constitutively active Bcr-Abl tyrosine kinase, which is required and sufficient for cellular transformation. Bcr-Abl is, therefore, an ideal target for pharmacotherapy. Imatinib Mesylate (Glivec®) is a specific inhibitor of Bcr-Abl kinase. Imatinib shows high efficiency and low toxicity in treatment of CML patients. The main problem of imatinib treatment is the development of resistance. The mechanisms of resistance can be divided into two groups. The first group is characterized by reactivation of Bcr-Abl kinase in spite of continual imatinib presence. This can be caused by BCR-ABL amplification, overexpression or mutation in Abl kinase domain. Imatinib might not even reach the target Bcr-Abl protein (possible causes: drug efflux or imatinib binding to alpha1-acid glycoprotein). In the second group of resistance mechanisms, the Bcr-Abl kinase is inhibited but the resistance is maintained by other signal transducers (e.g. Src kinases). Standard cytogenetics as well as assay evaluating the phosphorylation status of Bcr-Abl substrate and/or sequencing of Abl kinase transcript can be used to test the mechanism of resistance. Treatment of patients can be re-evaluated on the basis of the status of IM resistance.

• Klíčová slova
• Glivec,
• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny fyziologie   účinky léků   MeSH
• chemorezistence MeSH
• chronická myeloidní leukemie enzymologie   genetika   terapie   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• lidé MeSH
• myeloidní progenitorové buňky účinky léků   MeSH
• piperaziny terapeutické užití   MeSH
• pyrimidiny terapeutické užití   MeSH
• techniky in vitro MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• Klíčová slova
• ROFERON (HOFFMANN-LA ROCHE),
• MeSH
• chronická myeloidní leukemie farmakoterapie   MeSH
• dospělí MeSH
• interferon alfa aplikace a dávkování   farmakologie   terapeutické užití   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• senioři MeSH
• výsledek terapie MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• klinické zkoušky MeSH
• srovnávací studie MeSH