• MeSH
• roztroušená skleróza MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• neurologie
• NLK Publikační typ
• elektronické časopisy

• MeSH
• hmotnostní spektrometrie MeSH
• sulfonamidy MeSH
• toluen MeSH

• MeSH
• chromatografie kapalinová metody   využití   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• hmotnostní spektrometrie s elektrosprejovou ionizací metody   využití   MeSH
• morfin analýza   chemická syntéza   MeSH
• opioidní analgetika analýza   chemie   MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

• MeSH
• roztroušená skleróza MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• neurologie
• NLK Publikační typ
• elektronické časopisy

One of the possible usages of MALDI–TOF MS is identification of microorganisms. It is highly accurate and faster than other methods and suitable for a large area of microorganisms. But unfortunately cannot reliably differentiate some closely related species. Often, it is possible to detect pathogenic organisms and use their accurate determination for monitoring environment, food processing or clinical diagnostics. Data obtained from mass spectra are compared with library of microorganisms and result of this was agreement or disagreement of microorganisms with specific spectrum.

• Klíčová slova
• identifikace bakterií,
• MeSH
• Bacteria * izolace a purifikace   MeSH
• spektrometrie hmotnostní - ionizace laserem za účasti matrice metody   MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• přehledy MeSH

Úvod: Včasná a kauzální aplikace antibiotik u pacientů s pozitivní hemokulturou patří mezi základní předpoklady úspěšné léčby infekce. Izolace a následná identifikace bakterií z hemokultury klasickými (kultivačními) metodami však může trvat až několik dní. MALDI-TOF MS patří mezi metody, které umožňují rychlou identifikaci bakterií, a to nejen kultur z kultivačních médií, ale i přímo v klinickém materiálu. Metodika: Do studie byly zařazeny vzorky pozitivních hemokultur, které byly v letech 2016 až 2018 odebrány od pacientů Fakultní nemocnice Olomouc a následně byly vyšetřeny na Ústavu mikrobiologie Lékařské fakulty Univerzity Palackého v Olomouci. Vzorky pozitivních hemokultur byly zpracovány pomocí vlastního modifikovaného postupu, zahrnujícího odstranění krevních buněk pomocí centrifugace za nižších otáček. Následně byla pomocí centrifugace za vyšších otáček a promývání vzorku získána peleta, která byla testována pomocí MALDI-TOF MS. Výsledky: Ve studii bylo metodou přímé identifikace vyšetřeno celkem 110 pozitivních hemokultur. Správná identifikace na úrovni druhu byla vyšší u gramnegativních bakterií (88 %) v porovnání s grampozitivními bakteriemi (79 %) a také u nich bylo dosaženo vyšších hodnot identifikačního skóre. Hodnota identifikačního skóre vyšší nebo rovna než 2,0 byla u 62 % hemokultur obsahujících gramnegativní bakterie a 17 % hemokultur obsahujících bakterie grampozitivní. Hodnota identifikačního skóre v rozmezí 1,7–2,0 byla zjištěna u 21 % hemokultur gramnegativních a 33 % hemokultur s grampozitivními bakteriemi. Závěr: Přímá identifikace mikroorganismů z pozitivních hemokultur metodou MALDI-TOF MS umožňuje rychlejší diagnostiku a v důsledku zkrácení doby potřebné k dosažení výsledku identifikace patogenu může pozitivním způsobem významně ovlivnit antibiotickou léčbu pacientů.

Background: Early and causal administration of antibiotics in patients with a positive blood culture is an essential prerequisite for successful treatment of infection. However, isolation and subsequent identification of bacteria in a blood culture by classical (culture) methods may last several days. MALDI-TOF MS is a method allowing rapid identification of bacteria, not only cultures from culture media, but also directly in clinical specimens. Methods: The study included samples of positive blood cultures taken from patients in the University Hospital Olomouc between 2016 and 2018 and examined at the Department of Microbiology of the Faculty of Medicine, Palacký University Olomouc. Positive blood culture samples were processed using an in-house method involving the removal of blood cells by low-speed centrifugation. Subsequently, a pellet obtained by high-speed centrifugation and sample washing was tested by MALDI-TOF MS. Results: A total of 110 positive blood cultures were examined using the method of direct identification. At a species level, more Gramnegative bacteria (88 %) than Gram-positive bacteria (79 %) were correctly identified, with higher identification score values being obtained for the former. Identification score values of 2.0 or higher were found in 62 % of blood cultures containing Gram-negative bacteria and 17 % of blood cultures containing Gram-positive bacteria. Identification score values ranging from 1.7 to 2.0 were found in 21 % of Gram-negative blood cultures and 33 % of blood cultures containing Gram-positive bacteria. Conclusion: Direct identification of microorganisms from positive blood cultures using MALDI-TOF MS enables more rapid diagnosis. By reducing the time required to obtain the result of pathogen identification, it may positively affect the antibiotic treatment of patients.

• MeSH
• bakteriemie * diagnostické zobrazování   mikrobiologie   MeSH
• gramnegativní bakterie izolace a purifikace   patogenita   MeSH
• grampozitivní bakterie izolace a purifikace   patogenita   MeSH
• lidé MeSH
• senzitivita a specificita MeSH
• spektrometrie hmotnostní - ionizace laserem za účasti matrice metody   přístrojové vybavení   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Cíl práce: Ověřit možnosti metody MALDI TOF MS pro rychlou identifikaci vybraných původců bakteriálních zoonóz izolovaných Z různých druhů materiálů v reálných podmínkách rutinního provozu laboratoře. Materiál a metodika: Od srpna 2010 do dubna 2015 bylo metodou MALDI TOF MS na přístroji Microflex LT (Bruker Daltonics) provedeno celkem 4 174 identifikací vybraných původců bakteriálních zoonóz (Salmonella spp., Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Listeria monocytogenes, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis, Francisella tularensis, Brucella melitensis, Brucella suis a Cronobacter sakazakií). Bakteriální izoláty byly připraveny k testování jednoduchou přípravou vzorku pomocí zakápnutí bakteriální kultury na terčíku kovové destičky speciální matricí. Vyhodnocení výsledků proběhlo pomocí standardního protokolu programem MALDI Biotyper v provozních podmínkách. Výsledky: U 74,8 % testovaných izolátů sledovaných bakteriálních druhů bylo dosaženo hodnoty identifikačního skóre (IS) v rozmezí 2-3, což z hlediska interpretace výsledku představuje v praxi uspokojivý výsledek. Urychlení diagnostiky bakterií Campylobacter spp. a Listeria monocytogenes testováním suspektních kultur získaných přímo ze selektivně-diagnostických půd v těchto případech snížío identifikační skóre. Závěr: MALDI TOF MS je vhodná a rychlá metoda k identifikaci sledovaných původců bakteriálních zoonóz.

Objective: To verify whether the MALDI TOF MS method can be used for rapid identification of selected zoonotic bacterial pathogens isolated from various types of materials in the real conditions of routine laboratory work. Material and methods: Between August 2010 and April 2015, the Bruker's MALDI TOF MS system was used for 4,174 identifications of selected zoonotic bacterial pathogens (Salmonella spp., Campylobacter jejuni, Campylobacter coli. Listeria monocytogenes, Yersinia enterocolitica. Yersinia pseudotuberculosis, Francisella tularensis, brucella melitensis. Brucella suis and Cronobacter sakazakii). The samples were prepared for the test by simply mixing a bacterial culture with a matrix on a steel target plate. The results were evaluated with a standard protocol of the system using the MALDI Biotyper software under operating conditions. Results: In 74.8% of the tested isolates of the above bacterial species, the identification scores ranged between 2 and 3, which is satisfactory for result interpretation in routine practice. Acceleration of identification of Campylobacter spp. and Listeria monocytogenes by testing suspicious cultures obtained directly from selective-diagnostic media decreased the identification scores in these cases. Conclusion: MALDI TOF MS is a suitable and rapid method for identification of the selected zoonotic bacterial pathogens.

• MeSH
• bakteriologické techniky metody   přístrojové vybavení   využití   MeSH
• klinické laboratorní techniky MeSH
• lidé MeSH
• ribozomální proteiny analýza   MeSH
• spektrometrie hmotnostní - ionizace laserem za účasti matrice * metody   využití   MeSH
• zoonózy * mikrobiologie   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Uveden postup při současné identifikaci a kvantifikaci a amfetaminu a metamfetaminu v lidských vlasech. Metoda zahrnuje promytí vlasů (postupně destilovaná voda teploty asi 50 'C, 0,1M kyselina chlorovodíková, destilovaná voda do neutrální reakce, metanol), usušení na vzduchu, homogenizaci rozstříháním (1 - 2 mm délky), alkalickou hydrolýzu (20 mg vlasů, 1 ml IM hydroxidu sodného, 55 °C, 120 min.), neutralizaci IM kyselinou chlorovodíkovou na pH = 7, extraktivní benzoylaci s 2,3,4,5,6-pentafluorobenzoylchloridem (0,3 ml IM hydroxidu sodného, 4 ml cyklohexanu, 30 lil cyklohexylaminu v cyklohexanu koncentrace 20 ng/μl - vnitřní standard, 50 μl vodného roztoku trietylaminhydrochloridu koncentrace 100 mg/ml - katalyzátor reakce a 10 μl derivatizačního cinidla 2,3,4,5,6-pentafluorobenzoylchloridu ředění 1:10, třepáni 5 min. v ruce a 10 min. ponechani v klidu), odstředění (5 min., 3000 ot./min.), odebrání 2 ml cyklohexanové vrstvy, její odpaření při 40 °C v dusíkové atmosféře a naředění 100 μl cyklohexanu. Derivatizovaný extrakt byl podroben analýze metodou GC-MS. Uvedený postup byl použit k segmentační analýze vlasů dvou osob dlouhodobě zneužívajících metamfetamin. Nalezené koncentrace se pohybovaly v rozmezi U,99 - 5,25 mg/kg metamfetaminu a 0,13 - 0,73 mg/kg amfetaminu.

The authors present a procedure of concurrent identification and quantification of amphetamine and metamphetamine in human hair. The method involves rinsing of the hair (distilled water 55 °C, 0.1 M hydrochloric acid, distilled water to neutral reaction , methanol) drying in air, homogenization by cutting (1-2 mm long), alkaline hydrolysis (20 mg hair, 1 ml IM sodium hydroxide, 55 "C, 120 min.), neutralization with 1 M hydrochloric acid to pH=7, extracting benzoylation with 2,3,4,5,6-pentafluorobenzoyl chloride (0.3 ml 1 M sodium hydroxide, 4 ml cyclohexane, 30 ul cyclohexylamine in cyclohexane of a concentration of 20 ng/ul - internal standard, 50 ul aqueous ^oiution of triethylamine hydrochloride concentration of 100 mg/ml - reaction catalyst and 10 ul of derivation agent 2,3,4,5,6-pentafluorobenzoyl chloride dilution 1:10 , shaking for 5 mins. by hand and leaving to stand for 10 mins.), centrifugation (5 mins., 3000 rotations/min.), collection of 2 ml cyclohexane layer, its evaporation at 40 *C in nitrogen atmosphere and dilution with 100 ul cyclohexane.The derivated exctract was subjected to analysis by the GC-MS method. The procedure was used for segmentation analysis of hair of two subjects abusing metamphetamine for prolonged periods. The revealed concentrations varied within the range of 0.99-5.25 mg/kg metamphetamine and 0.13-0.73 mgAcg amphetamine.

• MeSH
• amfetamin analýza   MeSH
• chromatografie plynová metody   přístrojové vybavení   MeSH
• lidé MeSH
• sekvenční analýza metody   MeSH
• soudní lékařství MeSH
• spektrometrie hmotnostní sekundárních iontů MeSH
• vlasy, chlupy MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

• MeSH
• chromatografie plynová metody   MeSH
• narkotika analýza   chemie   moč   MeSH
• spektrometrie hmotnostní - bombardování rychlými atomy MeSH

• MeSH
• biochemie metody   MeSH
• hmotnostní spektrometrie s elektrosprejovou ionizací metody   MeSH
• klinické laboratorní techniky MeSH
• spektrometrie hmotnostní - ionizace laserem za účasti matrice metody   MeSH
• Publikační typ
• monografie MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• chemie, klinická chemie
• biochemie