• MeSH
• hematologické testy MeSH
• imunofenotypizace * MeSH
• Publikační typ
• monografie MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• hematologie a transfuzní lékařství

• MeSH
• imunofenotypizace metody   využití   MeSH
• lymfom diagnóza   imunologie   MeSH
• lymfoproliferativní nemoci diagnóza   klasifikace   MeSH
• plazmocytom diagnóza   imunologie   MeSH
• průtoková cytometrie využití   MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Cieľom predkladanej štúdie bolo vyšetriť výskyt subpopulácií lymfocytov v kožnom tkanivezdravých jedincov. Vyšetrovali sme kožné biopsie 16 pacientov bez doteraz zisteného kožnéhoochorenia a bez akejkoľvek imunomodulačnej liečby. Vo vzorkách kože bolo nájdené relatívne nízkepercento lymfocytov (1 %). Vo vzorkách boli zastúpené takmer výlučne T-lymfocyty. Ďalej bolostanovované percento B-lymfocytov (CD19+), NK-buniek (CD16+56+), pomocných T-lymfocytov(CD3+CD4+), tlmivých T-lymfocytov (CD3+CD8+), pomer CD4/CD8, aktivovaných T-lymfocytov(CD3+HLA-DR+, CD3+CD25+, CD3+CD69+) a „naivných“ T-lymfocytov (CD4+CD45RA+). V porovnanís periférnou krvou bolo zistené zvýšené zastúpenie niektorých aktivačných markerov na povrchubuniek kožného tkaniva, čo môže byť pravdepodobne spôsobené neustálym kontaktom kože s antigénmivonkajšieho prostredia.

The aim of the recent study was to investigate the occurrence of the lymphocytes subpopulationsin a skin tissue of the healthy donors. We investigated the skin biopsies of 16 patients without anyskin diseases and without any immunomodulation treatment. There was found relatively lawpresence of lymphocytes (1 %) in the skin samples. There were found T-lymphocytes almost exclusively.In the skin samples percentage of B-cells (CD19+), naturals killers (CD16+CD56+), helper/inducerT-lymphocytes (CD3+CD4+), suppressor/cytotoxic T-lymphocytes (CD3+CD8+), CD4/CD8 ratio,activated T-lymphocytes (CD3+HLA-DR+, CD3+CD25+, CD3+CD69+), naive T-lymphocytesCD4+CD45RA+) was determined. Compared with peripheral blood there was an increase of some ofthe activation markers on the surface of the skin cells, what may be probably connected witha continuous touch of the skin with the antigens of an external environment.

• MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• kůže MeSH
• lidé MeSH
• podskupiny lymfocytů MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• imunofenotypizace využití   MeSH
• leukemie diagnóza   MeSH
• průtoková cytometrie metody   využití   MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Komplexrií vyšetřování svalových dystrofií pomocí klinických, bioptických a molekulárně genetických diagnostických metod se v naší zemi dosud provádělo pouze ve velmi omezeném rozsahu. Naše skupina (kliiiiků, patologů a genetiků) vyšetřila od roku 1992 do roku 2000 přibližně 240 pacientů suspektních ze svalové dystrofie. Většina pacientů pochází z jihomoravského a severomoravského regionu. Pacienti byli k vyšetření odesíláni zeiména z kUnik a oddělení neurologie a dětské neurologie, dále z odděleni klinické genetiky a méně často z interních klinik a oddělení. Vyšetřovaní pacienti byli podle závěrečné diagnózy rozděleni do skupin pacientů s dystrofinopatií (DMD a BMD), přenašeček dystrofinopatií, pacientů s kongenitální svalovou dystrofií s deficitem merosinu a pacientů s Emery-Dreifussovou svalovou dystrofií, včetně přenašeček tohoto onemocnění. Někteří členové rodin, v nichž se vyskytla dystrofinopatie, byli následně vyšetřeni metodami segregační analýzy. Pacienti DMD/BMD mohou být pomoci molekulárně genetických metod zachyceni ve vysokém procentu. Metoda vyšetření mRŇA pomocí RT PCR a PTT z biopsie dovoluje detegovat delece, duplikace, ale i bodové mutace dystrofinového genu, a tím má vyšší diagnostický rozsah než vyšetření DNA lymfocytů periferní krve metodou multiplex PCR, které zachytí 65 % všech mutací, prakticky jenom delece. Imunofenotypizace dystrofinu se uplatní zejména v odhalování DMD. Deficit sarkolemové reaktivity v karboxytermmální a střední doméně (Dys 1 a Dys 2) jednoznačně signalizuje defektní dystrofiu. Naproti tomu menší deficity dystrofinu u BMD (a též u přenašeček) nemusejí být v biopsii zachyceny. V těchto případech je nutné doplnit vyšetření imunoblotingem nebo analýzou genotypu. Vyšetřování pacientů s klinicky diagnostikovanou svalovou dystrofií by mělo většinou začít vyšetřením biopsie, z níž je možno odhadnout přítomnost a stupeň strukturálních změn, a aplikací protilátek proti DGC případně odhalit patřičný deficit. Imunohistochemické vyšetření je možné doplnit imunoblotingem a tak navést další molekulárně genetické vyšetření DNA či mRNA. Svalovou biopsii je možno v případě deficitu merosinu a emerinu nahradit méně invazivními metodami, jako kožní biopsií nebo výtěrem z bukální sliznice. Při deficitech proteinů DGC je nutno při interpretaci nálezů respektovat možnost sekundární alterace jiných složek, a tak imunohistochemie sama o sobě nemusí být dostatečně informativní. Identifikace a bližší diagnostické zařazení pacientů s deficitem merosinu, sarkoglykanů, emerinu, kalpainu a dalších je možné díky možnosti použití protilátek, které jsou na trhu. Detekce těchto pacientů v naší zemi teprve čeká na jejich soustavné vyhledávání opřené o aplikaci metod popsaných a diskutovaných v tomto sdělení.

Complex diagnosis of muscular dystrophies including clinical, bioptical and molecular genetic approaches has been provided in a limited extent in this country. Our group of neurologists, pathologists and geneticists has examined approximately 240 patients suspected of having muscular dystrophies, mostly coming from Southern and Northern Moravia. The patients were sent to the examination most often firom departments of neurology and clinical genetics, and less firequently fi:om departments of internal medicine. According to the final diagnosis, the patients were divided into groups: with dystrophinopathies and carriers of dystrophinopathies (DMD/BMD), merosin deficient form of congenital muscular dystrophy, and Emery-Dreifuss muscular dystrophy including the carriers of this disease. Some relatives of patients with dystrophinopathies were also examined using the methods of segregation analysis. High proportion of the DMD/BMD patients can be detected by the methods of molecular genetics. Analysis of mRNA using RT PCR and PTT enables the detection of deletions, dupUcations, and point mutations in dystrophin gene and encompasses a larger diagnostic scope in comparison with examinations of DNA level by the multiplex PCR method from the peripheral blood which enables only deletion detections. Immunophenotyping of the dystrophin protein plays an important role especially using antibodies against carboxyterminal (DYS2) and rod domain (DYSl) of dystrophin. Deficient sarcolemmal expression of DYS2 and DYSl reveales unambiguously a pathological dystrophin. On the other hand, less pronounced deficiencies in dystrophin expression in BMD patients and DMD/BMD carriers may not always be detected in muscle biopsies. In this case, it is necessary to supplement the examination by Western blotting and genotype analysis. The examination of patients with clinically diagnosed muscular dystrophy shoidd start with á muscle biopsy which enables the estimation of presence and degree of structural changes. Application of antibodies against the components of DGC and emerin may reveal a deficiency in expression of these proteins. Immunohistochemical examination completed by Western blotting leads to the subsequent molecular genetic analysis of DNA or mRNA. Secondary deficiencies in expression of other DGC proteins are often revealed in muscle biopsies of dystrophinopathies and this fact must be taken into account in the evaluation of immunohistochemical findings. There is a possibility of replacement of invasive muscle biopsy by skin biopsy or buccal mucosal smears in cases of merosin and emerin deficiencies. Commercially available antibodies against merosin, emerin, calpain and sarcoglycans enable extensive identification and detailed classification of muscular dystrophies. Screening of the patients based on the application of methods described and discussed in this report is the task of the forthcoming period.

• MeSH
• DNA analýza   MeSH
• genotyp MeSH
• imunofenotypizace metody   MeSH
• messenger RNA analýza   MeSH
• molekulární biologie metody   MeSH
• svalové dystrofie diagnóza   genetika   patologie   MeSH
• svalový tonus MeSH

Ve své práci prezentujeme kazuistiky 2 pacientek, které byly léčeny několik let pro těžký atopický ekzém s erytrodermií na kožní ambulanci. Při rutinní imunofenotypizaci T a B lymfocytů na průtokovém cytometru jsme u jedné ženy našli 2 populace T lymfocitů - se sníženou a normální expresí znaku CD3, zvýšené zastoupení CD3+ CD4+ lymfocytů a zvýšený imunoregulační index CD4+/CD8+ (IRI = 9,5). U druhé ženy jsme našli též zvýšené zastoupení CD3+CD4 lymfocytů, zvýšený imunoregulační index CD4+/CD8+ (IRI = 9,3) a navíc B lymfocyty vykazovaly dvojí expresi znaku CD20 - sníženou a normální. Tyto změny nás vedly k hodnocení krevního obrazu pod mikroskopem. V nátěru u obou pacientek byly nalezeny cerebriformní tzv. Sézaryho buňky, které jsou charakteristické pro Sézaryho syndrom či leukemizující formu mycosis fungoides. Při podrobnějším vyšetření hematologem laboratorní testy u první ženy svědčily pro Sézaryho syndrom. U druhé ženy byla stanovena diagnóza chronické lymfocytární leukémie (B-CLL), a když zatím nebyla definitivně potvrzena diagnóza mycosis fungoides, nelze ji zcela vyloučit. Jednalo by se o vzácnou koincidenci malignity B buněčné lymfocytární řady a začínajícího kožního T buněčného lymfomu.

We present the case reports of 2 women who were several years treated for severe atopic eczema with erythrodermia by dermatolog ists. In one woman we found 2 populations of T lymphocytes during a routine immunofenotypig of T a B lymphocytes by flow cytometry – lymphoc ytes with low and normal expression of CD3 marker ,a high number of CD3+ and CD4+ lymphocytes and a high immunoregulatory index CD4+ / CD8+ (IRI = 9.5). In the other woman we found also a high number of CD3+ and CD4+ lymphocytes, a high immunoregulatory index CD 4+/ CD8+ (IRI= 9.5) and B lymphocytes showed dual expression of CD20 marker - low and normal. Owing to these findings we indicated examina- tion of the blood smear by an optic microscope. We found cerebri form cells, known as Sézary cells which are characteristic for Sézary syndrome or leukaemic form of mycosis fungoides in the blood smears of both patients. On the basis of a detailed haematological laborato ry tests Sézary syndrome was diagnosed in the first woma n. The diagnosis of chronic lymphocytic leukaemia (B-CCL) was assed in the other woman. Mycosis fungoides haven’t been proved yet, but it cannot be fully excluded. If mycosis fungoides would evolve it would be a rare coinci dence of B-cell lymphocyte malignity and an incipient T-cell lymphoma.

• MeSH
• časná diagnóza MeSH
• imunofenotypizace využití   MeSH
• kožní T-buněčný lymfom diagnóza   imunologie   MeSH
• lidé MeSH
• mycosis fungoides diagnóza   imunologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH

Úvod a cíl studie: Uterinní NK (uNK) buňky jsou specializovanou subpopulací NK (natural killer) lymfocytů nacházejících se v endometriu. Hrají klíčovou roli v regulaci imunitní odpovědi a v procesu implantace embrya. Cílem této studie je retrospektivní analýza výsledků léčby metodou in vitro fertilizace (IVF) v souboru žen, které podstoupily imunofenotypizaci uNK buněk a na základě výsledků tohoto vyšetření byly, nebo nebyly léčeny imunomodulační terapií. Metody: Studie zahrnovala 122 pacientek, které podstoupily imunofenotypizaci uNK buněk v období od dubna do prosince 2023. Imunofenotypizace byla provedena metodou průtokové cytometrie. Pacientky byly roztříděny do čtyř skupin dle fenotypu uNK buněk: normální nálezy, nízké absolutní a relativní počty uNK (LOW-IMMUNE profil), nízké počty uNK v kombinaci s nežádoucím posunem směrem k cytotoxickému uNKdim imunofenotypu (MIXED-IMMUNE profil) a normální počty uNK, ale nežádoucí posun v poměru cytotoxických a regulačních uNK s cytotoxickým fenotypem (OVER-IMMUNE profil). Byly hodnoceny výsledky embryotransferu a výskyt potratů do ukončeného 12. týdne těhotenství v jednotlivých skupinách. Výsledky: Nejvyšší míra dosažení klinické gravidity byla nalezena v léčené skupině OVER- -IMMUNE (70 %), následované skupinou MIXED-IMMUNE (60 %). Skupina LOW-IMMUNE se od neléčené NORMAL skupiny signifikantně nelišila (p = 0,205). Nedostatečná imunitní aktivace (LOW-IMMUNE profil) byla signifikantně nejčastěji sdružena s prvotrimestrální těhotenskou ztrátou (p < 0,0001). Závěr: Tato studie přináší nové poznatky o potenciálu imunofenotypizace uNK buněk a následné imunomodulační terapie v léčbě poruch plodnosti. Ačkoli výsledky naznačují možné klinické přínosy, je zapotřebí dalšího výzkumu k potvrzení těchto zjištění a k objasnění mechanizmů, které vedou ke zlepšení výsledků léčby technikami asistované reprodukce.

Introduction and objective: Uterine NK (uNK) cells, a specialized subpopulation of natural killer (NK) lymphocytes located in the endometrium, play a crucial role in regulating the immune response and in the process of embryo implantation. This study aims to retrospectively analyze the outcomes of in vitro fertilization (IVF) treatment in a cohort of women who underwent uNK cell immunophenotyping with subsequent immunomodulatory therapy applied based on the results. Methods: The study included 122 patients who underwent uNK cell immunophenotyping between April and December 2023. Immunophenotyping was performed using flow cytometry. Patients were categorized into four groups according to their uNK cell phenotypes: normal findings, low absolute and relative numbers of uNK cells (LOW-IMMUNE profile), low numbers of uNK cells combined with the shift towards the cytotoxic uNKc dim immunophenotype (MIXED-IMMUNE profile), and normal numbers of uNK cells, but an undesirable shift in the ratio of cytotoxic to regulatory uNK cells towards the cytotoxic uNK dim phenotype (OVER-IMMUNE profile). Embryo transfer outcomes and the occurrence of miscarriages up to the 12th week of pregnancy were evaluated in each group. Results: The highest clinical pregnancy rate was observed in the treated OVER-IMMUNE group (70%), fol lowed by the MIXED-IMMUNE group (60%). The LOW-IMMUNE group did not differ significantly from the untreated NORMAL group (P = 0.205). Insufficient immune activation (LOW-IMMUNE profile) was significantly associated with first-trimester pregnancy loss (P < 0.0001). Conclusion: This study provides new insights into the potential benefits of uNK cell immunophenotyping and subsequent immunomodulatory therapy in treating fertility disorders. While the results indicate possible clinical advantages, further research is necessary to confirm these findings and elucidate the mechanisms leading to improved outcomes in assisted reproductive techniques.

• Klíčová slova
• uterinní NK buňky, imunofenotypizace lymfocytů, opakované selhání implantace,
• MeSH
• buňky NK MeSH
• endometrium cytologie   MeSH
• fertilizace in vitro * MeSH
• habituální potrat MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• imunomodulace MeSH
• lidé MeSH
• průtoková cytometrie metody   MeSH
• retrospektivní studie MeSH
• ženská infertilita * MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH

The EU-supported EuroFlow Consortium aimed at innovation and standardization of immunophenotyping for diagnosis and classification of hematological malignancies by introducing 8-color flow cytometry with fully standardized laboratory procedures and antibody panels in order to achieve maximally comparable results among different laboratories. This required the selection of optimal combinations of compatible fluorochromes and the design and evaluation of adequate standard operating procedures (SOPs) for instrument setup, fluorescence compensation and sample preparation. Additionally, we developed software tools for the evaluation of individual antibody reagents and antibody panels. Each section describes what has been evaluated experimentally versus adopted based on existing data and experience. Multicentric evaluation demonstrated high levels of reproducibility based on strict implementation of the EuroFlow SOPs and antibody panels. Overall, the 6 years of extensive collaborative experiments and the analysis of hundreds of cell samples of patients and healthy controls in the EuroFlow centers have provided for the first time laboratory protocols and software tools for fully standardized 8-color flow cytometric immunophenotyping of normal and malignant leukocytes in bone marrow and blood; this has yielded highly comparable data sets, which can be integrated in a single database.

• MeSH
• hematologické nádory diagnóza   imunologie   MeSH
• imunofenotypizace normy   MeSH
• laboratoře normy   MeSH
• lidé MeSH
• monoklonální protilátky diagnostické užití   MeSH
• nádorové biomarkery imunologie   MeSH
• prognóza MeSH
• průtoková cytometrie přístrojové vybavení   metody   normy   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• přehledy MeSH
• Geografické názvy
• Evropa MeSH

Analýza punktátů kostní dřeně pomocí průtokové cytometrie má zásadní význam pro diagnostiku hematoonkologických onemocnění. Technika poskytuje rychlé určení přítomnosti, liniové příslušnosti a přibližného stádia zralosti patologické populace pomocí analýzy exprese povrchových, cytoplazmatických a jaderných molekul. I přes nesporné výhody má průtoková cytometrie ve svých interpretačních možnostech limity, které však vhodně doplňují další vyšetření, zejména vyšetření morfologické a imunohistochemické. Právě imunohistochemie sdílí s průtokovou cytometrií základní princip detekce patologické populace i skladbu vyšetřovaných molekul. Dále však obě techniky nabízí různé úhly pohledu na daný vzorek a navzájem doplňují diagnosticky hluchá místa. Nezřídkakdy tak až součinnost obou postupů přináší kýžený podrobný obraz o zastoupení a typu patologické populace v kostní dřeni. Text článku přináší přehled základních postupů při diagnostice hematologických malignit pomocí průtokové cytometrie a zamýšlí se nad přednostmi a slabinami průtokové cytometrie ve vztahu k imunohistochemickému vyšetření.

Analysis of bone marrow samples by flow cytometry is essential for the diagnosis of hematological neoplasms. The technique provides rapid determination of the presence, lineage, and approximate stage of maturity of the pathological population by analyzing the expression of surface, cytoplasmic, and nuclear molecules. Despite the indisputable advantages, flow cytometry has its limits, which, however, replace other techniques, especially morphological and immunohistochemical examinations. It is immunohistochemistry that shares with flow cytometry the basic principle of detection of the pathological population as well as the portfolio of investigated molecules. Both techniques however offer different points of view on the given sample and complement each other. The combination of both procedures often provides the desired detailed picture of the presence and type of pathological population in the bone marrow. The article provides an overview of basic procedures in the diagnosis of hematological malignancies using flow cytometry and reflects on the strengths and weaknesses of flow cytometry in relation to immunohistochemical examination.

• MeSH
• hematologické nádory diagnóza   MeSH
• imunofenotypizace MeSH
• imunohistochemie metody   MeSH
• lidé MeSH
• průtoková cytometrie * metody   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Refractory cytopenia of childhood is the most common type of childhood myelodysplastic syndrome. Because the majority of children with refractory cytopenia have a normal karyotype and a hypocellular bone marrow, differentiating refractory cytopenia from the immune-mediated bone marrow failure syndrome (very) severe aplastic anemia can be challenging. Flow cytometric immunophenotyping of bone marrow has been shown to be a valuable diagnostic tool in differentiating myelodysplastic syndrome from non-clonal cytopenias in adults. Here, we performed the first comprehensive flow cytometric analysis of immature myeloid, lymphoid cells and erythroid cells, and granulocytes, monocytes, and lymphoid cells in bone marrow obtained from a large prospective cohort of 81 children with refractory cytopenia. Children with refractory cyotopenia had a strongly reduced myeloid compartment, but not as severe as children with aplastic anemia. Furthermore, the number of flow cytometric abnormalities was significantly higher in children with refractory cytopenia than in healthy controls and in children with aplastic anemia, but lower than in advanced myelodysplastic syndrome. We conclude that flow cytometric immunophenotyping could be a relevant addition to histopathology in the diagnosis of refractory cytopenia of childhood. (The multi-center studies EWOG-MDS RC06 and EWOG-MDS 2006 are registered at clinicaltrials.gov identifiers 00499070 and 00662090, respectively).

• MeSH
• aplastická anemie diagnóza   imunologie   patologie   MeSH
• CD antigeny imunologie   MeSH
• diferenciální diagnóza MeSH
• dítě MeSH
• erytroidní buňky imunologie   patologie   MeSH
• granulocyty imunologie   patologie   MeSH
• imunofenotypizace * MeSH
• kojenec MeSH
• kostní dřeň imunologie   patologie   MeSH
• lidé MeSH
• lymfocyty imunologie   patologie   MeSH
• mladiství MeSH
• monocyty imunologie   patologie   MeSH
• myelodysplastické syndromy diagnóza   imunologie   patologie   MeSH
• pancytopenie diagnóza   imunologie   patologie   MeSH
• předškolní dítě MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• stupeň závažnosti nemoci MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• předškolní dítě MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• klinické zkoušky MeSH
• multicentrická studie MeSH
• práce podpořená grantem MeSH