Cytometrická imunofenotypizace patří k nejpřínosnějším metodám pro diagnostiku AL. Hlavními výhodami jsou její rychlost, spolehlivost a schopnost hodnotit vyšetřované parametry na úrovni jednotlivých buněk. Mezi nevýhody patří ekonomická náročnost. Výsledky cytometrické imunofenotypizace je nutno expertně interpretovat a sdělit klinikovi takovým způsobem, aby byly zodpovězeny relevantní otázky pro zařazení a léčbu pacienta. Pomocí průtokové cytometrie lze hodnotit i další parametry, jako je množství DNA nebo proteóm. Praktické diagnostické uplatnění nových možností, které přinášejí multiparametrické přístroje nové generace, se prověřuje.

Cytometric immunophenotyping is one of the most powerful methods in acute leukemia diagnostics. Main advantages are its speed, reliability and knowledge of parameters investigated at a single-cell level. Disadvantages may include relative expensiveness compared to some basic methods. Cytometric immunophenotyping should be interpreted by an expert and reported to the clinical physician so that all relevant questions regarding the patient's classification and treatment are addressed adequately. Flow cytometry can evaluate other parameters such as the DNA contents or proteome analysis. Practical diagnostic usefulness of the newest generation multiparametric instruments is being assessed.

• MeSH
• akutní bifenotypická leukemie diagnóza   klasifikace   MeSH
• akutní lymfatická leukemie * diagnóza   klasifikace   MeSH
• akutní myeloidní leukemie diagnóza   klasifikace   MeSH
• imunofenotypizace * metody   využití   MeSH
• lidé MeSH
• proteomika MeSH
• průtoková cytometrie * metody   využití   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Úvod: Lymfom z plášťových buněk (MCL) je vzácná zralá B-lymfoidní neoplazie charakteristická nadměrnou expresí cyklinu D1 a většinou spojená s translokací t(11;14). MCL vykazuje klasickou morfologii nebo se vyskytuje v některé ze 4 morfologických variant (malobuněčná, pleomorfní, blastoidní a podobná lymfomu z marginální zóny). Imunofenotyp je charakteristický vysokou expresí pan-B-markerů CD19, CD20, CD22 a CD79, povrchových imunoglobulinů IgM, IgD včetně jejich lehkých řetězců a znaku CD5. Specifická je intranukleární exprese cyklinu D1. Povrchový FMC7 je většinou pozitivní, pravidelně je pozitivní také CD43, CD38, bcl-2 a transkripční faktor SOX11. Znaky CD23, CD10, CD11c, CD103, CD200 a bcl-6 jsou u MCL typicky negativní. Materiál a metody: Soubor zahrnoval 16 případů nově diagnostikovaného MCL (vzorky periferní krve, kostní dřeně, lymfatické uzliny a cerebrospinálního likvoru). Cytomorfologické hodnocení se realizovalo v nátěrech periferní krve, kostní dřeně, imprintech lymfatické uzliny a cytospinu cerebrospinálního likvoru po klasickém panoptickém barvení se zařazením k jednotlivým cytomorfologickým formám MCL. Imunofenotyp byl stanoven imunofenotypizací na průtokovém cytometru FACS Canto II výrobce Becton-Dickinson po přípravných procedurách. Multiparametrová analýza povrchové exprese diagnostických markerů zahrnovala stanovení pozitivity či negativity znaků CD19, CD20, CD22, CD79b, povrchových lehkých řetězců kappa a lambda, CD23, FMC7, CD5, CD10, CD25, CD35, CD38, CD11c, CD103 a CD200 a intenzity jejich exprese (MFI, mean fluorescence intensity) s využitím vlastního diagnostického panelu. Výsledky: V souboru bylo 11 mužů a 5 žen s mediánem věku 70 let. Cytomorfologické nálezy zahrnovaly 7 případů klasického MCL a 9 variantních forem (4krát malobuněčná, 3krát pleomorfní, 1krát blastoidní a 1krát podobná lymfomu z marginální zóny). Povrchové markery CD19, CD20, CD22 a CD79b byly konstantně pozitivní s vysokou úrovní exprese (nejvyšší intenzita exprese u CD20). Povrchové lehké řetězce kappa a lambda se vyskytly alternativně u poloviny případů (intenzita exprese lambda zřetelně převažovala). Znak CD5 měl většinou vysokou úroveň exprese, dva případy byly CD5-negativní. FMC7 byl pozitivní u 10 případů a vykazoval velmi variabilní úroveň exprese. Exprese CD25 byla variabilní, marker CD35 byl pozitivní u 3/4 nemocných, CD38 byl většinově pozitivní s vysokou intenzitou exprese. Negativní byly CD23, CD11c a CD103, většinově negativní byl také CD43. 1 případ byl CD10-pozitivní, 2 případy byly CD200-pozitivní. Variabilita intenzity exprese byla obvyklá i u znaků s vysokou mírou exprese. Závěr: Stanovení imunocytologického profilu je jedním ze základních prvků diagnostiky MCL. Cytomorfologická a imunofenotypová variabilita MCL je značná. Je nutná pečlivá diferenciální diagnostika MCL, chronické lymfocytární leukemie, lymfomu z marginální zóny a některých případů B-prolymfocytární leukemie. Použitý imunofenotypizační panel je vhodný pro diagnostiku drtivé většiny případů MCL.

Introduction: Mantle-cell lymphoma (MCL) is a rare lymphoid neoplasm of B-cell origin characterized by over-expres-sion of cyclin D1 and it is usually associated with the chromosomal translocation t(11; 14). MCL may exhibit classical morphology or one of 4 morphological variants (small-cell, pleomorphic, blastoid and marginal zone lymphoma-like). The immunophenotype is characterized by the high expression of pan-B-cell markers - CD19, CD20, CD22, CD79, surface membrane immunoglobulins IgM, IgD including their light chains and CD5 antigen. The intranuclear expres-sion of cyclin D1 is specific for MCL. The surface membrane marker FMC7 is usually positive; CD43, CD38, bcl-2 and transcription factor SOX11 are regularly positive as well. The antigens CD23, CD10, CD11c, CD103, CD200 and bcl-6 are typically negative in MCL. Methods: 16 cases of newly diagnosed MCL were included in the study (samples included peripheral blood, bone marrow, lymph nodes and cerebrospinal fluid). The cytomorphology evaluation was done on samples of peripheral blood and bone marrow smears, lymph node imprints and cerebrospinal fluid cytospins using classical panoptic staining. This determined the cytomorphological subtype of MCL. The immunophenotype was then detected by flow cytometric analysis using the FACS Canto II flow cytometer (manufactured by Becton-Dickinson). Multiparameter analysis of surface membrane antigen expression included detecting positivity or negativity of CD19, CD20, CD22, CD79b, surface membrane light chains kappa and lambda, CD23, FMC7, CD5, CD10, CD25, CD35, CD38, CD11c, CD103 and CD200; the signal intensity of each CD marker expression (mean fluorescence intensity, MFI) was also measured by using a diagnostic panel of monoclonal antibodies. Results: The study included 11 men and 5 women with a median age of 70 years. Cytomorphological features included 7 cases of classic MCL and 9 cases of variant types (4 small-cell, 3 pleomorphic, 1 blastoid, 1 „marginal zone lymphoma-like” form). Surface membrane cell markers CD19, CD20, CD22 and CD79b were constantly positive with high expression (the highest being CD20). Surface membrane light chains kappa and lambda expression were observed alternately in one half the cases (with prevalent lambda light chain intensity expression). The expression of CD5 was mostly high; two cases were CD5-negative. FMC7 was positive in 10 cases with variable expression of intensity. Variable expression of CD25 was observed and CD35 was positive in three-quarters of all patients, CD38 was positive in the majority of cases (high intensity of expression). CD23, CD11c and CD103 were negative, CD43 was also mostly negative. One CD10 positive case and two CD200 positive cases were found in our study. The variability of expression intensity was common even for CD markers with the highest intensity of expression. Conclusions: Assessment of the immunocytological profile is one of the main components of MCL diagnosis. The cytomorphological and immunophenotypical variability of MCL is high. Accurate differential diagnosis of MCL, chronic lymphocytic leukaemia, marginal zone lymphoma and some cases of B-prolymphocytic leukaemia is necessary. The immunophenotypical panel used in our study is appropriate to diagnose most MCL cases.

• MeSH
• antigeny CD5 MeSH
• antigeny diferenciační B-lymfocytární * analýza   MeSH
• B-lymfocyty cytologie   MeSH
• CD antigeny analýza   MeSH
• cyklin D1 izolace a purifikace   MeSH
• cytodiagnostika MeSH
• diferenciální diagnóza MeSH
• imunofenotypizace * využití   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• lymfom z plášťových buněk * imunologie   patologie   MeSH
• mikroskopie využití   MeSH
• prognóza MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• Check Tag
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• senioři nad 80 let MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH

• MeSH
• antagonisté leukotrienů terapeutické užití   MeSH
• antiastmatika aplikace a dávkování   imunologie   klasifikace   škodlivé účinky   terapeutické užití   MeSH
• aplikace inhalační MeSH
• bronchiální astma * diagnóza   etiologie   farmakoterapie   prevence a kontrola   terapie   MeSH
• bronchiální hyperreaktivita patofyziologie   MeSH
• bronchodilatancia aplikace a dávkování   škodlivé účinky   terapeutické užití   MeSH
• hormony kůry nadledvin aplikace a dávkování   škodlivé účinky   terapeutické užití   MeSH
• imunofenotypizace využití   MeSH
• lidé MeSH
• monoklonální protilátky terapeutické užití   MeSH
• nebulizátory a vaporizátory MeSH
• nedokromil terapeutické užití   MeSH
• theofylin terapeutické užití   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• B-prolymfocytární leukemie diagnóza   terapie   MeSH
• cytogenetické vyšetření metody   využití   MeSH
• diferenciální diagnóza MeSH
• hematologické testy MeSH
• imunofenotypizace metody   využití   MeSH
• lidé MeSH
• nádory kostní dřeně diagnóza   terapie   MeSH
• příznaky a symptomy MeSH
• prognóza * MeSH
• prolymfocytární leukemie * diagnóza   epidemiologie   etiologie   MeSH
• protinádorové látky MeSH
• splenomegalie diagnóza   MeSH
• T-buněčná prolymfocytární leukemie diagnóza   terapie   MeSH
• transplantace hematopoetických kmenových buněk * metody   využití   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Vyšetření pomocí průtokové cytometrie (FC) je prováděno pouze u omezeného počtu osob s monoklonální gamapatií (MG), přestože v posledních letech bylo provedeno množství analýz prokazujících její prognostický význam. Hlavní uplatnění imunofenotypizace u MG je v rámci: 1. diferenciální diagnostiky, 2. stanovení rizika progrese u MGUS a asymptomatického MM (aMM), 3. analýzy prognostických markerů a 4. detekce minimální reziduální nemoci u pacientů s MM. Multiparametrická průtoková cytometrie by proto měla být zařazena mezi rutinní vyšetřovací metody u pacientů s monoklonálními gamapatiemi.

Flow cytometry (FC) analysis is performed only in a limited number of subjects with monoclonal gammopathy (MG), although in recent years have been published a number of analysis showing its prognostic importance. Main applications of immunophenotypisation in MGs are (1) differential diagnosis, (2) determination the risk of progression in MGUS and asymptomatic MM (aMM), (3) analysis of prognostic markers, and (4) detection of minimal residual disease in patients with MM. Multiparameter flow cytometry then should be included as a routine assay in monoclonal gammopathy patients.

• Klíčová slova
• plazmatická buňka,
• MeSH
• dospělí MeSH
• fenotyp MeSH
• financování organizované MeSH
• hodnocení rizik MeSH
• imunofenotypizace trendy   využití   MeSH
• klinické laboratorní techniky MeSH
• lidé MeSH
• mnohočetný myelom imunologie   MeSH
• monoklonální gamapatie nejasného významu imunologie   MeSH
• prognóza MeSH
• průtoková cytometrie trendy   využití   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH

Akútna myeloidná leukémia je klonálne maligně ochorenie postihujúce převážné starších pacientov. Prežitie závisí na mnohých faktoroch, predovšetkým na veku pacienta a biologickej charakteristike ochorenia danej predovšetkým cytogeaetickými a molekulárně genetickými nálezmi.

Acute myeloid leukemia is a clonal malignant disease affecting mainly elderly patients. Survival depends on many factors, mainly on the patient's age and biological characteristics of the disease given mainly by the cytogenetic and molecular genetic findings.

• MeSH
• akutní myeloidní leukemie diagnóza   klasifikace   terapie   MeSH
• analýza přežití MeSH
• chemoprofylaxe metody   MeSH
• chemorezistence MeSH
• cytarabin aplikace a dávkování   MeSH
• cytogenetické vyšetření metody   využití   MeSH
• diferenciální diagnóza MeSH
• dospělí MeSH
• hodnocení rizik MeSH
• imunofenotypizace využití   MeSH
• indukce remise metody   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladý dospělý MeSH
• oportunní infekce prevence a kontrola   MeSH
• protokoly protinádorové kombinované chemoterapie aplikace a dávkování   MeSH
• recidiva MeSH
• senioři MeSH
• transplantace hematopoetických kmenových buněk metody   využití   MeSH
• vyšetřování kostní dřeně využití   MeSH
• vztah mezi dávkou a účinkem léčiva MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladý dospělý MeSH
• senioři MeSH

V článku je podán přehled diagnostiky a terapipie vlasatobuněčné leukémie. V době, kdy byla vlasatobuněčná leukémieie před 50 lety popsána jako specifická klinická jednotka, byla linou terapeutickou možností splenektomie a medián přeŽití od diagnózy byl 4 roky. Zlepšení výsledku terapie přinesla léčba interferonem, ale použití purinových analogů zásadně změnilo prognózu pacientů s vlasatobuněčnou leukémií.

This is an overwiew of hairy cell leukemia diagnostics and therapy. When 50 years ago the description of hairy cell leukemia was published, the clinical outcome with median survival after diagnosis was 4 years. Improvement of these results came with interferon, but the introduction of the purine nucleoside analogs changed the prognosis of patients with hairy cell leukemia.

• MeSH
• analýza přežití MeSH
• histologické techniky metody   MeSH
• imunofenotypizace metody   využití   MeSH
• imunokonjugáty MeSH
• imunotoxiny terapeutické užití   MeSH
• indukce remise MeSH
• interferon gama aplikace a dávkování   MeSH
• kladribin aplikace a dávkování   MeSH
• lidé MeSH
• pentostatin aplikace a dávkování   MeSH
• protokoly protinádorové kombinované chemoterapie aplikace a dávkování   MeSH
• recidiva MeSH
• reziduální nádor diagnóza   farmakoterapie   MeSH
• rituximab MeSH
• sekundární prevence MeSH
• vidarabin analogy a deriváty   aplikace a dávkování   MeSH
• vlasatobuněčná leukemie diagnóza   patologie   terapie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Imunofenotypizace polychromatickou průtokovou cytometrií je v současné době standardem pro diagnostiku, klasifikaci a monitorování akutních leukemií. Patří k základním vyšetřovacím metodám i v diagnostice akutních obtížně klasifikovatelných leukemií. Nová revidovaná WHO klasifikace tumorů hematopoézy a lymfoidních tkání z r. 2008 rozdělila skupinu obtížně klasifikovatelných akutních leukemií na akutní nediferencovanou leukemii (AUL) a na leukemii se smíšeným fenotypem (MPAL). Cílem nově navržených kritérií je přesnější a komplexnější charakterizace onemocnění s ohledem na prognózu jednotlivých podskupin. Uvedená práce reflektuje vlastní zkušenost a současné možnosti imunologické diagnostiky u tohoto typu diagnózy.

Immunophenotyping of leukemic cells by polychromatic flow cytometry is playing an important role in the diagnosis, classification, follow-up of acute leukemias and crucial role in the management of acute leukemias of ambiguous lineage. In the revised WHO classification 2008 the former acute biphenotypic leukemia was renamed mixed phenotype acute leukemia (MPAL) and new definition criteria were established. The aim of the new classification was to simplify existing EGIL scoring system of acute biphenotypic leukemia, to assign lineage as lymphoid or myeloid if possible and to include both biphenotypic and bilineage types. The goal of this article is to approach the new aspects of immunophenotypic characterization of acute leukemias of ambiguous lineage in the context of our own experience.

• Klíčová slova
• obtížně klasifikovatelné leukemie, revidovaná WHO klasifikace 2008,
• MeSH
• akutní nemoc MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   trendy   MeSH
• imunofenotypizace trendy   využití   MeSH
• leukemie imunologie   klasifikace   MeSH
• lidé MeSH
• průtoková cytometrie MeSH
• směrnice pro lékařskou praxi jako téma MeSH
• Světová zdravotnická organizace MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Průtoková cytometrie představuje moderní vyšetřovací metodu využívanou v klinických a výzkumných laboratořích k analýze buněčných populací. V rámci studia bio logie a funkčního stavu trombocytů patří mezi její základní aplikace: 1. detekce vrozených a získaných defektů trombocytů; 2. analýza aktivace trombocytů in vivo; 3. transfuziologické aplikace; 4. studium doby obratu trombocytů. Každá ze jmenovaných aplikací má své výhody či úskalí. Cílem této práce je shrnout a osvětlit základní aplikace průtokové cytometrie a její uplatnění v analýze trombocytů.

Flow cytometry is a modern screening method used for cell analysis in many clinical and research laboratories. In the study of bio logy and functional status of platelets are its applications: 1. detection of inherited and acquired platelets defects; 2. platelets activation in vivo; 3. applications in blood transfusion; 4. platelet turnover studies. Each of these applications has its advantages and drawbacks. The aim of this paper is to summarize and explain basic applications of fl ow cytometry and its use in analysis of platelets.

• MeSH
• aktivace trombocytů MeSH
• hemostáza fyziologie   genetika   imunologie   MeSH
• imunofenotypizace metody   využití   MeSH
• klinické laboratorní techniky MeSH
• krevní nemoci diagnóza   etiologie   MeSH
• lidé MeSH
• membránové glykoproteiny izolace a purifikace   krev   MeSH
• počet trombocytů MeSH
• průtoková cytometrie metody   využití   MeSH
• transfuze trombocytů MeSH
• trombocyty cytologie   patologie   MeSH
• trombopoéza MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Maligní onemocnění komplikují jen jedno z tisíce těhotenství. Leukemie se v těhotenství vyskytuje s frekvencí 1 nemocné na 75 000-100 000 porodů. Vlasatobuněčná leukemie (HCL) tvoří jen asi 2 % všech myeloproliferativních onemocnění. Nemoc se projevuje zvětšením sleziny, popř. jater, uzlin a infekčními komplikacemi. Nemocná je unavená, mívá vyšší krvácivost, v krevním obraze nacházíme anémii v kombinaci s trombocytopenií. Diagnóza HCL se stanovuje na základě elektronové mikroskopie a imunofenotypizace lymfocytů periferní krve a kostní dřeně. Lékem volby v případě výskytu HCL v graviditě je interferon alfa. Případ: 29letá žena, sekundipara; v nynější graviditě byly ve 12. týdnu zjištěny odchylky v krevním obraze - anémie a trombocytopenie. Hematologickým vyšetřením byla prokázána vlasatobuněčná leukemie. Nasazená terapie interferonem alfa umožnila pokračování gravidity až do 39. týdne, kdy byl indukován porod. Ten proběhl bez komplikací. Koincidence vlasatobuněčné leukemie s graviditou je zcela výjimečná. Pokud je leukemie diagnostikována v graviditě, jedná se v 90 % případů o onemocnění akutní formou. Navíc je výskyt vlasatobuněčné leukemie samotné poměrně vzácný a 80 % pacientů s HCL představují muži ve věkové skupině kolem 52 let.

• MeSH
• dospělí MeSH
• imunofenotypizace metody   využití   MeSH
• interferon alfa aplikace a dávkování   terapeutické užití   MeSH
• lidé MeSH
• nádorové komplikace v těhotenství diagnóza   terapie   MeSH
• příznaky a symptomy MeSH
• vlasatobuněčná leukemie diagnóza   komplikace   terapie   MeSH
• výsledek terapie MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH