cell separation
Dotaz
Zobrazit nápovědu
Methods in hematology
228 s. : il.
- Klíčová slova
- Hematologie, Separace buněk,
- MeSH
- buňky MeSH
- hematologie MeSH
- Konspekt
- Patologie. Klinická medicína
- NLK Obory
- hematologie a transfuzní lékařství
Východiska: Cílem této práce je představit algoritmus separace plazmatických buněk ze vzorků kostní dřeně pacientů s mnohočetným myelomem. Zisk vysoce čistých buněčných populací je základní podmínkou aplikace moderních výzkumných postupů u tohoto onemocnění. Materiál a metody: Vzorky kostní dřeně byly získány od pacientů z Interní hematoonkologické kliniky FN Brno. Kostní dřeň byla nejprve zbavena červené složky (metodou hustotní gradientové centrifugace nebo lyzace), plazmatické buňky byly označeny monoklonální protilátkou proti syndecanu-1 (CD138) a separovány magneticky nebo na buněčném sorteru. Čistota separované populace byla vyhodnocena na průtokovém cytometru, případně morfologicky. Výsledky: Paralelně, magnetickou a fluorescenční separací, bylo zpracováno 28 vzorků kostní dřeně a byla vyhodnocena čistota separovaných frakcí. Na základě statistického hodnocení výsledných čistot jak v celém souboru vzorků, tak ve skupinách podle vstupního zastoupení plazmatických buněk byl navržen algoritmus separace s cut-off hodnotou 5 % plazmatických buněk v mononukleární frakci KD: vzorky s < 5 % plazmatických buněk jsou nadále tříděny na buněčném sorteru, vzorky s ? 5 % plazmatických buněk jsou separovány na magnetickém separátoru. Po ročním vyhodnocení uplatnění tohoto algoritmu na souboru 210 vzorků kostní dřeně se medián čistoty separovaných plazmatických buněk zvedl z 62,4 % (0,4–99,6 %) na 94,0 % (23,9–100 %). Závěr: Zavedení metodiky fluorescenčního třídění výrazně přispělo k celkovému zvýšení úspěšnosti separace plazmatických buněk ze vzorků kostní dřeně, a to především u vzorků s jejich nízkým vstupním zastoupením, kde dosud využívaná metodika magnetické separace není dostatečně účinná. Otevřela se tím také cesta k separaci plazmatických buněk ze vzorků kostní dřeně od jedinců s monoklonální gamapatií nejasného významu, kde je zastoupení plazmatických buněk typicky velmi nízké (desetiny, max. jednotky procent).
Backgrounds: The aim of this paper is to present an algorithm for plasma cell separation from bone marrow samples of multiple myeloma patients. The main prerequisite for applying modern research methods in this disease is gaining pure cell populations. Material and Methods: Bone marrow samples were collected from outpatients or inpatients of the Internal Haematology and Oncology Clinic of the Faculty Hospital Brno, after they had signed an Informed Consent Form. The bone marrow was first depleted of red cells (by density gradient centrifugation or erythrolysis), plasma cells were labelled by monoclonal antibody against syndecan-1 (CD138) and separated either magnetically or by cell sorter. The purity of separated population was evaluated by flow cytometry or, alternatively, morfologically. Results: We processed 28 bone marrow samples, in parallel, by magnetic or fluorescence-based separation, and we evaluated the purity of the separated fractions. Based on a statistical evaluation of resulting purities in the entire sample set as well as the individual groups divided according to the initial plasma cell content, a separation algorithm was proposed with a cut-off value of 5% of plasma cells in mononuclear fraction of bone marrow: samples with less than 5% of plasma cells are henceforth separated on cell sorter, samples with more than 5% are separated magnetically. The effectiveness of this algorithm was evaluated after the first year of its application on a dataset of 210 bone marrow samples: median purity of the separated plasma cells increased from 62.4% (0.4–99.6%) to 94.0% (23.9–100%). Conclusion: The introduction of a fluorescence-based separation markedly increased the effectiveness of plasma cell separation from bone marrow samples, mainly in samples with low plasma cell content where magnetic separation used thus far is not sufficient. This finding also opened a door for plasma cell separation of bone marrow samples from patients with monoclonal gammopathy of undetermined significance, where plasma cell count is typically below or just over one percent.
- Klíčová slova
- magnetická separace, buněčný sorter,
- MeSH
- algoritmy MeSH
- financování organizované MeSH
- imunomagnetická separace MeSH
- kostní dřeň patologie MeSH
- lidé MeSH
- mnohočetný myelom patologie MeSH
- monoklonální gamapatie nejasného významu MeSH
- plazmatické buňky patologie MeSH
- průtoková cytometrie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology ; Vol. 18
272 s.
- Klíčová slova
- Chromatografie, Elektroforéza,
- MeSH
- buňky MeSH
- chromatografie MeSH
- elektroforéza MeSH
- Konspekt
- Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
- NLK Obory
- biochemie
BACKGROUND: Protooncogene CD117 is a cytokine receptor important for hematopoietic element development. Currently, we are not able to routinely separate a sufficient quantity of bone marrow CD117+ cells for experimental purposes. AIM: The aim of this study was to establish an immunomagnetic separation method for CD117+ hematopoietic stem cell isolation and to estimate the expression of chosen BCl-2 family protein members in these elements. MATERIAL AND METHODS: 120 samples of human and murine bone marrow were acquired using the magnetic separation system. The cells were stained for CD117, BCl-2, BAX, and CD33 by an indirect fluorescent immunocytochemistry. RESULTS: The flow cytometry analysis showed only 2.6% CD117+ cells from human as well as mouse bone marrow which is insufficient for further experiments. Cytospin was not good for morphologic characterization and immunophenotyping due to the fragility and destruction of the studied cells. Therefore, cell suspension staining was selected and by this method we found CD117 positivity in 70% of the mononuclerar (CD33 positive) elements in the case of chronic myeloid leukaemia. Labelling of the BCl-2 family in this case showed antiapoptotic BCl-2 expression in 80 %, proapoptotic BAX expression in approximately 5%. CONCLUSION: Our results show that CD117 immunomagnetic separation from bone marrow material is not acceptable for experimental purposes. They demonstrate that the only practical useful for the bone marrow cell examination (morphology and immunophenotype) is cell suspension staining which uncovers the distribution of both cytoplasmic proteins and surface antigens of immature blood elements.
- MeSH
- algoritmy * MeSH
- buňky kostní dřeně * cytologie MeSH
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- plazmatické buňky * cytologie MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- separace buněk * metody MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- dopisy MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- validační studie MeSH
[1st ed.] XII, 497 s. : obr., tab., grafy ; 24 cm
- Klíčová slova
- Separace buněk,
- MeSH
- konzervace krve MeSH
- krevní plazma MeSH
- separace buněk MeSH
- separace krevních složek MeSH
- Konspekt
- Patologie. Klinická medicína
- NLK Obory
- hematologie a transfuzní lékařství
Se stále přibývajícím počtem autologních transplantací periferních progenitorových hematopoetických buněk se problematika odběru těchto štěpů stává stále aktuálnější. Protože až do určité hranice koreluje rychlost přihojení s množstvím transplantovaných progenitorů, je snahou získat štěp s dostatečným množstvím progenitorových buněk. V krvi je za normálního stavu přítomno pouze velmi malé množství progenitorových buněk, proto je nutné je před odběrem mobilizovat, což je nejkritičtějším momentem získání dostatečného štěpu. Na klinice dětské onkologie provádíme mobilizaci nejčastěji podáním G-CSF v dávce 10 μg/ kg a den, buď po chemoterapii, nebo samostatně a u pacientů, u kterých předpokládáme horší efekt mobilizace podáváme buď vyšší dávky G-CSF, nebo kombinujeme G-CSF a GM-CSF. V případě neúspěchu odběru štěpu se další postup řídí podle příčiny. Po neúspěšné mobilizaci a separaci máme následující možnosti: 1. nová mobilizace a separace po další sérii chemoterapie; nova mobilizace vyšší dávkou G-CSF nebo kombinací G-CSF a GM-CSF a následná velkoobjemová separace; 3. odebrat kostní dřeň; 4. upustit od megamiemoterapie s autologní transplantací a zvolit jiný léčebný plán.
With the ever increasing number of autologous transplantations of haematopoietic progenitor cells the problem of collection of these grafts becomes more urgent. Because up to a certain limit the rate of incorporation correlates with the amount of transplanted progenitors, attempts are made to obtain grafts with a sufficient number of progenitor cells. Under normal conditions blood contrains only a very small amount of progenitor cells. Therefore they must be mobilized before blood sampling which is the most critical moment for obtaining an adequate graft. At the Department of paediatric oncology mobilization is made most frequently by administration of G-CSF, 10 μg/kg per day, either after chemotherapy or separately. In patients where a poorer effect of mobilization is assumed, either largerdoses of G-CSF are administered or G-CSF and GM-CSF are combined. If collection of the graft fails, the subsequent procedure depends on the cause. After unsuccessful mobilization and separation there are the following possibilities: 1. new mobilization and separation after another series of chemotherapy, 2. new mobilization with a larger dose of G-CSF or a combination of G-CSF and GM-CSF and subsequent large-volume apheresis, 3. bone marrow sampling, 4. to abandon megachemotherapy with autologous transplantation and select another therapeutic plan.
