Molekulární monitorování pacientů s chronickou myeloidní leukemií je v době používání inhibitorů tyrozinkináz klíčovou součástí léčebného protokolu. Zavedení postupů pro kvantifikaci transkriptů BCR-ABL1 vyžaduje harmonizaci napříč laboratořemi u nás i v zahraničí. V České republice se podařilo vytvořit stabilní síť laboratoří, které v posledních osmi letech procházejí procesem standardizace a každoročních externích kontrol kvality. Postupné zavádění doporučení pro monitorování a hodnocení léčebné odpovědi předkládaných skupinou European LeukemiaNet vede ke zvýšení spolehlivosti analýz klíčových pro klinická rozhodování a také k jednotnosti výsledků mezi laboratořemi vyjadřovaných v mezinárodním měřítku.

Molecular monitoring of patients with chronic myeloid leukaemia has become a crucial part of therapeutic practice in the era of tyrosine kinase inhibitors. Introduction of BCR-ABL1 transcript quantification requires harmonization across laboratories worldwide. A network of BCR-ABL1 laboratories, that regularly undergo standardization and annual external quality controls, has been created in the Czech Republic since 2007. The progressive introduction of European LeukemiaNet recommendations for the management of CML and its molecular monitoring has increased in the increased reliability of BCR-ABL1 transcript level monitoring used for therapeutic decision making as well as the comparability of results from different laboratories.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny * genetika   MeSH
• chronická myeloidní leukemie * diagnóza   farmakoterapie   genetika   MeSH
• genetické techniky normy   MeSH
• inhibitory proteinkinas MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce * normy   MeSH
• laboratoře normy   MeSH
• lidé MeSH
• messenger RNA MeSH
• referenční standardy MeSH
• reprodukovatelnost výsledků MeSH
• reverzní transkripce MeSH
• řízení kvality MeSH
• tyrosinkinasy antagonisté a inhibitory   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Chronická myelocytová leukémia (CML) je klonálne myeloproliferatívne ochorenie charakterizované dôkazom tzv. filadelfského chromozómu (Ph1 chromozóm) a/alebo patologickým fúznym génom BCR‑ABL1 v kostnej dreni. Liečba chronickej myelocytovej leukémie sa koncom 20. storočia opierala o interferón α a o transplantáciu kostnej drene, no po roku 2000 sa zavedením imatinibu liečebný prístup k pacientom s CML významne zmenil. Zlepšila sa prognóza nielen mladým, ale aj starším pacientom a predĺžilo sa ich prežívanie, ktoré je v prípade optimálnej liečebnej odpovede porovnateľné k bežnej populácii bez CML. Avšak približne 1/3 pacientov liečených imatinibom nedosahuje optimálne liečebné odpovede a vyžaduje zmenu liečby na inhibítory tyrozinkinázy 2. generácie (TKI: bosutinib, dasatinib a nilotinib). Mladší pacienti bez pridružených kardiovaskulárnych či metabolických ochorení a pacienti s vyšším rizikovým skóre pri stanovení diagnózy profitujú so zahájenia liečby TKI 2. generácie už do 1. línie s cieľom rýchlejšieho dosiahnutia hlbokej molekulovej odpovede a šance na možné prerušenie liečby v budúcnosti. U starších pacientov s komorbiditami a u pacientov s nižším rizikovým skóre má naďalej svoje miesto v 1. línii aj imatinib. Pre pacientov s rezistenciou aj na druhogeneračné TKI máme k dispo‑zícii TKI 3. generácie ponatinib, ktorý je účinný aj u pacientov s mutáciou T315I. Najväčšou bariérou účinnej liečby TKI je intolerancia a toxicita a preto by mal byť výber TKI u každého pacienta individuálny. Nevyhnutnosťou dlhodobej liečby CML je adekvátna spolupráca pacienta. Na základe viacerých klinických štúdií má približne 40–60 % pacientov v štádiu hlbokej a trvácnej molekulovej odpovede šancu na bezpečné prerušenie liečby TKI, čo predstavuje ďalší prelomový úspech v manažmente pacientov s CML.

Chronic myeloid leukemia (CML) is a clonal myeloproliferative neoplasia that is characterised by Philadelphia chromosome (Ph1 chromosome) and/or fusion gene BCR‑ABL1 in bone marrow. Interpheron α and bone marrow transplantation used to be the main treatment modalities for patients with CML 20 years ago. Due to the introduction of imatinib mesylate since the year 2000 the outcome of CML patients has dramatically improved. The survival of both younger and elderly patients in the case of an optimal response has been prolonged and currently is close to survival of healthy population. Although, one third of patients does not respond well to first line imatinib and needs to change the treatment to second line tyrosine kinase inhibitors (TKI: bosutinib, dasatinib and nilotinib). Younger patients without cardiologic and metabolic disorders and those with poor risk profile score may have benefit from TKI of 2nd generation as a 1st line treatment option with the aim of reaching deeper molecular response and the chance of treatment free remission (TFR) in future. By older patients with severe comorbidities and in patients with good risk profile score imatinib as a 1st line treatment option can be used. For patients who are resistant simultaneously to 2nd generation TKI and for patients with mutation T315I ponatinib – TKI of 3rd generation can be used effectively. Intolerance and toxicity of TKI ́s are the main barriers of effective CML treatment. TKI selection for each patient should be individual. Patient ́s cooperation with medical team is crucial and inevitable in long time treatment process. The chance for TFR has become feasible for approximately 40–60 % CML patients in deep and durable molecular remission and represents a further important milestone in the management of CML patients.

• Klíčová slova
• Bosutinib, nilotinib, Ponatinib,
• MeSH
• chronická myeloidní leukemie * terapie   MeSH
• dasatinib terapeutické užití   MeSH
• inhibitory proteinkinas terapeutické užití   MeSH
• lidé MeSH
• transplantace kostní dřeně MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Fúzní gen BCR-ABL1 je charakteristickým znakem chronické myeloidní leukémie (CML) a je přítomen i u podskupiny akutních lymfoblastických leukémií (ALL). Naše předchozí studie a předběžné výsledky ukazují, že některé případy diagnostikované jako ALL mohou být ve skutečnosti CML v lymfoidní blastické krizi. V předkládaném projektu chceme objasnit pozadí BCR-ABL1-pozitivních dětských leukémií na buněčné a molekulární úrovni se zvláštím zaměřením na odlišnosti mezi případy “typické ALL” a “možné CML”. K tomu využijeme genomické (SNP array, MLPA, celoexomové sekvenování), transkriptomické (expresní profilování, celogenomové transkriptomové sekvenování) a cytometrické (“Mass Cytometry”) přístupy. Monitorování léčby různými metodami včetně kvantifikace genomické fúze mezi geny BCR a ABL1 navíc umožní stanovit úlohu sledování zbytkové nemoci u této podskupiny ALL a optimální techniku. Tyto výsledky mohou mít důležitý dopad na volbu optimálního terapeutického přístupu, monitorování a na léčebné výsledky těchto leukémií.; BCR-ABL1 fusion is a hallmark of chronic myeloid leukaemia (CML) and is present also in a subset of acute lymphoblastic leukaemia (ALL). Our previous studies and preliminary data suggest, that some cases diagnosed as ALL might be in fact CML in lymphoid blast crisis. In the proposed project we aim to disclose background of BCR-ABL1-positive childhood leukaemia at molecular and biological level, with a specific interest in differences between “typical ALL” and “possible CML” cases. For this purpose we will use genomic (SNP array, MLPA, whole exome sequencing), transcriptomic (expression profiling, RNAseq) and cytometric (Mass Cytometry) approaches. Moreover, employing monitoring of the treatment using various approaches including quantification of genomic fusion of BCR and ABL1 genes will help to establish the role of residual disease monitoring in this ALL subset and the optimal technique. The results could have an important implications for optimal treatment strategy, monitoring and for outcome of these leukaemias.

• MeSH
• akutní lymfatická leukemie diagnóza   genetika   MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny analýza   genetika   škodlivé účinky   MeSH
• chronická myeloidní leukemie diagnóza   genetika   MeSH
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• prognóza MeSH
• průtoková cytometrie metody   MeSH
• reziduální nádor MeSH
• sekvenování celého genomu metody   MeSH
• stanovení celkové genové exprese metody   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• pediatrie
• onkologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

x

x

• Klíčová slova
• anagrelid, ruxolitinib,
• MeSH
• Aspirin terapeutické užití   MeSH
• chinazoliny terapeutické užití   MeSH
• diferenciální diagnóza MeSH
• esenciální trombocytemie * diagnóza   farmakoterapie   patofyziologie   MeSH
• hydroxymočovina terapeutické užití   MeSH
• interferon alfa terapeutické užití   MeSH
• Janus kinasa 2 antagonisté a inhibitory   terapeutické užití   MeSH
• Janus kinasy MeSH
• lidé MeSH
• polycythaemia vera * diagnóza   farmakoterapie   patofyziologie   MeSH
• primární myelofibróza * diagnóza   farmakoterapie   patofyziologie   MeSH
• prognóza MeSH
• pyrazoly terapeutické užití   MeSH
• rizikové faktory MeSH
• thalidomid analogy a deriváty   terapeutické užití   MeSH
• transplantace kostní dřeně MeSH
• trombóza prevence a kontrola   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Chronická myeloidní leukémie (CML) je nádorové onemocnění charakterizované přítomností fúzního genu BCR-ABL1 a úspěšně léčena tyrozin kinázovými inhibitory (TKI). Selhání léčby může být zapříčiněno jednak faktory na straně pacienta (např. farmakokinetika), a jednak vlastnostmi nádorové buňky. Zde jsou hlavními příčinami mutace v kinázové doméně BCR-ABL1, způsobující rezistenci k TKI, nebo jiné mutace v genech mimo BCR-ABL1. Mutace v BCR-ABL1 genu i mimo BCR-ABL1 detekované v době diagnózy často mizí po zahájení TKI terapie a jejich klinický význam je proto nejasný. Příčinou může být fakt, že nevznikají v leukemických kmenových buňkách ale až ve vyzrálejších progenitorech, které jsou následkem TKI eliminované. Zatímco mutace v leukemických kmenových buňkách rezistentních na terapii mohou přetrvávat. Objasnění může přinést analýza mutací BCR-ABL1 a jiných genů v hierarchicky roztříděných populacích progenitorů a kmenových buněk v době diagnózy a na začátku terapie. Předpokládané výsledky objasní, zda mutace v kmenových buňkách mají větší předpoklad přežít TKI léčbu a vést k selhání.; Chronic myeloid leukemia (CML) is malignant disease characterised by a presence of BCR-ABL1 fusion gene and successfully treated by tyrosine kinase inhibitors (TKI). Treatment failure can be caused by factors on the side of patient, e.g. pharmacokinetics, or by the cancer cell characteristics. Here the main reason are mutations in the BCR-ABL1 kinase domain, leading to TKI resistance, or other mutations in non-BCR-ABL1 genes. They can be detected at diagnosis, but often disappear after the start of TKI therapy, therefore their clinical significance is unclear. The reason may be the fact that they originate in more mature progenitors which are then eliminated by TKIs, while mutations originating in therapy resistant stem cells persist. This hypothesis may be confirmed by the analysis of BCR-ABL1 and non-BCR-ABL1 mutations in hierarchically sorted progenitor and stem-cell enriched populations at diagnosis and early follow-up. The expected results may explain if mutations in stem cells have higher probability to survive the TKI treatment and may lead to treatment failure or relapse.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny genetika   MeSH
• chronická myeloidní leukemie genetika   MeSH
• genetické techniky MeSH
• inhibitory tyrosinkinasy MeSH
• kmenové buňky patologie   MeSH
• lidé MeSH
• mutace genetika   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• genetika, lékařská genetika
• onkologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

• MeSH
• akcelerovaná fáze myeloidní leukemie * farmakoterapie   klasifikace   patologie   MeSH
• analýza přežití MeSH
• chronická myeloidní leukemie farmakoterapie   klasifikace   patologie   MeSH
• inhibitory tyrosinkinasy * terapeutické užití   MeSH
• lidé MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• úvodníky MeSH

Předmětem řešení projektu je molekulární detekce chronické myeloidní leukémie (CML) prostřednictvím kvantifikace pacient-specifických fúzí genu BCR-ABL1 na DNA úrovni s cílem získat přesnější informaci o průběhu CML v určitých fázích léčby inhibitory tyrozinových kináz (TKI) než umožňuje standardní monitorování hladiny BCR-ABL1 transkriptu. Budeme studovat hypotézu, že hladina BCR-ABL1 pozitivních buněk v době diagnózy a časně po zahájení léčby stratifikuje pacienty, kteří na zvoleném TKI dosáhnou stabilní hluboké molekulární odpovědi, a pacienty, kteří jsou v riziku selhání stávající léčby a kteří mohou profitovat z její časné změny. Předpokládáme, že zcela klíčovou roli pak bude mít kvantifikace BCR-ABL1 na úrovni DNA u pacientů v hlubokých molekulárních odpovědích, u kterých je léčba TKI vysazována. Projekt svým řešením přispěje k personalizaci terapie díky pacient-specifické molekulární diagnostice s předpokládaným příznivým socio-ekonomickým dopadem v léčbě CML.; Project studies molecular detection of chronic myeloid leukemia (CML) by quantification of patient-specific fusions of BCR-ABL1 gene at the DNA level with the aim to obtain more precise information on the course of CML at the molecular level in particular stages of the treatment with tyrosine kinase inhibitors (TKIs) than standard monitoring of BCR-ABL1 transcript level. We will study the hypothesis that the level of BCR-ABL1-positive cells at the time of diagnosis and early after treatment initiation stratifies patients who achieve stable deep molecular response, and patients who are at risk of treatment failure and who may benefit from an early treatment switch. We suppose that quantification of BCR-ABL1 at the DNA level plays a crucial role in the TKI therapy discontinuation in patients in deep molecular response. The outputs of the project will contribute to the personalization of therapy using patient-specific molecular diagnostics having positive socio-economic impact on the CML treatment.

• MeSH
• chronická myeloidní leukemie diagnóza   MeSH
• geny abl MeSH
• inhibitory proteinkinas terapeutické užití   MeSH
• nádorové biomarkery MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• reziduální nádor MeSH
• tyrosinkinasy MeSH
• umělá fúze genů MeSH
• výsledek terapie MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• molekulární biologie, molekulární medicína
• genetika, lékařská genetika
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

BACKGROUND: Both high hyperdiploidy (HeH) and the translocation t(9;22)(q34;q11) are recurrent abnormalities in childhood B-cell acute lymphoblastic leukemia (ALL) and both are used in current classification to define different genetic and prognostic subtypes of the disease. The coexistence of these two primary genetic aberrations within the same clone is very rare in children with ALL. Here we report a new case of a 17-year-old girl with newly diagnosed ALL and uncommon cytogenetic and clinical finding combining high hyperdiploidy and a cryptic BCR/ABL1 fusion and an inherited Charcot-Marie-Tooth neuropathy detected during the induction treatment. RESULTS: High hyperdiploid karyotype 51,XX,+X,+4,+14,+17,+21 without apparent structural aberrations was detected by conventional cytogenetic analysis and multicolor FISH. A cryptic BCR/ABL1 fusion, which was caused by the insertion of part of the ABL1 gene into the 22q11 region, was proved in HeH clone by FISH, RT-PCR and CGH-SNP array. In addition, an abnormal FISH pattern previously described as the deletion of the 3'BCR region in some BCR/ABL1 positive cases was not proved in our patient. CONCLUSION: A novel case of extremely rare childhood ALL, characterized by HeH and a cryptic BCR/ABL1 fusion, is presented and to the best of our knowledge described for the first time. The insertion of ABL1 into the BCR region in malignant cells is supposed. Clearly, further studies are needed to determine the genetic consequences and prognostic implications of these unusual cases.

• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

BACKGROUND AND OBJECTIVE: The availability of different tyrosine kinase inhibitors (TKIs) with distinct anti-leukemic potency enables optimization of current therapeutic regimens; however, some patients lose their therapy response and acquire TKI resistance. In this study, we describe a single-center experience of monitoring BCR-ABL1 kinase domain (KD) mutations and discuss the impact of treatment on mutation selection. METHODS: Chronic myelogenous leukemia (CML) patients treated with TKIs at the Department of Internal Medicine-Hematology and Oncology, Masaryk University and University Hospital Brno during 2003-2011 were included in this study. A total number of 100 patients who did not achieve an optimal therapy response or who lost their therapy response were screened for the presence of BCR-ABL1 KD mutations, using direct sequencing. RESULTS: Our data show that pretreatment with non-specific non-TKI drugs prior to TKI therapy does not preferentially select for initial BCR-ABL1 KD mutations, in contrast to first-line imatinib therapy, which shows a clear predominance of T315I or P-loop mutations compared with mutations located in other KD regions. In addition, the median time to detection of P-loop mutations was substantially shorter in patients treated with first-line imatinib than in those pretreated with non-TKI drugs. Furthermore, analysis of CML patients who had recurrent resistance to TKI therapy revealed possible therapy-driven selection of BCR-ABL1 KD mutations. Finally, we confirm the previously described poor prognosis of CML patients with mutations in the BCR-ABL1 KD, since 40.0% of our CML patients who harbored a BCR-ABL1 KD mutation died from CML while receiving TKI treatment. Moreover, among the patients who are still on treatment, 27.8% have already progressed. Our data also confirm the unique position of the T315I mutation with respect to its strong resistance to currently approved TKIs. CONCLUSION: On the basis of the 'real-life' data described in this study, it is possible that the therapy itself results in its failure and selects the most resistant mutations under the selective pressure of the applied therapy regimen in some CML patients who harbor BCR-ABL1 KD mutations.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny genetika   MeSH
• chronická myeloidní leukemie farmakoterapie   genetika   MeSH
• dospělí MeSH
• inhibitory proteinkinas terapeutické užití   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mutace MeSH
• protinádorové látky terapeutické užití   MeSH
• senioři MeSH
• tyrosinkinasy genetika   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

Molecular monitoring of chronic myeloid leukemia patients using robust BCR-ABL1 tests standardized to the International Scale (IS) is key to proper disease management, especially when treatment cessation is considered. Most laboratories currently use a time-consuming sample exchange process with reference laboratories for IS calibration. A World Health Organization (WHO) BCR-ABL1 reference panel was developed (MR(1)-MR(4)), but access to the material is limited. In this study, we describe the development of the first cell-based secondary reference panel that is traceable to and faithfully replicates the WHO panel, with an additional MR(4.5) level. The secondary panel was calibrated to IS using digital PCR with ABL1, BCR and GUSB as reference genes and evaluated by 44 laboratories worldwide. Interestingly, we found that >40% of BCR-ABL1 assays showed signs of inadequate optimization such as poor linearity and suboptimal PCR efficiency. Nonetheless, when optimized sample inputs were used, >60% demonstrated satisfactory IS accuracy, precision and/or MR(4.5) sensitivity, and 58% obtained IS conversion factors from the secondary reference concordant with their current values. Correlation analysis indicated no significant alterations in %BCR-ABL1 results caused by different assay configurations. More assays achieved good precision and/or sensitivity than IS accuracy, indicating the need for better IS calibration mechanisms.

• MeSH
• bcr-abl fúzní proteiny analýza   normy   MeSH
• geny abl MeSH
• kalibrace MeSH
• lidé MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• protoonkogenní proteiny c-bcr genetika   MeSH
• referenční standardy MeSH
• Světová zdravotnická organizace MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH