Expression system
Dotaz
Zobrazit nápovědu
Advances in experimental medicine and biology ; vol. 181
259 s. : il.
sv.
- MeSH
- centrální nervový systém MeSH
- exprese genu MeSH
- Publikační typ
- periodika MeSH
- Konspekt
- Obecná genetika. Obecná cytogenetika. Evoluce
- NLK Obory
- genetika, lékařská genetika
- biologie
The observation of the immunomodulatory effects of opioid drugs opened the discussion about possible mechanisms of action and led researchers to consider the presence of opioid receptors (OR) in cells of the immune system. To date, numerous studies analyzing the expression of OR subtypes in animal and human immune cells have been performed. Some of them confirmed the expression of OR at both the mRNA and protein level, while others did not detect the receptor mRNA either. Although this topic remains controversial, further studies are constantly being published. The most recent articles suggested that the expression level of OR in human peripheral blood lymphocytes could help to evaluate the success of methadone maintenance therapy in former opioid addicts, or could serve as a biomarker for chronic pain diagnosis. However, the applicability of these findings to clinical practice needs to be verified by further investigations.
- MeSH
- biologické markery MeSH
- chronická bolest farmakoterapie etiologie metabolismus MeSH
- imunitní systém účinky léků imunologie metabolismus MeSH
- kmenové buňky účinky léků metabolismus MeSH
- lidé MeSH
- opioidní analgetika farmakologie MeSH
- receptory opiátové genetika metabolismus MeSH
- regulace genové exprese * MeSH
- zánět komplikace etiologie metabolismus MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- přehledy MeSH
Cílem práce je příprava transferových vektorů pro in vitro syntézu mikrozomálních monooxygenasP4501A1 a P4503A4, které katalyzují oxidační přeměny většiny xenobiotik v organizmu pokusnýchzvířat i člověka. cDNA kódující oba proteiny byly získány podle protokolu UBMTA laskavostídržitelů a namnoženy běžnými metodami. Pro klonování těchto cDNA byly použity bakulovirovétransferové vektory. Tyto vektory obsahují silný polyhedrinový promotor, který je obklopen sekvencemihomologními s bakulovirovou DNA, umožňující rekombinaci vektoru s virovou DNA, a tími produkci zvoleného proteinu. Pro vložení cDNA do vektorů byly použity běžné klonovací postupya metoda PCR,úspěšnost vložení cílové sekvence byla ověřena metodou PCRse specifickými primerya pomocí restrikčních endonukleáz.
The aim of this work is the construction of an expression system for in vitro synthesis of microsomalmonooxygenases P4501A1 and P4503A4, which catalyze oxidative transformations of most xenobioticsin both animal and human organisms. cDNAs encoding both proteins were obtained followingthe UBMTA protocol by the courtesy of holders, and amplified by established methods. Baculovirustransfer vectors were used to clone these cDNAs. These vectors contain a strong polyhedrinepromoter surrounded by sequences homologous to that of baculovirus DNA, allowing the recombinationof the vector with the viral DNA, and hence the production of a protein. Established methodsand PCR were used to insert cDNA into the vectors, and the insertion was verified by the PCRmethod with specific primers and using restriction endonucleases.
Rh systém patří spolu s ABO ke klinicky nejvýznamnějším systémům krevních skupin. RhD antigen je nejvíce imunogenní strukturou krvinkové membrány. Rh systém zahrnuje nejvíce antigenů ze všech systémů krevních skupin. Poslední roky prinesly mnoho nových poznatků o jeho biochemické a molekulámě-genetické podstatě. Antigeny Rh systému jsou lokalizovány na Rh proteinech, součásti Rh komplexu erytrocytové membrány. Rozeznáváme dva blízce podobné Rh proteiny - RhD a RhCcEe, kódované dvěma příbuznými geny - RHD a RHCE. Zatímco RhD pozitivita znamená přítomnost RhD proteinu a RhD negativita jeho nepřítomnost, je většina ostatních antigenů Rh systému determinována mnohem menšími rozdíly jednotlivých Rh proteinů (například alelický pár E/e se liší pouze v jedné aminokyselině). Rh proteiny tvoří v membráně tetramerické komplexy s Rh glykoproteinem. U fenotypu a klinické jednotky Rhnull je sestavení těchto tetramerů znemožněno mutacemi genu pro Rh glykoprotein nebo Rh protein a na krvince nejsou nalézány žádné Rh antigeny. Jiné mutace, působící neúplné zablokování výstavby komplexů, jsou příčinou slabě exprimovaných Rh antigenů. Pokud mutace a přestavby RH genů zapříčiní změnu v imunogenní části Rh proteinů, vznikají Rh varianty - charakterizované chybením určitých Rh epitopů a možností vytvářet anti-D protilátky proti normálním Rh antigenům. V současné době monoklonálními protilátkami rozeznáváme více než 30 RhD epitopů, na molekulární úrovni je již popsáno více než 30 alel pro D varianty a 20 alel pro slabé D antigeny.
The Rh system belongs along with the ABO system to the clinically most important systems of blood groups. The RhD antigen is the most immunogenic structure of the red blood cell membrane. The Rh system contains the largest amount of antigens of all blood group systems. Recent years provided many new findings on its biochemical and molecular genetic background. Antigens of the Rh system are on Rh proteins, which are part of the Rh complex of the erythrocyte membrane. There are two very similar Rh proteins - RhD and RhCcEe, coded by two related genes - RHD and RHCE. While RhD positivity implies the presence of RhD protein and RhD negativity its absence, the majority of the other antigens of the Rh system is determined by much smaller differences of individual Rh proteins (e.g. the allelic pair E/e differs only in one amino acid). Rh proteins form in the membrane tetrameric complexes with Rh glycoprotein. In the phenotype and clinical syndrome Rhnull the formation of these tetramers is impossible due to mutations of the gene for Rh glycoprotein or Rh protein and on the red blood cell no Rh antigens are found. Other mutations causing incomplete blocking of complex formation are thecause of poorly expressed Rh antigens. If mutations and reconstructions of RH genes cause a change in the immunogenic part of Rh proteins, Rh variants develop which are characterized by the absenceof certain epitopes and the possibility to form anti-D antibodies against normal Rh antigens. At present we differentiate by means of monoclonal antibodies more than 30 RhD epitopes, at the molecular level already more than 30 alleles for D variants were described and 20 alleles for weak D antigens.
- MeSH
- alely MeSH
- epitopy analýza genetika nedostatek MeSH
- erytrocyty genetika imunologie MeSH
- exprese genu MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- krevní skupiny - systém Rh-Hr analýza fyziologie ultrastruktura MeSH
- lidé MeSH
- monoklonální protilátky diagnostické užití MeSH
- mutace MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
