• MeSH
• imunoanalýza metody   MeSH
• Publikační typ
• laboratorní příručky MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• chemie, klinická chemie
• alergologie a imunologie

• MeSH
• financování organizované MeSH
• Publikační typ
• abstrakty MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• alergologie a imunologie

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biochemie
• histologie

K detekování a měření specifických IgE protilátek jsou používány různé laboratorní testy a neexistuje standard, který by ověřil jejich analytickou kvalitu. Záměrem bylo analyzovat přesnost a správnost výsledků stanovení specifických IgE z různých laboratoří, naměřených se stejnými vzorky sér. Jako metody bylo použito 26 neoznačených vzorků sér obsahujících specifické IgE protilátky proti 17 běžným inhalačním alergenům, bylo normálním způsobem opakovaně (3x) zasláno k analýze do šesti laboratoří, které užívají 5 různých analytických testů. Šest z předložených 26 vzorků bylo dodáno v různých ředěních, jako diluční řady. Naměřené hodnoty (n = 12 708) byly analyzovány běžnou metodou nejmenších čtverců, t statistikou, standardní chybou (SE), intervalem spolehlivosti, a R2 hodnotami. Takto získané hodnoty byly porovnány s teoretickou ideální metodou, jakožto referencí. Analýza ukázala, že jeden systém užívaný ve dvou různých laboratořích pracoval téměř tak dobře jako ideální standard (0,97; rozsah 0,91 - 1,01) při hodnocení lineární regresí, (0,05; rozsah 0,02 - 0,16) při hodnocení SE, (93 %; rozsah 0,64 - 0,99) při R2 a s variačním koeficientem (10,3 %; rozsah 6 % - 14 %). Mnohem rozsáhlejší variabilita byla pozorována u zbývajících 4 testovacích systémů. Zde byly nalezeny hodnoty (0,76; rozsah 0,11 - 1,24) při hodnocení lineární regresí, (0,19; rozsah 0,03 - 0,95) při hodnocení SE, (53 %; rozsah 0,00 - 0,98) při hodnocení R2 a s variačním koeficientem (19 %; rozsah 5 % - 49 %). U některých specifických alergenů nebyly některé laboratoře schopny zachytit diluční řady. Jeden komerční systém užívaný ve dvou laboratořích poskytoval výsledky téměř shodné s metodou ideální. Zbývající čtyři metody stanovení specifického IgE poskytovaly výsledky značně vzdálené od ideálních s mnoha příklady nesprávnosti a nízké přesnosti, speciálně pro určité alergeny jako například ze skupiny plísní a plevelů.

Different laboratory assays are used to detect and measure specific IgE antibodies. No standard exists to assess their analytic performance. We sought to analyze reported specific IgE results from different laboratories an the same serum samples for their accuracy and precision. Blinded serum samples (26) containing variable levels of specific IgE to 17 common aeroallergens were sent on 3 different occasions through normal channels to 6 laboratories that used 5 different test procedures. Laboratory-assays performance was assessed by analyzing the reported results (n=12,708) by using ordinary least squares regression with slope coefficients, the t statistic, SEs, confidence intervals, and R2 values. These were compared with a theoretic ideal assay as the reference. Analysis revealed that one system used in two different laboratories performed nearly as well as the ideal standard, with an overall average slope (0,97; range, 0,91-1,01), SE (0,05; range, 0,02-0,16), R2 value (93 %; range, 0,64-0,99), and coefficient of variation (10,3 %; range, 6 %-14 %). Extensive variability was observed in the other 4 laboratory-assay systems with respect to overall average slope (0,76; range, 0,11-1,24), SE (0,19; range, 0,03-0,95), R2 value (53 %; range, 0,00-0,98), and coefficient of variation (19 %; range, 5 %-49 %). For some specific allergens, some laboratories-assays were not able to detect serial dilutions of the same sample. One commercial system used two different laboratories performed nearly as well as the ideal standard. Four of the laboratories-assays for specific IgE antibodies demonstrated substandard overall performance with multiple instances of poor precision and accuracy, particularly for certain allergens, such as weeds and molds. (J Allergy Clin. Immunol 2000;105:1221-30.)

• MeSH
• alergeny imunologie   MeSH
• houby imunologie   MeSH
• imunoglobulin E krev   MeSH
• lidé MeSH
• referenční standardy MeSH
• rostliny imunologie   MeSH
• sérologické testy metody   normy   statistika a číselné údaje   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Edukační publikace se zabývá v první části využitím čipů v imunochemii pro mikroanalýzu. Je uveden přehled podkladových materiálů a značek, jakož i senzitivita jednotlivých technologií. Vysvětluje se možnost imobilizace a detekce proteinů pomocí planárního vlnovodu. Ukazuje se používání čipů při paralelní kompetitivní imunoanalýze, sendvičové imunoanalýze a fluorescenční imunoanalýze na mikrokuličkách. Druhá část je věnována kapilární elektroforéze a jejímu využití k separaci po kompetitivní a nekompetitivní homogenní imunoanalýze, a heterogenní imunoanalýze. Diskutují se možnosti detekce analytu jako laserem indukovaná fluorescence, enzymové značky, chemiluminiscence, ampérometrie, UV/VIS absorbance, hmotnostní spektrometrie a povrchová plazmonová rezonance.

The first part of the educational article covers chip application for microarray in immunochemistry. An outline of surface chemistries and labelings is presented, as well as the sensitivity of various technologies. Protein immobilization and detection using planar waveguide technology is clarified. Chip applications are shown in parallel competitive immunoassay, sandwich immunoassay and fluorescent microsphere immunoassay. The second part covers capillary electrophoresis and its use for separation after competitive and non-competitive homogeneous immunoassay or heterogeneous immunoassay. The following possibilities of analyte detection are discussed: laser-induced fluorescence, enzyme labels, chemiluminiscence, amperometry, UV/VIS absorbance, mass spectrometry and surface plasmon resonance.

• MeSH
• čipová analýza proteinů MeSH
• elektroforéza kapilární metody   MeSH
• fluorescenční spektrometrie metody   MeSH
• hmotnostní spektrometrie MeSH
• imunoanalýza * metody   MeSH
• luminiscence MeSH
• mikročipová analýza metody   MeSH
• povrchová plasmonová rezonance MeSH
• senzitivita a specificita MeSH

• Konspekt
• Lékařské vědy. Lékařství
• NLK Obory
• gynekologie a porodnictví
• alergologie a imunologie
• gynekologie a porodnictví

Edukační publikace se zabývá v první části luminiscenčními metodami: luminiscencí lanthanidů rozloženou v čase, luminiscencí lanthanidů zesílenou enzymem, homogenní imunoanalýzou s pohlcením luminiscence, chemiluminiscencí, elektrochemiluminiscencí (kompetitivní i sendvičové uspořádání a metoda přímé interakce) a možnostmi simultánních imunoanalýz s elektrochemiluminiscenční detekcí. Druhá část je věnována imunoanalýzám s elektrochemickou detekcí, zejména anodickou rozpouštěcí voltametrií a square-wave voltametrií. Jako značky se používají různé nanomateriály: zlato, stříbro, polovodiče (CdS, PbS, ZnS, CuS), uhlíkové nanotrubičky (plněné enzymem), apoferitin (plněný ferokyanidem nebo ionty Cd 2+ nebo Pb 2+ ), liposomy (plněné ferokyanidem), křemenné částice (s kovalentně vázaným polyguaninem, nebo plněné peroxidázou a thioninem), mikrokrystaly ferrocenu a jiné.

The first part of the educational article deals with luminescence methods as follows: lanthanide-based time-resolved luminescence, enzyme-amplified lanthanide luminescence, homogeneous immunoassays with luminescence quenching, chemiluminescence, electrochemiluminescence (competitive assay, sandwich-type assay, and direct interaction) and simultaneous immunoassays options with electrochemical luminescence detection. The second part covers immunoassays with electrochemical detection, particularly anodic stripping voltammetry and square-wave voltammetry. Many kinds of nanomaterials are used as labels, e.g. gold, silver, semiconductors (CdS, PbS, ZnS, CuS), carbon nanotubes (enzyme-loaded), apoferritin (hexacyanoferrate loaded, in some cases Cd 2+ or Pb 2+ ions are used), liposomes (hexacyanoferrate loaded), silica particles (by covalently binding polyguanine or with peroxidase & thionine loaded), ferrocene microcrystals, etc. Keywords: Lanthanide-based luminescence, chemiluminescence, electrochemiluminescence, electrochemical immunoassays, nanomaterials.

• MeSH
• elektrochemické techniky * metody   MeSH
• lanthanoidy analýza   chemie   MeSH
• luminiscence MeSH
• luminiscenční měření * metody   MeSH
• nanostruktury MeSH

• Konspekt
• Lékařské vědy. Lékařství
• NLK Obory
• farmacie a farmakologie
• farmakoterapie
• chemie, klinická chemie

Cílem studie bylo zjistit prevalenci antinukleozomálních protilátek u pacientů se SLE (systémový lupus erythematodes), jiných autoimunitních onemocnění a u zdravých kontrol a určit optimální diagnostickou soupravu umožňující rutinní diagnostiku antinukleozomálních protilátek (anti-Ncs Ab). Dalším úkolem bylo porovnat přítomnost anti-Ncs Ab s výskytem anti-ds DNA protilátek a antihistonových protilátek. Pacienti a metody. Bylo vyšetřeno 128 pacientů, a to 52 pacientů se SLE, 14 s lupusovou nefritidou, 8 s neuropsychiatrickým lupusem (NPSLE), 39 s difuzní formou sklerodermie, 15 se Sjögrenovým syndromem (SS, primárním či sekundárním) a 51 zdravých kontrol srovnatelných distribucí k věku a pohlaví. K detekci antinukleozomálních protilátek byly použity komerční soupravy ELISA od 3 výrobců, a to Orgentec, BL Diagnostika a Euroimmun. U sledovaného souboru pacientů byly dále testovány anti-ds DNA protilátky a antihistonové protilátky. Výsledky stanovení frekvence pozitivity anti-Ncs Ab u vyšetřovaného souboru byly u jednotlivých diagnostických souprav v pořadí Orgentec, BL Diagnostika a Euroimmun následující: v souboru SLE 99,3 %, 99,3 % a 72,3 %, u lupusové nefritidy 100 %, 100 % a 79 %, u neuropsychiatrického lupusu 100 %, 100 % a 62,5%, u sklerodermie 82,1 %, 82,1 % a 17,9 %, u Sjögrenova syndromu 14%, 14% a 7 % a u zdravých kontrol 8 %, 8 % a 6 %. U pacientů se SLE byla frekvence pozitivity anti-Ncs Ab, anti-dsDNA a antihistonových protilátek 72,3 %, 63 % a 54 % v porovnání s nemocnými se SCL a SS (17,9 %, 8 %, 5 % a 7 %, 7 % a 0 %). Pacienti s lupusovou nefritidou měli statisticky zvýšenou hladinu cirkulujících antinukleozomálních protilátek ve srovnání s kontrolami i ostatními vyšetřovanými skupinami. Závěr. Vzhledem k poměrně vysokému výskytu pozitivních výsledků (82,1 %, p<0,001) získanými soupravami výrobců Orgentec a BL- Diagnostika u skupiny pacientů se SCL se autoři studie rozhodli rutinně používat k detekci antinukleozomálních protilátek ELISA soupravu firmy Euroimmun (17,9 %, NS). Tyto hodnoty také odpovídaly výsledkům publikovaných zahraničních studií. Ve shodě s literárními údaji byla zaznamenána vysoká prevalence anti-Ncs Ab u pacientů se SLE (62,3-79 %) a srovnatelná prevalence anti-Ncs Ab u kontrolního souboru zdravých (6 %).

The aim of this study is to evaluate three commercial anti-nucleosome enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), to find the presence anti-nucleosomal antibodies (Ncs–Ab) and to report our experience with the detection of anti-nucleosome (anti-Nuc) antibodies (Ab) in series of SLE patients, and to compare these results with those of anti-histone and anti-dsDNA Ab. Patients and methods. We selected 128 patients (106 female, 22 male, mean age 40) including 52 patients with SLE, 14 with lupus nephritis, 8 with neuropsychiatric lupus (NPSLE) and as controls 39 with systemic sclerosis (SCL), 15 with Sjögren syndrome and 51 healthy controls (40 female, 11 male, mean age 42) and to evaluate three commercial ELISA kits (Orgentec, BL Diagnostika, Euroimmun). The sera were assayed for the levels of anti-ds DNA (ELISA, Orgentec), anti-histone (INNO LIA ANA Update, Innogenetics) also. Results. The prevalence of positive anti-nucleosome was by detection Orgentec, BL Diagnostika and Euroimmun in group of patients with SLE 99,3 %, 99,3% and 72,3%, with lupus nephritis 100 %, 100 % and 79 %, with NPSLE 100 %, 100 % and 62,3%, with SCL 82,1 %, 82,1 %, 17,9 % , with SS 14%, 14% and 7% and with healthy controls 8 %, 8 % and 6 %, respectively. The frequencies of positive anti-nucleosome, anti-dsDNA and anti-histone antibodies were in group of patients with SLE 73 %, 63 % and 54%, with SCL 17,9 %, 8 %, 5 % and with SS 7 %, 7 % and 0 %, respectively. Patients with SLE have increased levels of anti-nucleosome antibodies in their sera compared with healthy controls, SCL patients and patients with SS. Conclusion. Based on frequency of positive observations of anti-Ncs Ab in the group of patients suffering with SLE (62,3-79%) and discrepancy findings in the group with SCL patiens (82,1 %, p<0,001) by using Orgentec and BL Diagnostika we decided to introduce the kit by Euroimmun (17,9 %, NS) for rutine use. The results obstained using this kit are in good corelation with results published so far. All the three autoantibodies were present more frequently in cases with lupus and this corelation was significant in statistical means.

• Klíčová slova
• Orgentec, BL Diagnostika, Euroimmun,
• MeSH
• antinukleární protilátky krev   MeSH
• difuzní sklerodermie diagnóza   MeSH
• dospělí MeSH
• ELISA metody   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• lidé MeSH
• reagenční diagnostické soupravy statistika a číselné údaje   MeSH
• Sjögrenův syndrom diagnóza   MeSH
• systémový lupus erythematodes diagnóza   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• srovnávací studie MeSH