The advancement in molecular techniques has been attributed to the quality and significance of cancer research. Pancreatic cancer (PC) is one of the rare cancers with aggressive behavior and a high mortality rate. The asymptomatic nature of the disease until its advanced stage has resulted in late diagnosis as well as poor prognosis. The heterogeneous character of PC has complicated cancer development and progression studies. The analysis of bulk tissues of the disease was insufficient to understand the disease, hence, the introduction of the single-cell separating technique aided researchers to decipher more about the specific cell population of tumors. This review gives an overview of the Laser Capture Microdissection (LCM) technique, one of the single-cell separation methods used in PC research.

• MeSH
• duktální karcinom slinivky břišní * patologie   MeSH
• laserová záchytná mikrodisekce MeSH
• lidé MeSH
• nádory slinivky břišní * patologie   MeSH
• pankreas patologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• přehledy MeSH

• MeSH
• genetika MeSH
• laserová záchytná mikrodisekce MeSH
• lasery MeSH
• mikrodisekce MeSH
• molekulární biologie metody   MeSH
• Publikační typ
• příručky MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biologie
• genetika, lékařská genetika

Laserová záchytná mikrodisekce je poměrně mladá metoda využívaná jak v biomedicínských vědách, tak při studiu ostatních živočišných a rostlinných tkání a buněk. V kontextu nových experimentálních i diagnostických přístupů z oblasti molekulární biologie je žádoucí, aby studovaná tkáň byla homogenním a reprezentativním souborem buněk. Pro tyto účely byla proto již koncem osmdesátých let vyvíjena metoda laserové záchytné mikrodisekce (LCM), avšak první publikace o této metodě pojednává až roce 1996. V současných literárních databázích nacházíme stovky prací zaměřených na samotnou LCM či jako součást metodiky experimentů, jejichž závěry mají vést k lepšímu poznání genetické a proteomické podstaty nejrůznějších onemocnění. Toto poznání je příslibem úspěšné cílené terapie mnoha chorob v budoucnu. Klíčová slova: laserová mikrodisekce – tkáň – molekulárně-biologické aplikace

Laser capture microdissection is a relatively young method used both in biomedical sciences as in other studies of animal and vegetable tissues and cells. Current human medicine and its methods of investigation are based on both current established processes, and simultaneously there are new experimental approaches from molecular biology tested. In this context it is highly desirable that the studied tissue is homogenous and representative population of cells. For this purposes at the late 80’s the method of laser capture microdissection (LCM) has been developed, the first publication dealing with this method was released even in 1996. In current databases of literature we are able to find hundreds of papers focused on LCM such a method or as a part of methodic approach of experiments whose results led to the improved knowledge of genetic and proteomic nature of various diseases. This knowledge is of great promise for successful targeted therapy in the future. Keywords: laser capture microdissection – tissue – molecular biology applications

• Klíčová slova
• molekulárně-biologické aplikace,
• MeSH
• laserová záchytná mikrodisekce * metody   přístrojové vybavení   využití   MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

• MeSH
• diagnóza MeSH
• genetické techniky MeSH
• lasery MeSH

• Konspekt
• Obecná genetika. Obecná cytogenetika. Evoluce
• NLK Obory
• genetika, lékařská genetika
• chemie, klinická chemie

• MeSH
• buněčné struktury ultrastruktura   MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   využití   MeSH
• disekce metody   využití   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• laserová terapie metody   využití   MeSH
• nádory ultrastruktura   MeSH
• techniky in vitro MeSH

Komplex vyvíjejícího se zubu a okolních struktur zahrnuje řadu typů diferencovaných buněk. Ty se často vyskytujíve velmi malých počtech, ale mají velký biologický význam v morfogenezi (např. signální centra sklovinných uzlů). Možnost izolace homogenních vzorků z konkrétních tkáňově vázaných buněčných populací byla dlouhou dobu omezena. Nová technologie systému laserové záchytové mikrodisekce (LCM) zprostředkovává řadu přesných výzkumů na buněčné a subbuněčné úrovni. V posledním desetiletí bylo techniky LCM využito také pro některé studie zaměřené na mechanismy vývoje zubů a související poruchy. Cílem tohoto článkuje stručné shrnutí přístupu LCM, jeho aplikací ve výzkumu odontogeneze i nejaktuálnějších modifikací kombinujících LCM a průtokovou cytometrii pro analýzy jednotlivých buněk na úrovni nukleových kyselin a proteinů.

Complex of developing tooth and surrounding structures comprises several types of differentiated cells. They often occur in very small numbers but with a high biological impact on morphogenesis (e. g. signalling centres of enamel knots). However, isolation of specific homogenous samples from distinct tissue bound cell populations was long time limited. With appearance of novel technologies, the laser capture microdissection (LCM) system mediates many exact investigations at the cellular and subcellular level. In the last decade, the LCM technique has been used also for several studies focused on mechanisms of tooth development and related disorders. This paper aims to briefly review the LCM approach, its application in odontogenesis research, and the most recent modification combining LCM and flow cytometry for single cell analysis at nucleid acid and protein levels.

• MeSH
• financování organizované MeSH
• laserová skenovací cytometrie metody   MeSH
• mikrodisekce metody   přístrojové vybavení   MeSH
• odontogeneze fyziologie   MeSH
• průtoková cytometrie metody   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• zvířata MeSH

• MeSH
• laserová záchytná mikrodisekce * dějiny   metody   přístrojové vybavení   trendy   MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

• MeSH
• biopsie metody   využití   MeSH
• lidé MeSH
• mikrodisekce MeSH
• oocyty MeSH
• péče před početím metody   využití   MeSH
• polární tělísko MeSH
• zona pellucida MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

The platform for precise proteomic profiling of targeted cell populations from heterogeneous tissue sections is developed. We demonstrate a seamless and systematic integration of LCM with an automated cap-IA for the handling of a very small-sized dissected tissues section from the kidney, liver and pancreatic Langerhans islet of rats. Our analysis reveals that the lowest LCM section area ≥ 0.125 mm2 with 10 µm thickness can be optimized for the detection of proteins through LCM-cap-IA integration. We detect signals ranging from a highly-abundant protein, β-actin, to a low-abundance protein, LC-3AB, using 0.125 mm2 LCM section from rat kidney, but, so far, a relatively large section is required for good quality of results. This integration is applicable for a highly-sensitive and accurate assessment of microdissected tissue sections to decipher hidden proteomic information of pure targeted cells. To validate this integration, PCK2 protein expression is studied within Langerhans islets of normal and diabetic rats. Our results show significant overexpression of PCK2 in Langerhans islets of rats with long-term diabetes.

• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Eudiplozoon nipponicum (Goto, 1891) is a hematophagous monogenean ectoparasite which inhabits the gills of the common carp (Cyprinus carpio). Heavy infestation can lead to anemia and in conjunction with secondary bacterial infections cause poor health and eventual death of the host. This study is based on an innovative approach to protein localization which has never been used in parasitology before. Using laser capture microdissection, we dissected particular areas of the parasite body without contaminating the samples by surrounding tissue and in combination with analysis by mass spectrometry obtained tissue-specific proteomes of tegument, intestine, and parenchyma of our model organism, E. nipponicum. We successfully verified the presence of certain functional proteins (e.g. cathepsin L) in tissues where their presence was expected (intestine) and confirmed that there were no traces of these proteins in other tissues (tegument and parenchyma). Additionally, we identified a total of 2,059 proteins, including 72 peptidases and 33 peptidase inhibitors. As expected, the greatest variety was found in the intestine and the lowest variety in the parenchyma. Our results are significant on two levels. Firstly, we demonstrated that one can localize all proteins in one analysis and without using laboratory animals (antibodies for immunolocalization of single proteins). Secondly, this study offers the first complex proteomic data on not only the E. nipponicum but within the whole class of Monogenea, which was from this point of view until recently neglected.

• MeSH
• kapři parazitologie   MeSH
• kathepsiny analýza   metabolismus   MeSH
• laserová záchytná mikrodisekce MeSH
• parenchymatická tkáň metabolismus   MeSH
• ploštěnci metabolismus   MeSH
• proteasy analýza   metabolismus   MeSH
• proteom analýza   MeSH
• proteomika metody   MeSH
• střevní sliznice metabolismus   MeSH
• tandemová hmotnostní spektrometrie MeSH
• vysokoúčinná kapalinová chromatografie MeSH
• žábry parazitologie   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH