molecular hybridization
Dotaz
Zobrazit nápovědu
Folikulámí lymfomy (FL) jsou diagnostikovány na základě histologického obrazu a imunohistochemického profilu (CD20+, CD79álfa+, CD10+, BCL-2+, CD5-). U většiny nemocných s FL je prítomna translokace t(14;18)(q32;q21). Gen BCL2 (18q21) se dostává pod kontrolu regulačních oblastí genu IGH (14q32) a tím dochází ke zvýšené expresi proteinu BCL-2. Průkaz translokace lze využít pro následné monitorování nemocných (infiltrace kostní dřeně a perífemí krve nádorovými bunkami). Cílem studie bylo zavést na pracoviště metodu kvantitativní PCR (RQ-PCR, „realtime quantification") pro stanovení množství buněk nesoucích translokaci t(14;18) u nemocných s FL. Pro vyhledání translokace jsme použili metodu fluorescenční in situ hybrídizace na interfázických jádrech (I-FISH) v histologických řezech. Pomocí kvalitativní PCR jsme vybrali FL se zlomem genu BCL2 v hlavní zlomové oblasti (mbr). U nemocných s tímto znakem jsme pomocí RQ-PCR stanovovali relativní množství nádorových buněk nesoucích t(14;18). Množství buněk s touto translokaci v lymfatických uzlinách bylo podstatně vyšší než v kostní dřeni či v perífemí krvi. Metoda RQ-PCR, na rozdíl od kvalitativní PCR, umožňuje nejen konstatovat přítomnost nádorových buněk v periferní krvi a v kostní dřeni, ale jejím zásadním prínosem je určení množství nádorových buněk nesoucích t(14;18). Metoda RQ-PCR umožní sledovat aktivitu onemocnění (přechod do remise nebo vznik relapsu) a zjistit nástup dřeňového relapsu ještě před morfologicky prokazatelnou infiltrací kostní dřeně nebo perífemí krve.
Diagnosis of follicular lymphoma (FL) is based on histology and immunohistochemical profile (CD20+, CD79alfa+, CD10+, BCL-2+, CD5-). A chromosomal marker - translocation t(14;18)(q32;q21) supporting the tumor diagnosis and useful for monitoring bone marrow or peripheral blood infiltration by the tumor cells is also used. The BCL2 gene (18q21) is controlled by an enhancer of the IGH gene (14q32) resulting in BCL-2 protein overexpression. The translocation is present in the majority of patients with FL. The aim of the study was to introduce the quantitative PCR (RQ-PCR, real-time quantification) method for the assessment of the quantity of cells bearing the translocation t(14;18) in patients with FL. The fluorescence in situ hybrídization on interphasic nuclei (I-FISH) in histologic sections was used for screening of patients with the t(14;18). A search for the break of the BCL2 gene at the major breakpoint region (mbr) was performed by means of qualitative PCR. We determined the relative number of the tumor cells bearíng t(14;18) translocation (mbr) in patients with FL by the RQ-PCR. The relative quantity of these cells was significantly higher in the lymph nodes than in the bone marrow or peripheral blood. The RQ-PCR is a tool of choice to monitor the activity of the disease in individual patients, and to detect an early disease relapse before its manifestation at the level diagnosed by morphology.
Current topics in microbiology and immunology, ISSN 0070-217X 143
90 s. : il. ; 26 cm
Hybridization can occur naturally among diverging lineages as part of the evolutionary process leading to complete reproductive isolation, or it can result from range shifts and habitat alteration through global warming and/or other anthropogenic influences. Here we report a molecular cytogenetic investigation of hybridization between taxonomically distinct species of the Alcelaphini (Alcelaphus buselaphus 2n = 40 × Damaliscus lunatus 2n = 36) and the Tragelaphini (Tragelaphus strepsiceros 2n = 31/32 × Tragelaphus angasii 2n = 55/56). Cross-species fluorescence in situ hybridization provides unequivocal evidence of the scale of karyotypic difference distinguishing parental species. The findings suggest that although hybrid meiosis of the former cross would necessitate the formation of a chain of seven, a ring of four and one trivalent, the progeny follow Haldane's rule showing F1 male sterility and female fertility. The tragelaphine F1 hybrid, a male, was similarly sterile and, given the 11 trivalents and chain of five anticipated in its meiosis, not unexpectedly so. We discuss these findings within the context of the broader evolutionary significance of hybridization in African antelope, and reflect on what these hold for our views of antelope species and their conservation.
- MeSH
- antilopy klasifikace genetika MeSH
- biologická evoluce MeSH
- cytogenetické vyšetření * MeSH
- hybridizace genetická MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční MeSH
- karyotypizace MeSH
- meióza genetika MeSH
- mužská infertilita genetika MeSH
- reprodukční izolace MeSH
- vznik druhů (genetika) MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- MeSH
- chromozomální aberace MeSH
- cytogenetické vyšetření metody využití MeSH
- diagnostické techniky molekulární metody využití MeSH
- DNA sondy diagnostické užití MeSH
- filadelfský chromozom MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční metody využití MeSH
- komponenty genomu genetika MeSH
- lidé MeSH
- pruhování chromozomů MeSH
- savčí chromozomy genetika MeSH
- spektrální karyotypizace metody MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Východisko. Pouze asi 50 % žen s Turnerovým syndromem má podle literárních údajů karyotyp 45,X ve všech buňkách, ostatní mají mozaiky dvou nebo více buněčných klonů. S rozvojem nových metod se však ukazuje, že nemocných s mozaikami je pravděpodobně více, než se předpokládalo na základě klasických cytogenetických vyšetření. Cílem práce bylo sledovat početní odchylky chromozomu X v mitózách i v jádrech kultivovaných periferních lymfocytů žen s Turnerovým syndromem metodou FISH, určit rozdíly v citlivosti klasických a molekulárně cyto- genetických metod u těchto pacientek a porovnat je s kontrolní skupinou zdravých žen. Metody a výsledky. Vyšetřili jsme 18 žen s Turnerovým syndromem. Klasickou cytogenetickou analýzou jsme u 9 pacientek prokázali karyotyp 45,X ve všech hodnocených buňkách a u dalších 9 žen jsme nalezli mozaiku dvou nebo více buněčných klonů. Cytogenetické nálezy jsme porovnali s výsledky analýzy mitóz a interfázních buněk metodou FISH s a-satelitními sondami. Ve všech případech FISH potvrdila cytogenetické výsledky a kromě toho u 6 žen (30 %) prokázala existenci nových buněčných klonů, které nebyly zachyceny klasickou cytogenetikou. Závěry. Prokázali jsme vhodnost použití metody FISH při detekci mozaicismu u nemocných s Turnerovým syndromem. FISH díky vyšší senzitivitě umožňuje zachytit větší počet mozaikových linií než klasická cytogenetika.
Background. According to the literature approximately 50% of patients with Turner's syndrome have karyotype 45,X in every cell, the rest have two or more cell lines with mosaics of sex chromosomes. New methods have shown that the mosaicism is probably more frequent than expected from classical cytogenetics examinations. The aim of this study was to detect numerical changes of sex chromosomes in mitoses and interphase nuclei of cultivated peripheral lymphocytes of patients with Turner's syndrome by means of FISH, to compare the sensitivity of classical and molecular-cytogenetic methods and to estimate the values obtained in 10 control healthy females with karyotype 46,XX. Methods and Results. 18 females with Turner's syndrome were examined. Karyotype 45,X was found by classical cytogenetics in all cells of 9 females. The 9 remaining patients had sex chromosome mosaicism of two or more clones. In all patients FISH confirmed the results of classical cytogenetic methods and in 6 patients (30%) it revealed other clones previously not detected. Conclusions. Higher sensitivity of FISH enables more precise detection of mosaicism of cell lines than classical cytogenetics and this technique is more suitable for examinations of patients with Turner' syndrome.
