The main aim of the project is detection of DNA instability resulting in chromosomal aberrations of somatic cells, gametes, embryos, disturbances of preimplantation and embryonal development associated with dysfertility. Utilised methods will detect submicroscopic chromosomal aberrations, thereby assessing the degree of genotoxicity, effects of oncological therapy, nonindividualised FSH variant-based hormonal therapy in IVF, risks of gamete / embryo / gonad cryopreservation in patients with ovarian / testicular carcinomas and in children with hematological malignancies or solid tumors. Using polarization microscopy we will study secondary effects of instability on the vacuolization of the sperm head, impairment of oocyte membranes or mitotic spindle, which leads to chromosomal aneuploidies. Single-cell arrayCGH will detect deletions, duplications and aneuploidies, thereby assuring efficacious preimplantation diagnostics at the level of all chromosomes.

Předmětem projektu je zdokonalení detekce instability DNA, vedoucí k chromozomálním aberacím somatických buněk, gamet a embryí po úspěšné onkologické léčbě, jejíž důsledkem je narušení preimplantačního a embryonálního vývoje a dysfertilita. Použité metody umožní detekci submikroskopichých chromozomálních aberací a tím zjištění stupně genotoxicity onkologické léčby, rizik hormonální terapie nerespektující genotyp hormonálních receptorů a rizika kryoprezervace gamet, embryí a gonád u pacientů s karcinomem ovaria, testes, dětí a dospívajících s hematologickými malignitami či solidními nádory. Polarizační mikroskopií budou studovány sekundární účinky instability na vakuolizaci hlaviček spermií, poškození oocytárních membrán a dělícího vřeténka, které jsou asociovány s rizikem chromosomálních aneuploidií u embrya. ArrayCGH umožní zachytit submikroskopické delece, duplikace a aneuploidie, i na úrovni jedné embryonální buňky či gamety, a tak zdokonalit preimplantační diagnostiku všech chromozomů.

• MeSH
• androgenní receptory MeSH
• chromozomální aberace MeSH
• gonadální dysgeneze MeSH
• infertilita MeSH
• kryoprezervace MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce MeSH
• lékařská onkologie MeSH
• multiplexová polymerázová řetězová reakce MeSH
• polymorfismus genetický MeSH
• poškození DNA MeSH
• preimplantační diagnóza MeSH
• protaminy MeSH
• receptory FSH MeSH
• receptory LH MeSH
• srovnávací genomová hybridizace MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• molekulární biologie, molekulární medicína
• gynekologie a porodnictví
• reprodukční lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Follicle-stimulating hormone receptors (FSHRs) are almost exclusively expressed on granulosa cells, and FSH action is probably most clearly reflected in intrafollicular hormone milieu of antral follicles. Little is known about the possible effects of the common single nucleotide polymorphism (SNP) FSHR -29G > A (rs1394205) on hormonal conditions in humsan small antral follicles (hSAFs) obtained from women in the natural menstrual cycle. This study investigated the follicle fluid (FF) concentrations of anti-Müllerian hormone, estradiol, progesterone, androstenedione, and testosterone in hSAF in relation to the different genotypes of FSHR -29G > A. FF from 362 follicles was collected in 95 women undergoing fertility preservation, who did not suffer from a disease that directly affected ovarian function. The testosterone levels of the minor A/A genotype were significantly increased compared to the A/G and the G/G genotype. Furthermore, significantly reduced androstenedione levels were observed for the G/G genotype, as compared to the A/G genotype, while the other hormones did not show statistical significant differences. In conclusion, the androgen levels of hSAF were significantly elevated in the minor SNP genotype in the FSHR promoter polymorphism FSHR -29G > A.

BACKGROUND: Economic data pertaining to cystic fibrosis (CF), is limited in Europe generally, and completely lacking in Central and Eastern Europe. We performed an analysis of all direct costs associated with CF relative to key disease features and laboratory examinations. METHODS: A retrospective prevalence-based cost-of-illness (COI) study was performed in a representative cohort of 242 CF patients in the Czech Republic, which represents about 65 % of all Czech CF patients. Medical records and invoices to health insurance companies for reference year 2010 were analyzed. RESULTS: The mean total health care costs were €14,486 per patient, with the majority of the costs going towards medicinal products and devices (€10,321). Medical procedures (€2676) and inpatient care (€1829) represented a much smaller percentage of costs. A generalized linear model showed that the strongest cost drivers, for all cost categories, were associated with patient age and lung disease severity (assessed using the FEV1 spirometric parameter), when compounded by chronic Pseudomonas aeruginosa airway infections. Specifically, maximum total costs are around the age 16 years; a FEV1 increase of 1 % point represented a cost decrease of: 0.9 % (medicinal products), 1.7 % (total costs), 2.8 % (procedures) and 7.0 % (inpatient care). CONCLUSIONS: COI analysis and regression modeling using the most recent data available can provide a better understanding of the overall economic CF burden. A comparison of our results with other methodologically similar studies demonstrates that although overall costs may differ, FEV1 can nonetheless be utilized as a generally transferrable indicator of the relative economic impact of CF.

• MeSH
• cystická fibróza ekonomika   epidemiologie   patofyziologie   MeSH
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• náklady na zdravotní péči statistika a číselné údaje   MeSH
• osobní újma zaviněná nemocí * MeSH
• předškolní dítě MeSH
• prevalence MeSH
• pseudomonádové infekce ekonomika   epidemiologie   MeSH
• regresní analýza MeSH
• retrospektivní studie MeSH
• spirometrie MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika epidemiologie   MeSH

Granulosa cell (GC) expressed androgen receptors (AR) and intrafollicular androgens are central to fertility. The transactivating domain of the AR contains a polymorphic CAG repeat sequence, which is linked to the transcriptional activity of AR and may influence the GC function. This study aims to evaluate the effects of the AR CAG repeat length on the intrafollicular hormone profiles, and the gene expression profiles of GC from human small antral follicles. In total, 190 small antral follicles (3-11 mm in diameter) were collected from 58 women undergoing ovarian cryopreservation for fertility preservation. The biallelic mean of the CAG repeat lengths were calculated for each woman, and grouped in three groups: Long CAG repeats (23-26 mean CAG); medium CAG repeats (20.5-22.5 mean CAG) and short CAG repeats (17.5-20.0 mean CAG). The following parameters were measured: follicle diameter, intrafollicular levels of Anti-Müllerian Hormone (AMH), progesterone, oestradiol, testosterone and androstenedione, and GC gene expression levels of FSHR, LHR, AR, CYP19A1, and AMH. The long CAG repeat lengths were associated with significantly decreased testosterone levels, as compared to medium CAG repeats (P = 0.05) and short CAG repeats (P = 0.003). Furthermore, in follicles 3-6 mm in diameter, the long CAG repeats were associated with significantly increased LHR and CYP19A1 gene expression levels compared to short CAG repeat lengths (P = 0.004 and P = 0.04 respectively), and significantly increased LHR expression compared to medium CAG repeat lengths (P = 0.03). In conclusion, long CAG repeat lengths in the AR were associated to significant attenuated levels of androgens and an increased conversion of testosterone into oestradiol, in human small antral follicles.

• MeSH
• androgenní receptory genetika   MeSH
• aromatasa genetika   MeSH
• dospělí MeSH
• expanze trinukleotidových repetic * MeSH
• folikulární tekutina cytologie   metabolismus   MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• pohlavní hormony genetika   metabolismus   MeSH
• receptory LH genetika   MeSH
• stanovení celkové genové exprese metody   MeSH
• testosteron metabolismus   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

Kabuki syndrome (KS) is a dominantly inherited disorder mainly due to de novo pathogenic variation in KMT2D or KDM6A genes. Initially, a representative cohort of 14 Czech cases with clinical features suggestive of KS was analyzed by experienced clinical geneticists in collaboration with other specialties, and observed disease features were evaluated according to the 'MLL2-Kabuki score' defined by Makrythanasis et al. Subsequently, the aforementioned genes were Sanger sequenced and copy number variation analysis was performed by MLPA, followed by genome-wide array CGH testing. Pathogenic variants in KMT2D resulting in protein truncation in 43% (6/14; of which 3 are novel) of all cases were detected, while analysis of KDM6A was negative. MLPA analysis was negative in all instances. One female patient bears a 6.6 Mb duplication of the Xp21.2-Xp21.3 region that is probably disease causing. Subjective KS phenotyping identified predictive clinical features associated with the presence of a pathogenic variant in KMT2D. We provide additional evidence that this scoring approach fosters prioritization of patients prior to KMT2D sequencing. We conclude that KMT2D sequencing followed by array CGH is a diagnostic strategy with the highest diagnostic yield.

• MeSH
• dítě MeSH
• DNA vazebné proteiny genetika   MeSH
• fenotyp MeSH
• genom lidský MeSH
• histondemethylasy genetika   MeSH
• jaderné proteiny genetika   MeSH
• kojenec MeSH
• krevní nemoci diagnóza   genetika   patofyziologie   MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mnohočetné abnormality diagnóza   genetika   patofyziologie   MeSH
• nádorové proteiny genetika   MeSH
• obličej abnormality   patofyziologie   MeSH
• předškolní dítě MeSH
• srovnávací genomová hybridizace MeSH
• vestibulární nemoci diagnóza   genetika   patofyziologie   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• kojenec MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• předškolní dítě MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

Hlavní stanovisko práce: Na základě literárních údajů autoři upozorňují na význam hodnocení integrity DNA ve spermiích při vyšetřování příčin neplodnosti. Informace je doplněna vlastními experimentálními výsledky získanými kometovým testem a komerčním kitem Halosperm. Cíl: Abnormality v uspořádání chromatinu a/ nebo struktuře DNA spermií mohou výrazně sni- žovat fertilizační potenciál jedince i při normálním spermiogramu. Při identifikaci příčin mužské neplodnosti je proto v posledních letech kladen důraz i na hodnocení integrity DNA ve spermiích. Na našem pracovišti jsme se rozhodli k těmto účelům použít kometový test a komerčně dostupný test Halosperm s cílem porovnat obě metody při vyšetřování kontrolních jedinců a pacientů s poruchami plodnosti. Soubor pacientů a metody: U 32 kontrolních jedinců, 24 mužů s neplodností a 26 mužů s cévními poruchami mužských pohlavních orgánů (MPO) byla provedena konvenční analýza semene a následně vyšetřeny hladiny fragmentace DNA ve spermiích pomocí kometového test a Halospermu. Výsledky: Korelační analýza potvrdila dobrou shodu mezi výsledky obou metod (Pearsonův korelační keficient r=0,241; p<0,05), na rozdíl od kometového testu však výsledky Halospermu korelovaly i s motilitou (r=0,4365; p<0,001). Naproti tomu při hodnocení kometovým testem obě skupiny pacientů vykazovaly výrazně vyšší poškození DNA ve spermiích než kontroly (t-test, v obou případech p<0,001), zatímco s pomocí Halospermu se podařilo prokázat zvýšení hladin fragmentované DNA oproti kontrolám pouze u skupiny mužů s neplodností (p<0,001). Z hodnot kometového testu v kontrolním souboru byla stanovena hladina poškození 32 % Tail DNA jako horní mez tolerančního intervalu indikující snížený fertilizační potenciál. Závěr: Kometový test se osvědčil jako vhodná doplňková metoda ke standardnímu vyšetření kvality spermatu.

Major statement: Based on published data, the authors highlight the importance of assessment of sperm DNA integrity in the investigation of causes of infertility. Information is complemented by our own experimental results obtained by comet assay and commercial kit Halosperm. Aim: Abnormalities in chromatin arrangement and/or structure of the sperm DNA can significantly reduce the fertilizing potential of individuals, even in cases with normal results of conventional sperm analysis. Therefore, evaluation of sperm DNA integrity is currently emphasized in identifying the causes of male infertility. For this purpose, we decided to use comet assay and a commercially available test Halosperm with the aim to compare the two methods in the investigation of control subjects and patients with fertility disorders. Patients and Methods: Conventional semen analysis was performed in 32 control subjects, 24 men with infertility and 26 men with vascular disorders of male genital organs, and then the levels of DNA fragmentation in the sperm were examined using the comet assay and Halosperm. Results: Correlation analysis confirmed good agreement between the results of both methods (Pearson coeficient r=0.241; p< 0.05); unlike the comet assay, the results of Halosperm correlated well with sperm motility (r=0.4365; p<0.001). While comet assay showed significantly higher sperm DNA damage in both groups of patients than in the controls (t-test, both p<0.001), Halosperm demonstrated increased levels of fragmented DNA over control values only in the group of men with infertility (p<0.001). From the results of comet assay in the control group, 32% of fragmented DNA per sperm was determined as the upper limit of the tolerance interval indicating a reduced fertilizing potential. Conclusion: The comet assay has proven to be a useful complementary method to the standard examination of sperm quality

• MeSH
• chromatin patologie   MeSH
• fragmentace DNA MeSH
• kometový test MeSH
• lidé MeSH
• mužská infertilita * patofyziologie   MeSH
• spermie * abnormality   patologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Úvod, cíle: Poruchy ejakulace jsou po míšním poranění velmi časté. U nemocných s přáním vlastního potomka je většinou nutný asistovaný odběr spermií. Penilní vibrostimulace (PVS) je neinvazivní metoda k získání ejakulátu u pa­cientů s lézí nad úrovní T10. Cílem práce je zhodnocení efektivity a bezpečnosti PVS, vyhodnocení kvality a dalšího využití ejakulátu. Metodika: Od 2010 do 2014 jsme provedli PVS u 20 pa­cientů. Poranění krční (C) míchy bylo u 13 pa­cientů, hrudní (T) míchy u sedmi pa­cientů. Průměrný věk byl 30,8 let. Průměrná doba od úrazu do PVS byla 64 měsíců. První PVS mělo sedm nemocných déle než 3,5 roku a 13 do 3,5 roku od úrazu. K PVS jsme užili přístroj FERTI CARE Multicept. Výsledky: Ejakulace jsme dosáhli u 11 pa­cientů (55 %), z toho devět mělo poranění C míchy a dva T míchy. U nemocných se začátkem PVS do 3,5 roku od poranění byla úspěšnost 77 % a nad 3,5 roku 14 %, p = 0,027. Při srovnání ejakulátu z druhé PVS došlo ke zvýšení celkového počtu spermií (p = 0,03), koncentrace spermií (p = 0,025) a počtu progresivně pohyblivých spermií (p = 0,027) oproti první PVS. Získaný ejakulát je v 72 % pouze kryoprezervován k pozdějšímu využití. U dvou pa­cientů byl ejakulát použit k fertilizaci. Jeden nemocný měl azoospermii. Autonomní dysreflexie se vyskytla v průběhu PVS u sedmi pa­cientů, příznaky odezněly do 3 min. Závěr: PVS je bezpečná metoda asistovaného odběru ejakulátu. Při opakování PVS jsme zjistili zlepšení kvality ejakulátu. U dvou pa­cientů byl ejakulát úspěšně použit k fertilizaci.

Objectives: Following spinal cord injury (SCI), ejaculatory dysfunctions are frequent. In men who wish to father children, assisted sperm retrieval is often necessary. Penile vibratory stimulation (PVS) is a non-invasive method for sperm retrieval in patients with a lesion above T10. The aim of our research was to evaluate the effectiveness and safety of PVS, semen quality and further utilization of the ejaculate. Methods: Between 2010 and 2014, we performed PVS in 20 patients. An injury of the cervical (C) and thoracic (T) spinal cord was present in 13 and seven patients, respectively. The mean age of patients was 30.8 years. The mean time from the injury to PVS was 64 months. Seven patients had the first PVS more than 3.5 years after the injury and 13 patients less than 3.5 years. FERTI CARE Multicept was used for PVS. Results: Ejaculation was achieved in 11 patients (55%) – in nine with C and in two with T SCI. Success rate of PVS in patients less than 3.5 years after the injury was 77%, compared to 14% in patients more than 3.5 years after the injury, p = 0.027. Total sperm count (p = 0.03), sperm concentration (p = 0.025) and the number of sperm with progressive motility (p = 0.027) increased in the semen from the second PVS. Obtained ejaculate is mostly (72%) cryopreserved only for further use. The ejaculate was used for fertilisation in two patients. One patient had azoospermia. Autonomic dysreflexia during PVS occurred in seven patients, symptoms resolved within 3 mins. Conclusion: PVS is a safe method for sperm retrieval. Semen quality improved with repeated PVS. The ejaculate was successfully used for fertilisation in two patients. Key words: penile vibratory stimulation – spinal cord injury – anejaculation The authors declare they have no potential conflicts of interest concerning drugs, products, or services used in the study. The Editorial Board declares that the manu­script met the ICMJE “uniform requirements” for biomedical papers.

• MeSH
• asistovaná reprodukce MeSH
• dospělí MeSH
• ejakulace * MeSH
• erekce penisu MeSH
• erektilní dysfunkce etiologie   prevence a kontrola   MeSH
• fyzikální stimulace * metody   přístrojové vybavení   MeSH
• kryoprezervace MeSH
• lidé MeSH
• mladý dospělý MeSH
• obnova funkce MeSH
• poranění míchy * komplikace   MeSH
• poranění páteře komplikace   MeSH
• výsledek terapie MeSH
• zachování plodnosti metody   MeSH
• zdravotnické prostředky MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• mladý dospělý MeSH
• mužské pohlaví MeSH

We identified a de novo deletion of 14q11.2 in a Czech patient with developmental delay, mild autistic features, macrosomy, macrocephaly, orthognathic deformities, and dysmorphic facial features. The clinical follow-up of the patient lasting 14 years documented changes in the facial dysmorphism from infancy to adolescence. The deletion affects approximately 200 kb of DNA with five protein-coding genes and two snoRNA genes. Two of the protein-coding genes, SUPT16H and CHD8, have been proposed as candidate genes for a new microdeletion syndrome. Our patient further supports the existence of this syndrome and extends its phenotypic spectrum, especially points to the possibility that orthognathic deformities may be associated with microdeletions of 14q11.2. CHD8 mutations have been found in patients with neurodevelopmental disorders and macrocephaly. The HNRNPC gene, repeatedly deleted in patients with developmental delay, is another candidate as its 5́ end is adjacent to the deletion, and the expression of this gene may be affected by position effect.

• MeSH
• chromozomální delece * MeSH
• DNA vazebné proteiny genetika   MeSH
• lidé MeSH
• lidské chromozomy, pár 14 genetika   MeSH
• megalencefalie diagnóza   genetika   MeSH
• mentální retardace diagnóza   genetika   MeSH
• mladiství MeSH
• mnohočetné abnormality diagnóza   genetika   MeSH
• následné studie MeSH
• transkripční faktory genetika   MeSH
• vývojové poruchy u dětí diagnóza   genetika   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• kazuistiky MeSH
• práce podpořená grantem MeSH