β-laktamázy jsou nejčastější příčinou rezistence gramnegativních bakterií k β-laktamům. V souvislosti se zavedením cefalosporinů třetí a čtvrté generace do praxe došlo ke vzniku β-laktamáz schopných hydrolyzovat tato antibiotika. Velkou skupinu těchto enzymů tvoří tzv. širokospektré β-laktamázy (ESBL). Většina β-laktamáz ESBL je odvozena od základních β-laktamáz s rozšířeným spektrem účinku (TEM-1, TEM-2 a SHV-1). Vzhledem k tomu, že producenti ESBL musí být z definice považovány za rezistentní ke všem β-laktamům, představují producenti těchto enzymů v klinické praxi závažný problém. Článek shrnuje problematiku ESBL, včetně jejich identifikace, interpretace a doporučené léčby infekcí způsobených těmito multirezistentními bakteriemi.

β-lactamases are the commonest cause of a resistance of gram-negative bacteria to β-lactam antimicrobial agents. The introduction of the third- and fourth- generation cephalosporins into clinical practise is the reason of an evolution of new β-lactamases being able to hydrolyze these antibiotics. Extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) are the major group of these enzymes. Most of the ESBLs are mainly structural mutants of penicillinases TEM-1, TEM-2 and SHV-1. For several reasons, ESBL-producing isolates should, by definition, be reported as resistant to all penicillins, cephalosporins and monolactams. Due to seriously reduced antibiotic choice for infections caused by ESBL-producing bacteria, ESBLs pose a serious clinical problem. This review will focus on the characterization and identification of ESBLs, interpretation of sensitivity testing results of ESBL producing bacteria and an appropriate treatment of infections caused by ESBL-producers.

• MeSH
• beta-laktamasy genetika   izolace a purifikace   MeSH
• beta-laktamová rezistence MeSH
• diagnostické techniky molekulární MeSH
• Enterobacteriaceae genetika   MeSH
• gramnegativní bakterie genetika   MeSH

Cieľ práce: Cieľom štúdie bolo stanovenie prevalencie ESBL-pozitívnych izolátov Klebsielh pneumoniae u pacientov v intenzívnej starostlivosti a ich molekulárno-biologická analýza. Materiál a metódy: V období 5 mesiacov boli od pacientov hospitalizovaných na Klinike anestéziológie a resuscitácie Fakultnej nemocnice Olomouc izolované kmene Klehsiella pneumoniae. U každého izolátu bol určený antibiogram štandardnou dilučnou mikrometódou a produkcia ESBL bola stanovená modifikovaným double disk synergy testom. Na dôkaz prítomnosti génu blaTEM a blaSHV bola použitá PCR. Izoláty produkujúce SHV a TEM typy β-laktamáz boh ďalej typizované použitím metódy polymorfizmu dĺžky restrikčných fragmentov (RFLP) na identifikáciu najbežnejšie sa vyskytujúcich mutácií zodpovedných za vznik ESBL fenotypu. Posúdenie podobnosti, resp. identity izolátov, bolo uskutočnené pulznou gelovou elektroforézou (PFGE) fragmentov DNA, naštiepených pomocou reštrikčnej endonukleázy Xbal. Výsledky: Celkovo bolo získaných 67 izolátov Klebsiella pneumoniae. U 13 z nich bola stanovená produkcia ESBL a pomocou PCR dokázaná pritomnost WasHv génu. Reštrikčné štiepenie pomocou Nhel odhalilo výskyt mutácie v pozícii 238 u všetkých SHV-pozitívnych PCR produktov. Prítomnosť génu kódujúceho širokospektrú β-laktamázu TEM typu však nebola potvrdená. Molekulárno-biologická typizácia pomocou PFGE zistila prítomnosť 11 rôznych kmeňov. Záver. Prevalencia ESBL-pozitívnych kmeňov KlebsieJJa pneumoniae dosiahla u sledovanej skupiny pacientov v intenzívnej starostlivosti hodnoty 19,4 %. Analýza SHV a TEM produktov PCR metódou RFLP preukázala výskyt ESBL typu SHV. Celkovo 84,6 % kmenov malo jedinečný reštrikčný profil. Výsledky dokladujú nielen dobrú úroveň hygienicko-epidemiologických režimov na sledovanej klinike, ale aj racionálnu antibiotickú politiku.

Objectives: The study aimed at the assessment of the prevalence of ESBL-positive isolates of Klebsiella pneumoniae in intensive care patients and their molecular biology analysis. Material and methods: Over a 5-month period, Klebsiella pneumoniae strains were isolated from patients hospitalized at the Department of Anaesthesiology and Resuscitation of the University Hospital in Olomouc. For each isolate, an antibiogram was performed by the standard microdilution method and the production of ESBL was determined by the modified double-disk synergy test. PCR was used to demonstrate the presence of the blaTEM and blaSHV genes. The isolates producing SHV- and TEM-types of β-lactamases were typed using the restriction fragment length polymorphism (RFLP) method to identify the most common mutations responsible for the development of an ESBL phenotype. Similar or identical isolates were determined by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of DNA fragments cleaved by the XbaI restriction endonuclease. Results: A total of 67 isolates of KJebsieJJa pneumoniae were obtained. In 13 of them, the production of ESBL was detected and the presence of the blaSHV gene was confirmed by PCR. Restriction cleavage by Nhei revealed mutations at position 238 in all SHV-positive PCR products. The restriction analysis did not confirm the presence of the gene encoding TEM-type extended-spectrum β-lactamase. Molecular biology typing by PFGE detected the presence of 11 different strains. Conclusions: In the observed group of intensive care patients, the prevalence of ESBL-positive strains of Klebsiella pneumoniae reached 19.4 %. The analysis of SHV and TEM products of PCR by the RFLPP method showed the prevalence of SHV-type ESBL. Overail, 84.6 % of the strains had unique restriction profiles. The results suggest both high levels of hygienic and epidemiological measures at the monitored department and rational antibiotic policy.

• MeSH
• beta-laktamová rezistence genetika   MeSH
• diagnostické techniky molekulární MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• financování organizované MeSH
• Klebsiella pneumoniae genetika   izolace a purifikace   patogenita   MeSH
• lidé MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Úvod: Jedním z problémů současné medicíny je zvyšující se počet bakteriálních kmenů s nebezpečnými fenotypy rezistence, včetně Klebsiella pneumoniae s produkcí širokospektrých β -laktamáz AmpA (ESBL). Cílem studie bylo stanovení prevalence a molekulárněbiologická charakteristika ESBL-pozitivních kmenů Klebsiella. Pneumoniae v České republice. Materiál a metody. Studie probíhala na 16 pracovištích v České republice v období září až říjen 2004. Z kUnického materiálu všech hospitalizovaných pacientů byly izolovány a standardními identifikačními postupy určovány kmeny Klebsiella pneumoniae. Jejich citlivost k antibiotikům byla testována standardní diluční mikrometodou. K fenotypovému průkazu produkce ESBL byl použit Double Disk Synergy Test. Geny biaTEM, biaSHV a bJaOXA, kódující produkci ESBL, byly prokazovány pomocí PCR. Molekulárně-biologická charakteristika ESBL-pozitivních kmenů byla provedena izolací genomové DNA, naštěpením restriktázou Xbal a rozdělením pomocí PFGE. Získané restrikční mapy jednotlivých izolátů byly porovnány pomocí programu GelCompar II, poté byla stanovena jejich příbuznost. Výsledky. Ve sledovaném období bylo izolováno 913 kmenů KlebsieJIa pneumoniae, které vyvolaly klinicky prokazatelné onemocnění, přičemž u 234 (25,6 %) byla prokázána produkce ESBL. Prevalence ESBL-pozitivních kmenů činila na jednotkách intenzivní péče 38,5 %, na standardních odděleních pak 15,8 %. Účinnost na více jak 50 % ESBL-pozitivních izolátů byla prokázána pouze u meropenemu (98 %), cefoperazon/sulbactamu (61 %) a amikacinu (54 %). Naopak ESBL-negativní kmeny vykazovaly dobrou citlivost na všechna testovaná antibiotika (76-99 %). Molekulárně-biologická analýza prokázala výskyt 18 klonálních typů obsahujících 2-6 identických kmenů. 17 klonů obsahovalo izobáty vždy z jedné nemocnice, pouze v 1 klonu byly identifikovány kmeny ze dvou nemocnic. Závér. Na základě uvedených výsledků lze konstatovat, že výskyt ESBL-pozitivních kmenů Klebsiella pneumoniae je v České republice relativně vysoký, především na jednotkách intenzivní péče. Lze demonstrovat extenzivní šíření „epidemických klonů“ v rámci českých nemocnic a v omezeném rozsahu i mezi nimi.

Background: One of the problems of contemporary medicine is an increasing number of bacterial strains with hazardous phenotypes of resistance. The feared bacterial pathogens include KJebsieiia pneumoniae strains producing AmpA extended-spectrum beta-lactamases. The study focused on the molecular biological characteristics of ESBL-positive strains of Klebsiella pneumoniae collected in the Czech Republic. Materials and Methods: Clinical material from patients hospitalized in 16 Czech hospitals in September and October 2004 was used to isolate and determine KJebsieIJa pneumoniae strains by standard identification procedures. Their susceptibility to antibiotics was tested using a dilution micromethod. A Double-Disk Synergy Test was used for phenotype determination of ESBL production. The biaTEM, biaSHV and bJaOXA genes coding ESBL production were demonstrated by PCK Molecular biological characteristics of ESBL-positive strains utilized the genomic DNA isolation, Xbal restrictase digestion and PFGE differentiation. The acquired restriction maps of individual isolates were compared using GelCompar II software and their relationship was determined. Results: During the monitored period, 913 Klebsiella pneumoniae strains causing clinically detectable diseases were isolated. Of these, 234 (25.6 %) were determined as ESBL-positive strains. The prevalence of ESBL-positive strains was 38.5 % in ICUs and 15.8 % in standard wards. More than 50 % of ESBL-positive isolates were effectively treated only with meropenem (98 %), cefoperazone/sulbactam (61 %) and amikacin (54 %). Conversely, ESBL-negative strains showed high susceptibility to all tested antibiotics (76-99 %). The molecular biological analysis identified 18 clonal types containing 2-6 identical strains. 17 clones usually contained isolates from one hospital and only in one clone strains from two hospitals were identified. Conclusion: Based on the above mentioned results, the prevalence of ESBL-positive strains of Klebsiella pneumoniae in the Czech Republic can be perceived as relatively high, especially in the ICUs. An extensive spread of „epidemic clones" within Czech hospitals and, to a limited extent, between them can be demonstrated.

• MeSH
• antibakteriální látky farmakologie   terapeutické užití   MeSH
• bakteriální léková rezistence MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   MeSH
• fenotyp MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• Klebsiella pneumoniae izolace a purifikace   klasifikace   patogenita   MeSH
• lidé MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• prevalence MeSH
• techniky in vitro MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

Úvod: Jedním z problémů současné medicíny je zvyšující se počet bakteriálních kmenů s nebezpečnými fenotypy rezistence. K tomuto vývoji dochází i na novorozeneckých odděleních, kde nozokomiální infekce vyvolané multirezistentními bakteriemi představují velmi vážné ohrožení novorozených dětí. Mezi obávané bakteriální patogeny patří kmeny Klebsiella pneumoniae s produkcí širokospektrých beta-laktamáz AmpA (ESBL). Cílem studie byla molekulárně-biologická charakteristika ESBL-pozitivních kmenů K. pneumoniae, zachycených na novorozeneckém oddělení Fakultní nemocnice Olomouc (FNO). Materiál a metody: Z klinického materiálu novorozenců, hospitalizovaných na novorozeneckém oddělení FNO v období leden-červen 2004, byly izolovány a standardními identifikačními postupy určovány kmeny K pneumoniae. Jejich citlivost k antibiotikům byla testována diluční mikrometodou. K fenotypovému průkazu produkce ESBL byl použit Double Disk Synergy Test. Gen bJa, kódující produkci ESBL, byl prokazován pomocí PCR Molekulárně-biologická charakteristika ESBL-pozitivních kmenů byla provedena izolací genomové DNA, naštěpením restriktázou Xbal a rozdělením pomocí PFGE. Získané restrikční mapy jednotlivých izolátů byly porovnány pomoci programu GelCompare, poté byla stanovena jejich příbuznost. Selekční tlak antimikrobních léčiv byl hodnocen pomocí absolutního počtu definovaných denních dávek jednotlivých antibiotik. Výsledky: Ve sledovaném období bylo izolováno celkem 112 kmenů K pneumoniae, přičemž u 22 (19,6 %) byla prokázána produkce ESBL typu TEM. ESBL-pozitivní kmeny byly zachyceny pouze ve výtěrech z horních cest dýchacích a rekta novorozenců bez známek infekce. Molekulárně-biologická analýza prokázala, že 21 ESBL-pozitivních kmenů K. pneumoniae má shodný restrikční profil, jsou tedy s vysokou pravděpodobností totožné. Selekční tlak cefalosporinů IIL a TV. Generace byl ve sledovaném období velmi nízký, jejich spotřeba činila 1,9 % ze všech aplikovaných antimikrobních léčiv. Závěr. Na základě uvedených výsledků lze konstatovat, že výskyt ESBL-pozitivních kmenů K pneumoniae na novorozeneckém oddělení FNO v roce 2004 byl způsoben klonálním a horizontálním šířením z nezjištěného zdroje.

Background: One of the problems of contemporary medicine is an increasing number of bacterial strains with hazardous phenotypes of resistance. This is also true for neonatal units where nosocomial infections caused by multiresistant bacteria pose a serious threat to newborns. The feared bacterial pathogens include Klebsiella pneumoniae strains producing AmpA Extended-Spectrum Beta-Lactamases. The study focused on the molecular biology characteristics of ESBL-positive strains of K. pneumoniae collected in the Neonatal Unit of the Teaching Hospital in Olomouc (THO). Materials and Methods: Clinical material from newborns hospitalized in the THO Neonatal Unit between January and June 2004 was used to isolate and determine K. pneumoniae strains by standard identification procedures. Their susceptibility to antibiotics was tested using a dilution micromethod. A Double-Disk Synergy Test was used for phenotype determination of ESBL production. The bla gene coding ESBL production was demonstrated by PCR. Molecular biology characteristics of ESBL-positive strains utilized the genomic DNA isolation, Xbal restrictase digestion and PFGE differentiation. The acquired restriction maps of individual isolates were compared using the GelCompare software and their relationship was determined. The selection pressure of antimicrobial agents was assessed according to the absolute number of defined daily doses of individual antibiotics. Results: During the monitored period, 112 K. pneumoniae strains were isolated in total. In 22 of them (19.6%), the TEM-type ESBL production was determined. ESBL-positive strains were only observed in upper respiratory tract and rectal swabs collectcted from newboms with no signs of infection. The molecular biology analysis showed that 21 ESBL-positive strains had an identical restriction profile, i.e. they were very likely to be identical. The selection pressure of third- and fourth-generation cephalosporins was very low over the observed period and their consumption accounted for 1.9 % of all administered antimicrobial agents. Conclusion: The results presented above suggest that ESBL-positive strains of K. pneumoniae occurred in the THO Neonatal Unit due to clonal and horizontal spread from an unidentified source.

• MeSH
• beta-laktamasy genetika   MeSH
• beta-laktamová rezistence genetika   MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   MeSH
• dítě MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• geny genetika   MeSH
• Klebsiella pneumoniae genetika   izolace a purifikace   MeSH
• lidé MeSH
• mikrobiální testy citlivosti metody   MeSH
• novorozenec MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH
• lidé MeSH
• novorozenec MeSH

Úvod: K důležitým tématům současné medicíny patří bakteriální infekce, jejichž frekvence i závažnost vzhledem ke stoupajícímu poctu rezistentních bakterií v poslední době výrazně narůstá. Jeden z důležitých mechanismů rezistence představuje produkce širokospektrých beta-laktamáz typu ESBL. Cílem práce bylo stanovení frekvence výskytu ESBL-pozitivních enterobakterií ve třech velkých moravských nemocnicích. Materiál a metody: Enterobakterie byly izolovány z klinického materiálu pacientů hospitalizovaných ve Fakultní nemocnici Olomouc, Fakultní nemocnici Ostrava a Krajské nemocnici T. Bati ve Zlíně v průběhu roku 2009. K identifikaci byly použity standardní mikrobiologické postupy. Produkce širokospektrých beta-laktamáz typu ESBL byla stanovena pomocí modifikovaného Double Disk Synergy Testu. ESBL-pozitivní izoláty Escherichia coli od pacientů z JIP byly podrobeny základní genetické analýze. Výsledky a závěr. Ve sledovaném období bylo zachyceno celkem 12 922 kmenů z čeledi Enterobacteriaceae. ESBL fenotyp byl prokázán v 907 případech, což představuje 7 % z celkového počtu izolátů. Mezi ESBL-produkujícími enterobakteriemi byly nejčastěji zastoupeny druhy Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca a Escherichia coli. Porovnání standardních lůžkových oddělení a jednotek intenzivní péče odhalilo vyšší procento ESBL-pozitivních kmenů Klebsiella pneumoniae a naopak nižší zastoupení ESBL-pozitivních izolátů Escherichia coli u pacientů v intenzivní péči. V rámci vyhodnocení klinických materiálů byly kmeny produkující ESBL zachyceny nejčastěji z moče. Genetická analýza ESBL-pozitivních kmenů Escherichia coh od pacientntů z JIP prokázala u většiny izolátů produkci ESBL typu CTX-M.

Background: Bacterial infections have become an important issue in current medicine. Rececently, their frequency and severity have significantly increased as a result of the rising number of resistant bacteria. One of important mechanisms of resistance is production of broad-spectrum beta-lactamases, namely the ESBL type. The study aimed at determining the frequency of ESBL-positive Enterobacteriaceae in three large hospitals in Moravia, the eastern part of the Czech Republic. Material and Methods: Enterobacteriaceae were isolated from clinical material obtained from patients hospitalized in the University Hospital Olomouc, Teaching Hospital Ostrava and Bata Regional Hospital Zlín throughout 2009. Standard microbiology techniques were used for identification. The production of ESBLs was determined by the modified Double-Disk Synergy Test. ESBL-positive isolates of Escherichia coh from ICU patients were subjected to basic genetic analysis. Resvdts and Conclusion: During the study period, a total of 12,922 strains from the Enterobacteriaceae family were detected. The ESBL phenotype was found in 907 cases, i.e. 7 % of all isolates. The most prevalent species of ESBL-producing Enterobacteriaceae were Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca and Escherichia coli. A comparison of general wards and ICUs revealed a higher percentage of ESBL-positive strains of Klebsiella pneumoniae and a lower proportion of ESBL-positive Escherichia coh isolates in intensive care patients. When assessing the patients' clinical material, ESBL-producing strains were most frequently detected in urine. Genetic analysis of ESBL-positive Escherichia coli strains from ICU patients revealed the CTX-M type of ESBL production in most isolates.

• MeSH
• beta-laktamasy biosyntéza   MeSH
• enterobakteriální infekce enzymologie   epidemiologie   mikrobiologie   MeSH
• infekce spojené se zdravotní péčí epidemiologie   MeSH
• lidé MeSH
• prevalence MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

• MeSH
• beta-laktamasy biosyntéza   genetika   MeSH
• biomedicínský výzkum MeSH
• cefalosporiny terapeutické užití   MeSH
• Klebsiella pneumoniae genetika   klasifikace   patogenita   MeSH
• lidé MeSH
• rezistence k cefalosporinům účinky léků   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• beta-laktamasy MeSH
• beta-laktamová rezistence MeSH
• gramnegativní bakterie MeSH
• infekce spojené se zdravotní péčí diagnóza   mikrobiologie   MeSH
• lidé MeSH
• Xanthomonas MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Autori demonštrovali transferabilitu génov antibiotickej rezistencie u nozokomiálnych kmeňovKlebsiella pneumoniae, izolovaných od novorodencov v Detskej fakultnej nemocnici s poliklinikouv Bratislave, rezistentných na cefotaxím, ceftazidím a aztreonam. Determinanty rezistencie nab-laktámové antibiotiká (karbenicilín, cefaloridín, cefotaxím, ceftazidím a aztreonam) boli prenosnéna recipientné kmene Escherichia coli K-12 a Proteus mirabilis P-38. Prenos determinantov rezis-tencie z donorných kmeňov bol dokázaný analýzou spektra rezistencie u transkonjugantných klo-nov recipientných kmeňov metódou nepriamej selekcie. Pomocou dvojdiskového difúzneho testubola u týchto kmeňov zistená schopnosť produkovať ESBL (b-laktamázy s rozšíreným spektromúčinku). Synergia medzi klavulanátom a cefotaxímom, klavulanátom a ceftazidímom, alebo klavu-lanátom a aztreonamom indikovala produkciu ESBL týmito kmeňmi.

The authors demonstrated the transferability of antibiotic resistance genes in nosocomial strainsof Klebsiella pneumoniae, isolated from newborn children at the Paediatric University Hospital inBratislava. Strains were resistant to cefotaxime, ceftazidime and aztreonam. The determinants ofresistance (carbenicillin, cephaloridine, cefotaxime, ceftazidime and aztreonam) were transferredto recipient strains of Escherichia coli K-12 and Proteus mirabilis P-38. The transfer of resistancedeterminant from donor strains was demonstrated by the analysis of the resistance spectrum intransconjugant clones of recipient strains by the method of indirect selection. The ability ofproduction of extended spectrum b-lactamases (ESBL) was demonstrated by the double disc diffu-sion test. Synergy between clavulanate and cefotaxime, clavulanate and ceftazidime and/or clavu-lanate and aztreonam indicated production of ESBL by these strains.

• MeSH
• aztreonam metabolismus   MeSH
• beta-laktamasy genetika   MeSH
• beta-laktamová rezistence fyziologie   MeSH
• cefalosporiny metabolismus   MeSH
• Escherichia coli enzymologie   genetika   MeSH
• Klebsiella pneumoniae enzymologie   genetika   MeSH
• transfekce MeSH

Cíl práce: Cílem naší studie bylo stanovení výskytu qnr genů u ESBL-pozitivních izolátů Klebsiella pneumoniae získaných z klinického materiálu pacientů hospitalizovaných na jednotkách intenzivní péče několika klinik Fakultní nemocnice Olomouc. Materiál a metody: Do studie bylo zařazeno 100 ESBL-pozitivních izolátů Klebsiella pneumoniae získaných od pacientů hospitalizovaných v období od 1. 1. 2008 do 31. 1. 2011. Geny kódující jednotlivé typy beta-laktamáz blaTEM, blaSHV, blaCTX-M a geny qnr byly detekovány prostřednictvím PCR (polymerázové řetězové reakce). Identita, resp. podobnost izolátů byla analyzována porovnáním restrikčních profilů pomocí PFGE (pulzní gelové elektroforézy). Výsledky a závěr: Gen blaSHV byl detekován u 99 ze 100 izolátů Klebsiella pneumoniae, což odpovídá publikovaným údajům, které předpokládají umístění genu blaSHV-1 na chromozomu jmenovaného druhu. U 77 izolátů byl rovněž zachycen gen blaCTX-M. Přítomnost genu qnr byla odhalena u 56 izolátů, většina z tohoto počtu (76,8 %) nesla současně geny pro beta-laktamázy CTX-M a TEM. Ve všech případech se jednalo o variantu qnrB. Byly identifikovány plasmidy patřící do devíti různých inkompatibilních skupin, nejčastěji ze skupiny IncFII (52 izolátů). Byla prokázána vysoká míra rezistence nejen k beta-laktamovým antibiotikům, ale současně i k aminoglykosidům, tetracyklinu a kotrimoxazolu. PFGE odhalila 65 jedinečných kmenů a několik skupin izolátů se shodným restrikčním profilem. Přestože klinický význam qnr genů zatím není zcela jednoznačně definován, jejich výskyt u ESBL-pozitivních enterobakterií je významný.

Background: The study aimed at determining the presence of qnr genes in ESBL-positive strains of Klebsiella pneumoniae isolated from clinical material obtained from patients hospitalized in several intensive care units in the University Hospital Olomouc. Material and methods: The study comprised 100 ESBL-producing Klebsiella pneumoniae isolates from clinical samples obtained from patients hospitalized between 1 January 2008 and 31 January 2011. blaTEM, blaSHV, blaCTX-M and qnr genes were detected by polymerase chain reaction (PCR). To compare the similarity or identity of the isolates, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of DNA fragments was used. Results and Conclusion: The blaSHV gene was detected in 99 from 100 isolates of Klebsiella pneumoniae, which is in accordance with the published data that suppose the chromosomal position of the blaSHV-1 gene in this species. The blaCTX-M gene was detected in 77 isolates. The qnr genes were revealed in 56 isolates and majority (76.8 %) of these qnr-positive bacteria carried also the genes encoding the beta-lactamases CTX-M and TEM. In all cases, the qnrB variant was detected. Plasmids from nine different incompatibility groups were identified, in most cases from the IncFII group (52 isolates). Antibiotic susceptibility tests revealed high frequency of resistance not only to beta-lactams, but also to aminoglycosides, tetracycline and sulfamethoxazole/trimethoprim. PFGE detected 65 different strains and several groups of isolates with the same restriction profile. Although the clinical significance of the qnr genes is not well established, their presence in ESBL-positive Enterobacteriaceae is not negligible and it should be kept in mind.

• MeSH
• bakteriální léková rezistence genetika   MeSH
• bakteriologické techniky MeSH
• beta-laktamasy genetika   izolace a purifikace   MeSH
• beta-laktamová rezistence genetika   MeSH
• DNA bakterií genetika   MeSH
• financování organizované MeSH
• Klebsiella pneumoniae genetika   izolace a purifikace   patogenita   MeSH
• kohortové studie MeSH
• kultivační média chemie   MeSH
• lidé MeSH
• mikrobiální testy citlivosti MeSH
• mnohočetná léková rezistence genetika   MeSH
• pacienti hospitalizovaní MeSH
• plazmidy analýza   MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• pulzní gelová elektroforéza MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Cíl práce: Vyvinout metodu detekce genů podmiňujících ESBL (extended spectrum beta lactamase) fenotyp bakterií přímo z klinického materiálu pacienta. Metoda umožňuje detekci genu blaCTX-M kódujícího CTX-M beta-laktamázy a detekci variant blaSHV genu technologií real-time PCR s využitím locked nucleic acid (LNA) oligonukleotidů. Materiál a metody: V pilotní studii byly testovány tracheální aspiráty získané od pacientů s umělou plicní ventilací hospitalizovaných na oddělení KAR FN Olomouc v období 1. 3. až 30. 8. 2010. Každý vzorek byl standardně mikrobiologicky vyšetřen, u enterobakterií bylo provedeno fenotypové stanovení přítomnosti ESBL. Každý klinický materiál byl současně podroben analýze na přítomnost nukleových kyselin (DNA) kódujících CTX-M a SHV ESBL beta-laktamázy metodou real-time PCR. Výsledky: Do testování bylo zařazeno 150 vzorků tracheálního aspirátu od 71 pacientů. V souboru bylo kultivačně identifikováno 13 (8,7 %) ESBL pozitivních vzorků, zatímco metodou real-time PCR jich bylo identifikováno 27 (18 %). Z 27 PCR pozitivních vzorků bylo pozitivních na přítomnost blaCTX-M sekvence 24 vzorků, dva na přítomnost ESBL blaSHV genu a v jednom vzorku byly identifikovány oba geny. Všechny kultivačně pozitivní vzorky byly zároveň PCR pozitivní na přítomnost blaCTX-M a/nebo blaSHV sekvence. Závěr. Nová metoda výrazně zkracuje dobu detekce kmenů enterobakterií s geny pro produkci SHV a CTX-M beta-laktamáz ze 48 na hodin. Umožňuje klinické využití stanovení přítomnosti ESBL-pozitivní enterobakterie v tracheálním aspirátu u pacientů se život ohrožující nozokomiální pneumonií, kde včasné zavedení adekvátní antimikrobiální terapie hraje významnou roli.

Objectives: A new method has been developed for detecting genes determining the extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) phenotype directly from patients' clinical material. The method enables detection of the blaCTX-M gene encoding CTX-M beta-lactamases and the blaSHV gene variants with real-time PCR technology using locked nucleic acid oligonucleotides. Material and methods: In this pilot study, tracheal aspirates obtained from patients with mechanical ventilation hospitalized at Department of Anaesthesiology and Resuscitation of the University Hospital in Olomouc between 1st March and 30th December 2010 period were tested. Each sample was identified with standard microbiological procedures including phenotypic determination of ESBL-positive enterobacteria. At the same time, each sample was analyzed for the presence of nucleic acids (DNA) which encode CTX-M and SHV ESBL using real-time PCR . Results: 150 samples of tracheal aspirates from 71 patients were included into testing. In the set, 13 (8.7 %) ESBL-positive samples were identified by culture methods while 27 (18 %) positive samples were identified by the real-time PCR method. Of the 27 PCR-positive samples, 24 were positive for the blacTx gene; in 2 samples, the ESBL blasHv gene was detected, and both genes were present in 1 sampie. All culture-positive samples were also PCR-positive for the presence of blaCTX and/or blaSHV sequences. Conclusions: The new real-time PCR assay is likely to shorten the time for detection of enterobacteria producing SHV and CTX-M beta-lactamases from 48 to 6 hours. It enables ESBL-positive enterobacteria determination in tracheal aspirates of patients suffered from life-threatening nosocomial pneumonia where the early introduction of adequate antimicrobial treatment plays the important role.

• MeSH
• bakteriální infekce diagnóza   etiologie   farmakoterapie   genetika   MeSH
• beta-laktamasy * analýza   diagnostické užití   genetika   MeSH
• enterobakteriální infekce diagnóza   etiologie   genetika   komplikace   mikrobiologie   MeSH
• fenotyp MeSH
• hlen mikrobiologie   MeSH
• infekce spojené se zdravotní péčí * diagnóza   etiologie   mikrobiologie   prevence a kontrola   přenos   MeSH
• kultivační techniky * metody   statistika a číselné údaje   trendy   MeSH
• lidé MeSH
• oligoribonukleotidy analýza   diagnostické užití   genetika   MeSH
• pneumonie diagnóza   etiologie   prevence a kontrola   MeSH
• tělesné sekrety * mikrobiologie   MeSH
• ventilace umělá s výdechovým přetlakem statistika a číselné údaje   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH