• Klíčová slova
• Biologie molekulární, Proteiny,
• MeSH
• molekulární biologie MeSH
• proteiny MeSH

• MeSH
• biochemie MeSH
• proteiny MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biochemie

• Klíčová slova
• imunofluorescence,
• MeSH
• fluorescence MeSH
• fluorescenční mikroskopie MeSH
• proteiny MeSH
• Publikační typ
• příručky MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• chemie, klinická chemie
• biochemie

• Klíčová slova
• enzymologie - metody - příručky, fosforylace - bílkoviny - příručky, bílkoviny - purifikace - příručky,

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biochemie
• chemie, klinická chemie
• mikrobiologie, lékařská mikrobiologie
• alergologie a imunologie

Translokace chromozómů jsou prokázány u 50–70 % případů lidské leukémie. Gen kódující protein PML (promyelocytární leukémie) se účastní přestavby chromozómů t(15;17) u akutní promyelocytární leukémie (APL). Gen PML kóduje protein, který se koncentruje v PML-jaderných tělíscích. Histonacetyltransferázy a histondeacetylázy, proteiny modifikující chromatin, se také hromadí v těchto nukleárních tělíscích v komplexech s proteinem PML a svědčí o úloze těchto komplexů v regulaci transkripce. Prokázané interakce proteinu PML s transkripčními faktory, koaktivátory a korepresory transkripce odpovídají účasti PML v regulaci transkripce. PML hraje důležitou úlohu v apoptóze, proliferaci a stárnutí buněk. Gen pro PML je genem potlačujícím vznik nádorů (tumour suppressor gene) a produkt jeho exprese ovlivňuje v negativním smyslu buněčné množení. Všechny tyto aktivity proteinu PML jsou připisovány jeho funkcím v jádře buněk. Cytoplazmatická forma PML (cPML) je také velmi důležitá a má významnou roli v přenosu signálu transformačního růstového faktoru-β (TGF-β). Cytoplazmatický PML reaguje s dvěma receptory pro TGF-β (TβRI a TβRII) na povrchu buňky a tvoří můstek mezi proteinem SARA (Smad anchor of receptor activation) a proteiny Smad a je důležitý pro dopravu celého komplexu do raných endozómů v přenosu signálu TGF-β. Ztráta funkčního cPML vede nejen k APL, ale přispívá obecně k rezistenci buněk na TGF-β a vzniku nádorů.

Chromosome translocations are detected in 50-70 % of human leukaemia. The promyelocytic leukaemia (PML) gene is involved in the t(15;17) chromosomal translocation of acute promyelocytic leukaemia (APL). PML gene encodes a protein, which was shown to be concentrated in PML-nuclear bodies. Histone acetyltransferases and deacetylases, and chromatin-modifying proteins are accumulated in complexes with PML protein in these nuclear bodies giving the evidence of their role in transcription regulation. Physical interactions of PML protein with transcription factors, co-activators and co-repressors of transcription correspond with the role of PML in transcription regulation. PML plays an important role in apoptosis, proliferation and senescence of cells. PML gene is a tumour-suppressor gene and a product of its expression acts as a potent cell growth suppressor. All these activities of PML protein are ascribed to its nuclear functions. Cytoplasmic form of PML (cPML) is also very important and it is critical for transforming growth factor-β (TGF-β) signalling. Cytoplasmic PML interacts with two TGF-β receptors (TβRI and TβRII) and acts as a bridging factor between protein called Smad anchor of receptor activation (SARA) and Smad proteins and it plays a role in the transport of whole complex into the early endosomes in TGF-β signalling. The loss of functional cPML induces not only APL but it might influence behaviour of cancer cells and their resistance to TGF-β.

• MeSH
• akutní myeloidní leukemie genetika   patologie   MeSH
• cytoplazmatické struktury fyziologie   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• genetická transkripce MeSH
• geny MeSH
• lidé MeSH
• nádorové proteiny genetika   imunologie   MeSH
• proteiny - lokalizační signály genetika   MeSH
• transformující růstový faktor beta genetika   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

C-reaktivní protein je markerem aktivity zánětlivé odpovědi, která se podílí na rozvoji aterosklerózy a jejích klinických komplikací. Současně je C-reaktivní protein i aktivním účastníkem neboli mediátorem této zánětlivé reakce. Na samém počátku aterosklerotického procesu má ale C-reaktivní protein ochranné, antiaterosklerotické působení. Oba aspekty působení CRP, tedy prozánětlivý i protizánětlivý, spočívají v rozsahu jeho spolupráce s komplementovým systémem. Z vývojového hlediska je prvotním účinkem protizánětlivé působení CRP, které usnadňuje odstraňování cizorodých částic včetně některých patogenních mikroorganizmů a urychluje hojení ran. Působením rizikových faktorů aterosklerózy se tento ochranný účinek mění v účinek prozánětlivý a proaterogenní. Přehledný článek předkládá nové nálezy na podporu tzv. „Mohučské hypotézy“, podle níž ochranné působení CRP na počátku aterosklerotického procesu spočívá v řídícím vlivu CRP na aktivaci komplementu, kterou zahajují enzymaticky remodelované lipoproteiny o nízké hustotě. V dalším průběhu onemocnění je už působení CRP jasně proaterogenní, od progrese prvních morfologických změn tepenné stěny po rozvoj náhlých cévních příhod.

C-reactive protein can be viewed as a basic marker of activity of the inflammatory response, which modulates the development and the progression of atherosclerosis including its life-threatening complications. At the same time, C-reactive protein represents an active partaker or mediator of this same inflammatory reaction. However, at the very beginning of atherosclerotic disease, C-reactive protein exerts a clear-cut antiatherogenic activity. The two aspects of CRP’s function, i.e. both the pro-inflammatory and the anti-inflammatory one, respectively, stem from CRP’s extent of co-operation with the complement system. From the evolutional point of view, the anti-inflammatory activity of CRP is the primary one, in that it sets stage for the host to remove foreign particles and to accelerate wound healing. The influence of well-known atherogenic risk factors converts the originally beneficial influence of CRP into proinflammatory and pro-atherogenic effects. This review article presents new conclusions from the „Mainz hypothesis“. It shows that the primary protective action of CRP resides in its regulatory influence on the extent of activation of the complement system after the latter has been triggered by enzymatically remodeled low-density lipoproteins. In further course of atherosclerotic disease, C-reactive protein exhibits a full-blown proinflammatory activity. It can result in the progression of the primary morphologic lesions up to the development of sudden vascular events.

• MeSH
• aktivace komplementu fyziologie   MeSH
• arterioskleróza patofyziologie   MeSH
• C-reaktivní protein fyziologie   MeSH
• enzymy fyziologie   chemie   MeSH
• lidé MeSH
• lipoproteiny LDL fyziologie   klasifikace   krev   MeSH
• metaloproteasy fyziologie   MeSH
• oxidační stres MeSH
• přehledová literatura jako téma MeSH
• proteasy fyziologie   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• MeSH
• proteosyntéza MeSH
• Publikační typ
• monografie MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biochemie

• MeSH
• energetický metabolismus MeSH
• enterální výživa MeSH
• gastrointestinální nemoci dietoterapie   MeSH
• lidé MeSH
• nepřímá kalorimetrie MeSH
• parenterální výživa MeSH
• proteiny metabolismus   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH

Metody exprese a purifikace rekombinantních proteinů umožňují produkci a detailní charakterizaci proteinů v základním výzkumu během in vitro experimentů, ale také přípravu proteinů s terapeutickým využitím. Publikace shrnuje základní postupy od přípravy expresních vektorů až po techniku afinitní purifikace. Dále pojednává o vlastnostech různých prokaryotických a eukaryotických expresních systémů a možnostech jejich využití. Molekulární klonování, které slouží k přípravě expresních vektorů pro rekombinantní proteiny, umožňuje cíleně modifikovat vlastnosti těchto proteinů tak, aby byla usnadněna jejich purifikace a také pozměněna jejich stabilita, aktivita nebo funkce. V současné době je k dispozici široká škála metodických přístupů, jež umožňují rychlou a efektivní přípravu expresních vektorů. Zvolený produkční organizmus a způsob purifikace rekombinantního proteinu určují výběr expresního vektoru. První volbou často bývá expresní systém využívající bakterii Escherichia coli, jehož přednostmi jsou zejména technická, časová i finanční nenáročnost. Tento expresní systém není příliš vhodný pro produkci komplexních savčích proteinů, pro které jsou optimální expresní systémy založené na využití eukaryotických organizmů (kvasinky, hmyzí buňky nebo savčí buňky). Kultivace hmyzích a savčích buněk je však technicky i finančně náročná. Rekombinantní proteiny jsou purifikovány nejčastěji metodou afinitní chromatografie využívající specifickou interakci peptidu nebo proteinu s afinitní matricí. Tyto peptidy či proteiny jsou fúzovány s N‑ nebo C‑koncem purifikovaného proteinu. Purifikace probíhá ve třech krocích, kdy je rekombinantní protein prostřednictvím afinitních značek specificky zachycen na matrici chromatografické kolony, dále následuje promývací krok, po kterém je uvolněn z kolony čistý protein.

Production of recombinant proteins is essential for many applications in both basic research and also in medicine, where recombinant proteins are used as pharmaceuticals. This review sum­marizes procedures involved in recombinant protein expression and purification, including molecular cloning of target genes into expression vectors, selection of the appropriate expres­sion system, and protein purification techniques. Recombinant DNA technology allows protein engineering to modify protein stability, activity and function or to facilitate protein purification by affinity tag fusions. A wide range of cloning systems enabling fast and effective design of expression vectors is currently available. A first choice of protein expression system is usually the bacteria Escherichia coli. The main advantages of this prokaryotic expression system are low cost and simplicity; on the other hand this system is often unsuitable for production of complex mam­malian proteins. Protein expression mediated by eukaryotic cells (yeast, insect and mammalian cells) usually produces properly folded and posttranslationally modified proteins. How­ever, cultivation of insect and, especially, mammalian cells is time consuming and expensive. Affinity tagged recombinant proteins are purified efficiently using affinity chromatography. An affinity tag is a protein or peptide that mediates specific binding to a chromatography column, unbound proteins are removed during a washing step and pure protein is subsequently eluted. Key words: recombinant protein – molecular cloning – purification – expression system This work was supported by the European Regional Development Fund and the State Budget of the Czech Republic (RECAMO, CZ.1.05/2.1.00/03.0101) and by MH CZ – DRO (MMCI, 00209805). The authors declare they have no potential conflicts of interest concerning drugs, products, or services used in the study. The Editorial Board declares that the manuscript met the ICMJE “uniform requirements” for bio­medical papers. Submitted: 22. 1. 2014 Accepted: 20. 3. 2014

• Klíčová slova
• purifikace, expresní systém, expresní vektor,
• MeSH
• chromatografie afinitní MeSH
• Escherichia coli genetika   MeSH
• eukaryotické buňky MeSH
• exprese genu * MeSH
• genetická transkripce MeSH
• genetické vektory * MeSH
• klonování DNA * MeSH
• kultivační média MeSH
• kvasinky genetika   MeSH
• prokaryotické buňky MeSH
• proteinové inženýrství MeSH
• rekombinantní proteiny * genetika   chemická syntéza   MeSH
• virové proteiny genetika   MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Since it has been demonstrated that soy diet can improve endothelial function, in the present study we evaluated the effect of dietary substitution of 25 g of animal proteins with soy proteins on endothelial dysfunction in renal transplant patients. METHODS: In 20 renal transplant patients (55 +/- 11 years, serum creatinine 1.7 +/- 0.6 mg/dl), brachial artery flow mediated dilation (FMD) and endothelium-independent vasodilation (sublingual nitroglycerine, 25 microg) were measured at baseline, after 5 weeks of a soy diet and finally after 5 weeks of soy wash-out. Changes in plasma lipids, markers of oxidative stress (lipid peroxides, LOOH) and inflammation (C-reactive protein), isoflavones (genistein and daidzein), asymmetric dimethyl arginine (ADMA) and L-arginine were also evaluated. RESULTS: At baseline, patients showed a significantly lower FMD as compared with age-matched healthy subjects (3.2 +/- 1.8 vs 6.3 +/- 1.9, respectively; P < 0.001), while response to nitroglycerine was similar. After soy diet, actual protein intake was not changed, cholesterol and lipid peroxides were significantly reduced, and isoflavones were detectable in plasma. Soy diet was associated with a significant improvement in FMD (4.4 +/- 2.0; P = 0.003 vs baseline), while response to nitroglycerine was unchanged. Improvement in FMD was related to L-arginine/ADMA ratio changes, but no significant relation was found to changes in cholesterol, lipid peroxides or genistein and daidzein plasma concentrations. After 5 weeks of soy diet discontinuation, FMD (3.3 +/- 1.7%) returned to baseline values and isoflavones were no longer detectable in plasma. CONCLUSIONS: A soy protein diet for 5 weeks improves endothelial function in renal transplant patients. This effect seems to be strictly dependent on soy intake as it disappears after soy withdrawal and is mediated by an increase in the L-arginine/ADMA ratio, independently of change in lipid profile, oxidative stress or isoflavones.

• MeSH
• C-reaktivní protein metabolismus   MeSH
• cévní endotel embryologie   metabolismus   MeSH
• dieta MeSH
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• nemoci cév dietoterapie   MeSH
• nemoci ledvin metabolismus   MeSH
• oxidační stres MeSH
• peroxidace lipidů MeSH
• proteiny ze sójových bobů metabolismus   MeSH
• senioři MeSH
• transplantace ledvin metody   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• senioři MeSH
• ženské pohlaví MeSH