Microarray
Dotaz
Zobrazit nápovědu
- MeSH
- biomedicínský výzkum MeSH
- databáze genetické MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- financování organizované MeSH
- klinické lékařství MeSH
- lidé MeSH
- sekvenční analýza hybridizací s uspořádaným souborem oligonukleotidů MeSH
- software MeSH
- stanovení celkové genové exprese MeSH
- systémová integrace MeSH
- systémy řízení databází MeSH
- ukládání a vyhledávání informací MeSH
- výpočetní biologie MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
Klinická onkologie, ISSN 0862-495X Ročník 19, supplement 2006, prosinec 2006
330-422 stran : ilustrace, tabulky ; 30 cm
- MeSH
- cílená molekulární terapie MeSH
- diagnostické techniky molekulární MeSH
- individualizovaná medicína MeSH
- lékařská onkologie MeSH
- mikročipová analýza MeSH
- výzkum MeSH
- Publikační typ
- sborníky MeSH
- Konspekt
- Patologie. Klinická medicína
- NLK Obory
- onkologie
Účel přehledu: Metodika velkokapacitních mikropolí (microarray), která obsahují různé alergenové složky fixované na pevné podložce, umožňuje stanovení specifických IgE proti těmto alergenům a přesnější diagnostiku potravinové alergie. V tomto přehledovém článku rozebíráme výsledky, jichž bylo dosud technikou mikropolí dosaženo v diagnostice potravinové alergie. Nové poznatky: Technologie mikropolí obsahujících proteiny nebo glykoproteiny nám umožňuje zjistit profil senzibilizace pacientů s potravinovou alergií. V současné době jsou komerčně dostupné metody, jež nám umožňují stanovit specifické IgE proti 103 alergenním molekulám. V celosvětovém měřítku byla v některých laboratořích tato technika zkoumána a optimalizována pro několik alergenových extraktů a výsledky byly slibné – metodika měla vysokou specificitu a senzitivitu, výsledky navíc dobře korelovaly s již existujícími konvenčními testy. Souhrn: V posledních letech se díky pokroku v molekulární biologii a ve vývoji nových technologií pro výrobu velkokapacitních matric s pevnou fází, jakou je například technologie mikropolí, zlepšila diagnostika potravinové alergie. V současnosti je možné analyzovat přecitlivělost na různé zdroje alergenů zprostředkovanou specifickými IgE stanovením specifických IgE proti alergenním proteinům či glykoproteinům. Tato změna nevedla jen ke zpřesnění diagnostiky senzibilizace, ale umožnila nám také vysvětlit různá rizika senzibilizace na určité molekuly, v mnoha případech fenomén zkřížené reaktivity, a dokonce může korigovat námi poskytovaná klinická doporučení. Pro přesnější vyhodnocení možností této nové techniky však bude třeba uskutečnit další studie.
The determination of specific IgE (sIgE) against allergenic components fixed in a solid support that is provided as a microarray of high capacity and allows a more precise evaluation in the food allergy diagnosis. In this review, we will analyze the results obtained to date with this technology applied to the component-based diagnosis of food allergy. RECENT FINDINGS: Microarrays of proteins or glycoproteins allow us to know the profile of sensitization of a patient with food allergy. At present, a commercially available technique exists which allows sIgE to be detected against 103 allergenic molecules. Several laboratories worldwide have explored and optimized this technique for few allergen extracts and the results have been promising with high reliabilities and sensitivities and above all, good correlations with previous existing conventional assays. SUMMARY: In recent years, as a result of advances in molecular biology, together with the development of new technologies of producing high-capacity solid-phase matrices such as microarrays, the diagnosis of food allergy has improved and the basic situation of analyzing sIgE against an allergenic source has now become real the possibility of analyzing sIgE against an allergenic protein or glycoprotein. This change has not only led to a more precise diagnosis of sensitization, but can also be used to explain the different hazards of certain molecular sensitizations, crossreactivity phenomena in many cases and can even change the clinical management according to the information provided. Further studies are clearly needed to evaluate more precisely the scope of this new technique.
- MeSH
- alergeny imunologie MeSH
- financování organizované MeSH
- imunizace MeSH
- imunoglobulin E krev MeSH
- imunosorpční techniky MeSH
- lidé MeSH
- mikročipová analýza MeSH
- potravinová alergie diagnóza imunologie MeSH
- reprodukovatelnost výsledků MeSH
- senzitivita a specificita MeSH
- zkřížené reakce MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
Metallothioneins (MTs), low molecular mass cysteine-rich proteins, which are able to bind up to 20 monovalent and up to 7 divalent heavy metal ions are widely studied due to their functions in detoxification of metals, scavenging free radicals and cells protection against the oxidative stress. It was found that the loss of the protective effects of MT leads to an escalation of pathogenic processes and carcinogenesis. The most extensive area is MTs expression for oncological applications, where the information about gene patterns is helpful for the identification biological function, resistance to drugs and creating the correct chemotherapy. In other medical applications the effect of oxidative stress to cell lines exposed to heavy metals and hydrogen peroxide is studied as well as influence of drugs and cytokines on MTs expression and MTs expression in the adipose tissue. The precise detection of low metallothionein concentrations and its isoforms is necessary to understand the connection between quantity and isoforms of MTs to size, localization and type of cancer. This information is necessary for well-timed therapy and increase the chance to survival. Microarray chips appear as good possibility for finding all information about expression of MTs genes and isoforms not only in cancer, but also in other diseases, especially diabetes, obesity, cardiovascular diseases, ageing, osteoporosis, psychiatric disorders and as the effects of toxic drugs and pollutants, which is discussed in this review.
The left and right ventricle originate from distinct parts of the cardiac tube, and several genes are known to be differentially expressed in these compartments. The aims of this study were to determine developmental differences in gene expression between the left and right ventricle, and to assess the effect of altered hemodynamic loading. RNA was extracted from isolated left and right normal chick embryonic ventricles at embryonic day 6, 8, and 10, and from day 8 left atrial ligated hearts with hypoplastic left and dilated right ventricles. cRNA was hybridized to Affymetrix Chicken Genome array according to manufacturer protocols. Microarray analysis identified 302 transcripts that were differentially expressed between the left and right ventricle. Comparative analysis detected 91 genes that were different in left ventricles of ligated hearts compared to age-matched ventricles, while 66 were different in the right ones. A large number of the changes could be interpreted as a delay of normal maturation. The approach described in this study could be used as one of the measures to gauge success of surgical procedures for congenital heart disease and help in determining the optimal time frame for intervention to prevent onset of irreversible changes.
- MeSH
- hemodynamika MeSH
- kuřecí embryo MeSH
- mikročipová analýza MeSH
- myokard metabolismus MeSH
- srdeční komory embryologie metabolismus MeSH
- srdeční síně embryologie metabolismus MeSH
- transkriptom MeSH
- zvířata MeSH
- Check Tag
- kuřecí embryo MeSH
- zvířata MeSH
- Publikační typ
- časopisecké články MeSH
- práce podpořená grantem MeSH
- Research Support, N.I.H., Extramural MeSH
V poslední době se v experimentální praxi stále ve větší míře uplatňují metody využívající mikročipové expresní analýzy. Většina expresních analýz v medicínském výzkumu vychází z bioptických vzorků, které obsahují řadu různých typů buněk. Majoritní populace buněk je určující pro celkovou informaci o genové expresi a znemožňuje tak rozlišení specifické genové exprese jednotlivých typů buněk. Mezi metody, které umožňují selekci přesně definovaných populací buněk patří laserová a mechanická mikrodisekce. Současné čipy vyžadují mikrogramová množství značené nukleové kyseliny, přičemž vstupní množství RNA ze selektovaných buněk se může pohybovat pouze v nanogramovém až pikogramovém řádu. Tento problém je možno řešit různými způsoby amplifikace RNA, mezi které patří dvojitá lineární amplifikace RNA nebo metody využívající kombinovanou PCR s linearní amplifikací. V tomto krátkém přehledu poskytujeme jednak informace, se kterými jsme se setkali jednak během naší současné analýzy genové exprese v mikrodisekovaných buňkách mléčné žlázy, a také náš optimalizovaný postup. Celý projekt sestával z časově náročného sběru čerstvě zmražené tkáně, optimalizace přípravy kryofiezů pro mikrodisekci, izolace a amplifikace RNA, hybridizace na mikročipy, analýzy dat a konečně verifikace vybraných výsledků pomocí imunohistochemie. V současné době je vlastní práce v oponentním řízení v zahraničním časopise, a nemůžeme proto poskytnou detailnější informace o získaných výsledcích.
The DNA microarray is a powerful, high throughput technique for assessing gene expression on a systemwide genomic scale. Most expression profiling studies of solid tumors have used biopsy samples containing large numbers of contaminating stromal and other cell types, thereby complicating any precise delineation of gene expression in nontumor versus tumor cell types. Combining microdissection, RNA amplification protocols, microarray technologies and our knowledge of the human genome sequence, it is possible to isolate pure populations of cells or even a single cell and interrogate the expression of thousands of sequences for the purpose of more precisely defining the biology of the tumor cell. In this short overview, we provide informations on selected problems which we had to solve during our microarray analysis of microdissected normal and tumour cells of mammary gland. We provide our optimized procedure as well. The whole project consisted of the long-term collection of snap-frozen tissues, optimalization of staining of cryosections for laser capture microdissection, isolation and amplification of RNA, hybridization onto chips, data analysis and finally verification of the results by immunohistochemistry. Our work is currently reviewed by an international journal and we can’t provide detailed information on particular achievements yet.
- MeSH
- čipová analýza proteinů metody přístrojové vybavení využití MeSH
- exprese genu genetika MeSH
- financování organizované MeSH
- imunohistochemie využití MeSH
- lasery využití MeSH
- lidé MeSH
- mikrodisekce metody přístrojové vybavení využití MeSH
- mléčné žlázy lidské cytologie MeSH
- odběr biologického vzorku metody trendy MeSH
- polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí metody přístrojové vybavení využití MeSH
- RNA diagnostické užití genetika izolace a purifikace MeSH
- techniky amplifikace nukleových kyselin metody přístrojové vybavení využití MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
- MeSH
- biologické markery MeSH
- cirkulující mikroRNA * izolace a purifikace klasifikace krev MeSH
- dospělí MeSH
- krevní plazma MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mikročipová analýza MeSH
- myelodysplastické syndromy * diagnóza MeSH
- polymerázová řetězová reakce MeSH
- prognóza * MeSH
- progrese nemoci MeSH
- ROC křivka MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- výzkum MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři nad 80 let MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- práce podpořená grantem MeSH
Prudký rozvoj čipových technologií v posledních letech umožnil sériové analýzy exprese několika tisíc genů zároveň v jediném experimentu a tím urychlil naše porozumění komplexnosti buněčných procesů. Pomocí mikročipového výzkumu lidského transkriptomu byly odhaleny nové, dříve nerozeznatelné subtypy tumorů, nové diagnostické a prognostické markery nebo potenciální cílové molekuly pro terapii. Aplikace „high-throughput“ technologií v klinické onkologii slibuje do budoucna posun ke každodenním rutinním čipovým analýzám nádorů a na jejich základě individualizaci léčebného programu. Před zavedením mikročipů do klinické praxe je však ještě potřeba vyře- šit nukolik sporných otázek týkajících se analýzy dat, reprodukovatelnosti a validace výsledků, mezilaboratorního srovnávání a v neposlední řadě také problém stále poměrně vysokých pořizovacích i provozních nákladů.
During recent few years, rapid progress in microarray technology has facilitated gene expression analyses of thousands of genes performed simultaneously in one experiment. It has revolutionized our understanding of the cellular processes complexity. Previously subtypes of tumors, new diagnostic and prognostic markers, or potential targets for therapy has been identified by microarray-based research of human transcriptom. In clinical oncology, high-throughput technologies implementation promises their routine application in tumor analyses and individualization of treatment. However, several issues relating to data analysis, reproducibility, cross-comparability, validation, and high purchase and operating costs need to be resolved before the technology can be adopted broadly in the clinical practices.
- MeSH
- C-DNA diagnostické užití MeSH
- diagnostické techniky molekulární metody využití MeSH
- genetický výzkum MeSH
- hybridizace nukleových kyselin metody MeSH
- lékařská onkologie metody trendy MeSH
- lidé MeSH
- mikročipové analytické postupy metody využití MeSH
- oligonukleotidy diagnostické užití MeSH
- polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí metody využití MeSH
- prognóza MeSH
- stanovení celkové genové exprese metody využití MeSH
- vztah mezi dávkou a účinkem léčiva MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
The combination of microarray technologies with microfluidic sample delivery and real-time detection methods has the capability to simultaneously monitor 10-1000 s of biomolecular interactions in a single experiment. Despite the benefits that microfluidic systems provide, they typically operate in the laminar flow regime under mass transfer limitations, where large analyte depletion layers act as a resistance to analyte capture. By locally stirring the fluid and delivering fresh analyte to the capture spot, the use of passive mixing structures in a microarray environment can reduce the negative effects of these depletion layers and enhance the sensor performance. Despite their large potential, little attention has been given to the integration of these mixing structures in microarray sensing environments. In this study, we use passive mixing structures to enhance the mass transfer of analyte to a capture spot within a microfluidic flow cell. Using numerical methods, different structure shapes and heights were evaluated as means to increase local fluid velocities, and in turn, rates of mass transfer to a capture spot. These results were verified experimentally via the real-time detection of 20-mer ssDNA for an array of microspots. Both numerical and experimental results showed that a passive mixing structure situated directly over the capture spot can significantly enhance the binding rate of analyte to the sensing surface. Moreover, we show that these structures can be used to enhance mass transfer in experiments regarding an array of capture spots. The results of this study can be applied to any experimental system using microfluidic sample delivery methods for microarray detection techniques.
