BACKGROUND: Lactoferrin (LF) is an 80 kDa glycoprotein which is known for its effects against bacteria, viruses and other pathogens. It also has a high potential in nutrition therapy and welfare of people and a variety of animals, including piglets. The ability to bind lipopolysaccharide (LPS) is one of the described anti-inflammatory mechanisms of LF. Previous studies suggested that cells can be stimulated even by LPS-free LF. Therefore, the aim of our study was to bring additional information about this possibility. Porcine monocyte derived macrophages (MDMF) and human embryonic kidney (HEK) cells were stimulated with unpurified LF in complex with LPS and with purified LF without bound LPS. RESULTS: Both cell types were stimulated with unpurified as well as purified LF. On the other hand, neither HEK0 cells not expressing any TLR nor HEK4a cells transfected with TLR4 produced any pro-inflammatory cytokine transcripts after stimulation with purified LF. This suggests that purified LF without LPS stimulates cells via another receptor than TLR4. An alternative, TLR4-independent, pathway was further confirmed by analyses of the NF-kappa-B-inducing kinase (NIK) activation. Western blot analyses showed NIK which activates different NFκB subunits compared to LF-LPS signaling via TLR4. Though, this confirmed an alternative pathway which is used by the purified LF free of LPS. This stimulation of MDMF led to low, but significant amounts of pro-inflammatory cytokines, which can be considered as a positive stimulation of the immune system. CONCLUSION: Our results suggest that LF's ability is not only to bind LPS, but LF itself may be a stimulant of pro-inflammatory pathways.

• MeSH
• cytokiny genetika   metabolismus   MeSH
• HEK293 buňky MeSH
• intracelulární signální peptidy a proteiny metabolismus   MeSH
• laktoferrin izolace a purifikace   farmakologie   MeSH
• lidé MeSH
• lipopolysacharidy farmakologie   MeSH
• makrofágy účinky léků   MeSH
• prasata MeSH
• protein-serin-threoninkinasy metabolismus   MeSH
• regulace genové exprese účinky léků   MeSH
• signální transdukce účinky léků   MeSH
• toll-like receptor 4 genetika   metabolismus   MeSH
• vazba proteinů MeSH
• zánět MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

Nádory ledvin tvoří 2–3 % všech malignit. Přes 25 % pacientů je diagnostikováno v metastatickém stadiu a kolem 20–40 % nakonec vyvine generalizované onemocnění. U pokročilého a metastatického renálního karcinomu používáme systémovou léčbu. V posledních letech vidíme v terapii velký pokrok. Imunoterapie významně prodlužuje celkové přežití pacientů s mRCC. Dle klinických studií jsou checkpoint inhibitory nivolumab/ipilimumab a kombinace pembrolizumab/axitinib nejefektivnější léčbou 1. linie mRCC pacientů se střední a špatnou prognózou.

x

• MeSH
• antitumorózní látky aplikace a dávkování   farmakologie   klasifikace   MeSH
• humanizované monoklonální protilátky aplikace a dávkování   farmakologie   klasifikace   MeSH
• imunoterapie * metody   MeSH
• ipilimumab aplikace a dávkování   farmakologie   MeSH
• lidé MeSH
• nádory ledvin * farmakoterapie   MeSH
• nivolumab aplikace a dávkování   farmakologie   MeSH
• sunitinib aplikace a dávkování   MeSH
• výsledek terapie MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

Dědičná nádorová onemocnění tvoří malou, ale klinicky významnou část onkologických onemocnění, v České republice se jedná ročně o několik tisíc osob. Identifikace kauzální mutace v nádorových predispozičních genech má u těchto nemocných zásadní prognostický a v některých případech i prediktivní význam. Mimo to je podmínkou cílené preventivní péče o asymptomatické nosiče mutací v rodinách se zvýšeným rizikem vzniku nádorového onemocnění. Do současné doby bylo charakterizováno více než 150 nádorových predispozičních genů. Mutace většiny z nich se vyskytují vzácně, s výraznou populační specifičností a jejich klinická interpretace je často obtížná. Diagnostiku raritních variant technicky zjednodušují postupy využívající sekvenování nové generace, které umožňují vyšetření rozsáhlých sad genů. Za účelem racionalizace diagnostiky hereditárních nádorových syndromů v České republice jsme navrhli sekvenační panel „CZECANCA“, který cílí na vyšetření 219 genů asociovaných s dědičnými nádorovými onemocněními. Panel obsahuje přes 50 klinicky významných genů vysokého a středního rizika, zbývající geny tvoří málo prozkoumané a kandidátní predispoziční geny, jejichž vrozené mutace mají nejasnou klinickou interpretaci. Společně s návrhem panelu byl optimalizován postup vlastního sekvenování a bioinformatického zpracování sekvenačních dat pro tvorbu jednotné databáze genotypů analyzovaných vzorků. Cílem projektu je nabídnout použití sekvenačního panelu včetně optimalizovaného postupu sekvenování nové generace diagnostickým laboratořím v České republice a zajistit sdílení genotypů a klinických údajů o vyšetřovaných pacientech ve společné databázi za účelem zlepšení možnosti klinické interpretace vzácných mutací u vysoce rizikových osob.

Individuals with hereditary cancer syndromes form a minor but clinically important subgroup of oncology patients, comprising several thousand cases in the Czech Republic annually. In these patients, the identification of pathogenic mutations in cancer susceptibility genes has an important predictive and, in some cases, prognostic value. It also enables rational preventive strategies in asymptomatic carriers from affected families. More than 150 cancer susceptibility genes have been described so far; however, mutations in most of them are very rare, occurring with substantial population variability, and hence their clinical interpretation is very complicated. Diagnostics of mutations in cancer susceptibility genes have benefited from the broad availability of next-generation sequencing analyses using targeted gene panels. In order to rationalize the diagnostics of hereditary cancer syndromes in the Czech Republic, we have prepared the sequence capture panel “CZECANCA”, targeting 219 cancer susceptibility genes. Besides more than 50 clinically important high- and moderate-penetrance susceptibility genes, the panel also targets less common candidate genes with uncertain clinical relevance. Alongside the panel design, we have optimized the analytical and bioinformatics pipeline, which will facilitate establishing a collective nationwide database of genotypes and clinical data from the analyzed individuals. The key objective of this project is to provide diagnostic laboratories in the Czech Republic with a reliable procedure and collective database improving the clinical utility of next-generation sequencing analyses in high-risk patients, which would help improve the interpretation of rare or population-specific variants in cancer susceptibility genes. Key words: genetic predisposition testing – hereditary cancer syndromes – high-throughput nucleotide sequencing – genetic information databases – panel sequencing – sequence capture – next-generation sequencing (NGS) This work was supported by Czech Ministry of Health grants No. NT14054, NV15-28830A, NV15--27695A and The League Against Cancer Prague. The authors declare they have no potential conflicts of interest concerning drugs, products, or services used in the study. The Editorial Board declares that the manuscript met the ICMJE recommendation for biomedical papers. Submitted: 2. 10. 2015 Accepted: 13. 10. 2015

• Klíčová slova
• sekvenování nové generace (NGS), cílené sekvenování, panelové sekvenování,
• MeSH
• databáze genetické * využití   MeSH
• dědičné nádorové syndromy * diagnóza   genetika   MeSH
• genetická predispozice k nemoci MeSH
• genetické testování metody   MeSH
• lidé MeSH
• sekvenční analýza DNA MeSH
• šíření informací MeSH
• výpočetní biologie MeSH
• vysoce účinné nukleotidové sekvenování * MeSH
• výzkumný projekt MeSH
• zárodečné mutace MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Východiska: Karcinom prsu je komplexní, multifaktoriální onemocnění, na jehož vzniku se podílejí i genetické faktory. Kromě relativně vzácných patogenních variant ve vysoce či středně penetrantních nádorových predispozičních genech ovlivňují riziko vzniku karcinomu prsu i početné nízce penetrantní alely, které vnímáme jako faktory polygenní dědičnosti. Nízce penetrantní alely mají samostatně zanedbatelný význam, avšak jejich kumulativní účinek může dosáhnout klinicky významných hodnot a lze jej vyjádřit pomocí skóre polygenního rizika (polygenic risk score – PRS), které se v současnosti zvažuje jako možný nástroj pro přesnější odhad absolutního a kumulativního rizika onkologického onemocnění u konkrétní osoby. Cíl: V zahraničí již bylo vyvinuto několik setů pro jednonukleotidový polymorfizmus (single nucleotide polymorphism – SNP) pro stanovení PRS za účelem využití metody v individualizaci rizika v klinické praxi. Následující text si klade za cíl osvětlit základy stanovení PRS a jeho interpretaci jako možného predikčního nástroje. Využití PRS by však mělo být vždy podmíněno genetickým vyšetřením patogenních variant v nádorových predispozičních genech.

Background: Breast cancer is a complex, multifactorial disease influenced by many genetic factors. Besides the relatively rare pathogenic variants in high or moderate penetrant cancer predisposition genes, breast cancer risk is modified by numerous low risk alleles considered to be polygenic genetic factors. While the risks associated with individual polygenic loci are negligible, its cumulative effect can reach clinically significant values and it can be expressed as a polygenic risk score (PRS). PRS is recently considered to be a possible tool improving assessment of absolute and cumulative risks at the individual level. Purpose: Several single nucleotide polymorphism sets for PRS assessment have recently been developed and prepared for their implementation into clinical practice. The following text aims to explain the fundamental principles of the PRS assessment and its interpretation as a candidate prediction tool. The use of the PRS should always depend on genetic analysis of pathogenic variants in cancer predisposition genes including its current limitations.

• Klíčová slova
• polygenní dědičnost karcinomu prsu, sporadický karcinom prsu,
• MeSH
• genetická predispozice k nemoci MeSH
• lidé MeSH
• multifaktoriální dědičnost MeSH
• nádory prsu * etiologie   genetika   MeSH
• rizikové faktory MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

• Publikační typ
• abstrakty MeSH

AIM: Endoglin is a homodimeric transmembrane glycoprotein that has been demonstrated to affect transforming growth factor beta (TGF-beta) signaling and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expression by affecting SMAD proteins in vitro. Thus, in this study we stepped forward to elucidate whether endoglin is co-expressed with SMAD2, phosphorylated SMAD2/3 proteins and eNOS in vivo in atherosclerotic lesions in ApoE/LDLR double knockout mice. In addition, we sought whether endoglin expression as well as the expression of SMAD2, phosphorylated SMAD2/3 and eNOS is affected by atorvastatin treatment. METHODS: Two-month-old female ApoE/LDLR double knockout mice were divided into two groups. The control group was fed with the western type diet whereas in the atorvastatin group, atorvastatin at dose 100 mg/kg per day was added to the same diet. Immunohistochemical and western blot analysis of endoglin, SMAD2, phosphorylated SMAD2/3 and eNOS expressions in aorta were performed. RESULTS: The biochemical analysis showed that administration of atorvastatin significantly decreased level of total cholesterol, VLDL, LDL, TAG, and significantly increased level of HDL cholesterol. Fluorescence immunohistochemistry showed endoglin co-expression with SMAD2, phosphorylated SMAD2/3 and eNOS in aortic endothelium covering atherosclerotic lesions in both control and atorvastatin treated mice. Western blot analysis demonstrated that atorvastatin significantly increased expression of endoglin, SMAD2, phosphorylated SMAD2/3, and eNOS in mice aorta. CONCLUSION: These findings suggest, that endoglin might be interesting marker of endothelial dysfunction and/or atherogenesis which is upregulated by statins implicating potential beneficial role of endoglin and its pathway in atherosclerosis.

• MeSH
• anticholesteremika farmakologie   MeSH
• aorta chemie   MeSH
• apolipoproteiny E genetika   MeSH
• ateroskleróza metabolismus   MeSH
• cévní endotel chemie   MeSH
• fosforylace MeSH
• imunohistochemie MeSH
• intracelulární signální peptidy a proteiny analýza   MeSH
• kyseliny heptylové farmakologie   MeSH
• myši knockoutované MeSH
• myši MeSH
• protein Smad2 analýza   MeSH
• protein Smad3 analýza   MeSH
• pyrroly farmakologie   MeSH
• receptory LDL genetika   MeSH
• synthasa oxidu dusnatého, typ III analýza   MeSH
• western blotting MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• myši MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

• MeSH
• aorta metabolismus   účinky léků   MeSH
• ateroskleróza * etiologie   genetika   metabolismus   MeSH
• cévní endotel metabolismus   účinky léků   MeSH
• exprese genu * genetika   účinky léků   MeSH
• financování organizované MeSH
• intracelulární signální peptidy a proteiny genetika   izolace a purifikace   metabolismus   MeSH
• lipoproteiny izolace a purifikace   klasifikace   metabolismus   MeSH
• myši MeSH
• proteiny Smad genetika   klasifikace   metabolismus   MeSH
• statiny diagnostické užití   MeSH
• synthasa oxidu dusnatého metabolismus   účinky léků   MeSH
• transformující růstový faktor beta izolace a purifikace   metabolismus   MeSH
• western blotting metody   využití   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• myši MeSH
• zvířata MeSH

Endoglin, a homodimeric transmembrane glycoprotein, is a part of the transforming growth factor-beta (TGF-beta) receptor cascade. It has been demonstrated that endoglin can affect TGF-beta signaling and eNOS expression by affecting SMAD proteins in vitro. We planned to go one step forward and evaluate whether endoglin is co-expressed with SMAD2, phosphorylated SMAD2/3 protein and eNOS in endothelium of normocholesterolemic C57BL/6J mice, and in advanced atherosclerotic lesions in hypercholesterolemic apoE/LDLr-deficient mice by means of fluorescence immunohistochemistry. Female C57BL/6J mice were fed with a chow diet (standard laboratory diet) for 12 weeks after weaning (at the age of 4 weeks). Two-month-old female apoE/LDLr-deficient mice were fed the western type diet (atherogenic diet) containing 21% fat (11% saturated fat) and 0.15% cholesterol for 2 months. Immunohistochemical analysis of endoglin, SMAD2, phosphorylated SMAD2/3 and eNOS expression was performed in mice aortic sinus. Immunohistochemical analysis showed the expression of endoglin in intact endothelium in both C57BL/6J and apoE/LDLr-deficient mice and in endothelium covering the atherosclerotic lesion in apoE/LDLr-deficient mice. Fluorescence immunohistochemistry revealed co-expression of endoglin with SMAD2, phosphorylated SMAD2/3 and eNOS in intact aortic endothelium in C57BL/6J mice. Moreover, strong co-localization of endoglin, SMAD2, phosphorylated SMAD2/3 and eNOS was also detected in endothelium covering atherosclerotic lesions in apoE/LDLr-deficient mice. In conclusion, we suggest that endoglin, SMAD2, phosphorylated SMAD2/3 and eNOS may be important in vessel endothelium homeostasis underlying their role in atherogenesis.

• MeSH
• aorta cytologie   MeSH
• apolipoproteiny E genetika   nedostatek   MeSH
• cévní endotel metabolismus   MeSH
• dieta aterogenní MeSH
• fluorescenční protilátková technika přímá MeSH
• fosforylace MeSH
• hypercholesterolemie metabolismus   MeSH
• imunohistochemie MeSH
• intracelulární signální peptidy a proteiny genetika   metabolismus   MeSH
• myši inbrední C57BL MeSH
• myši MeSH
• protein Smad2 genetika   metabolismus   MeSH
• protein Smad3 genetika   metabolismus   MeSH
• synthasa oxidu dusnatého, typ III metabolismus   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• myši MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Východiska: Gen PALB2 (FANCN) kóduje DNA reparační protein, který byl objeven jako součást endogenního multiproteinového komplexu BRCA2. Společně s proteiny BRCA1 a BRCA2 se PALB2 funkčně podílí na opravách dvouřetězcových zlomů DNA. Dědičné mutace v genu PALB2 jsou u heterozygotních nositelů spojeny se zvýšeným rizikem vzniku karcinomu prsu a pankreatu. Riziko vzniku karcinomu prsu u nositelek mutací PALB2 genu se odhaduje na 33–58 % v závislosti na počtu příbuzných s tímto onemocněním. Riziko vzniku karcinomu pankreatu u nositelů mutací je doposud nejasné. Metody a výsledky: Z výsledků studie mutací v genu PALB2 u vysoce rizikových pa­cientů s karcinomem prsu a/nebo ovaria bez přítomnosti BRCA1/2 mutací v České republice vyplývá, že frekvence dědičných mutací genu PALB2 v naší populaci je u těchto pa­cientů poměrně vysoká. Necelých 20 % patogenních variant představují rozsáhlé intragenové přestavby PALB2. Nejvyšší podíl mutací (srovnatelný s četností mutací v genu BRCA2) byl zaznamenán v podskupině pa­cientek s vícečetným výskytem karcinomu prsu (5,5 %). Frekvence patogenních mutací v nezávislém souboru vyšetřených neselektovaných pa­cientů s karcinomem pankreatu se v naší populaci pohybuje okolo 1,3 %. Závěr: Vzhledem k četnosti výskytu mutací PALB2 v naší populaci, fenotypové podobnosti s BRCA2 a k stanovenému riziku vzniku karcinomu prsu je vhodné indikovat testování genu PALB2, včetně analýz velkých genomových přestaveb, především u pa­cientek z podskupiny s hereditárním karcinomem prsu. Nositele patogenních mutací lze zařadit do dalšího klinického sledování, obdobného jako u nositelů mutací v BRCA2, umožňujícího časnou dia­gnostiku onemocnění, prevenci a popřípadě cílenou terapii. V případě vysoké rodinné zátěže a současné segregace patogenní mutace s nádorovým fenotypem lze na PALB2 mutace nahlížet jako na vysoce penetrantní alterace indikující provedení preventivních chirurgických výkonů u jejich nositelů. Další analýzy v různých populacích a zvětšení studovaných souborů budou potom nezbytné pro přesný odhad penetrance genu PALB2 a k upřesnění rizika vzniku karcinomu pankreatu.

Background: The PALB2 (FANCN) gene was identified as a component of endogenous BRCA2 complex that encodes a DNA repair protein participating along with BRCA1 and BRCA 2 proteins in DNA double-strand break repair. Hereditary PALB2 mutations are associated with an increased risk of breast and pancreatic cancers in heterozygotes. Breast cancer risk for PALB2 mutation carriers has recently been estimated at 33–58% depending on family history of breast cancer; pancreatic cancer risk in carriers of PALB2 mutations has not been precisely quantified, yet. Mate­rials and Results: Results of a study identifying PALB2 mutations in high-risk, BRCA1/2-negative, breast and/or ovarian cancer patients in the Czech Republic indicate that the frequency of hereditary PALB2 mutations in our population is quite high. Interestingly, almost 20% of all recognized mutations comprised large genomic rearrangements. The highest proportion of PALB2 mutations (comparable with the number of mutations reported for BRCA2) was found in a subgroup of hereditary breast cancer patients (5.5%). Frequency of mutations in an independent group of Czech unselected pancreatic cancer patients was approximately 1.3%. Conclusion: Considering the frequency of pathogenic, hereditary PALB2 mutations in our population, their phenotypic similarity to BRCA2, and expected risk of breast cancer associated with PALB2 mutations, its screen­ing (including large genomic rearrangements) should be encouraged in patients from hereditary breast cancer families. The follow-up of pathogenic PALB2 mutation carriers should be similar to that in BRCA2 mutation carriers, enabling early diagnosis, prevention, and possible targeted therapy. Preventive surgical interventions for the carriers could be considered in case of strong family cancer history and evident segregation of a pathogenic mutation with a tumor phenotype. Additional analysis of various cancer patient populations and further meta-analyses will be necessary for accurate assessment of PALB2 gene penetrance and its significance for the risk of pancreatic and other cancers. Key words: hereditary breast and ovarian cancer syndrom – pancreatic neoplasms – PALB2 gene – genetic predisposition – genetic testing This study was supported by grants IGA MH CZ NT14006-3/2013 and NT13343-4/2012, and Charles univessity in Prague – PRVOUK-P27//LF1/1 a SVV-UK 260148/2015. The authors declare they have no potential conflicts of interest concerning drugs, products, or services used in the study. The Editorial Board declares that the manuscript met the ICMJE recommendation for biomedical papers. Submitted: 6. 8. 2015 Accepted: 14. 8. 2015

• MeSH
• dědičný syndrom nádoru prsu a vaječníků * genetika   MeSH
• dospělí MeSH
• genetická predispozice k nemoci MeSH
• genetické testování MeSH
• jaderné proteiny genetika   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mutace MeSH
• mutační analýza DNA MeSH
• nádorové supresorové proteiny * genetika   MeSH
• nádory prsu genetika   MeSH
• nádory slinivky břišní * epidemiologie   genetika   MeSH
• prevalence MeSH
• rizikové faktory MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Východiska: Hereditární nádorové syndromy tvoří významnou podskupinu zhoubných nádorových onemocnění způsobených patogenními variantami v některém z mnoha známých nádorových predispozičních genů. Diagnostika nádorové predispozice je založena na genetickém testování pomocí sekvenování nové generace. To umožňuje analýzu mnoha genů najednou, nicméně zároveň se zvyšuje počet identifikovaných variant. Správná klasifikace nalezených variant je zásadní pro klinickou interpretaci výsledků genetického testování. Cíl: Cílem práce je shrnutí pravidel pro klasifikaci identifikovaných variant v rámci jednotlivých pracovišť a představení procesu tvorby společné klasifikace. Sdílení nalezených genetických variant a tvorba jejich konsenzuální klasifikace v rámci národních laboratorně diagnostických komunit probíhá v ČR v rámci konzorcia Czech Cancer Panel for Clinical Application (CZECANCA) sdružujícího výzkumné a diagnostické onkogenetické laboratoře. Tvorba konsenzu pro klasifikaci variant probíhá podle definovaného protokolu. Sdílení výsledků a konsenzuální klasifikace zrychluje a zpřesňuje vydávání výsledků genetického testování, harmonizuje výsledky mezi laboratořemi a přispívá tak ke zkvalitnění péče o jedince ve vysokém riziku vzniku nádorových onemocnění a jejich příbuzné.

Background: Hereditary cancer syndromes are an important subset of malignant cancers caused by pathogenic variants in one of many known cancer predisposition genes. Diagnosis of cancer predisposition is based on genetic testing using next-generation sequencing. This allows many genes to be analysed at once, increasing the number of variants identified. The correct classification of the variants found is essential for the clinical interpretation of genetic test results. Purpose: The aim of this study is to summarise the rules for classifying identified variants within individual laboratories and to present the process for creating a common classification. In the Czech Republic, the sharing of identified genetic variants and the development of their consensus classification among national laboratory diagnostic communities is carried out within the Czech Cancer Panel for Clinical Application (CZECANCA) consortium of scientific and diagnostic oncogenetic laboratories. Consensus for variant classification follows a defined protocol. Sharing the results and consensus classification accelerates and refines the release of genetic test results, harmonises results between laboratories and thus contributes to improving the care of individuals at high risk of cancer and their relatives.

• Klíčová slova
• CZECANCA,
• MeSH
• dědičné nádorové syndromy * diagnóza   genetika   klasifikace   MeSH
• genetická predispozice k nemoci genetika   prevence a kontrola   MeSH
• genetické testování metody   MeSH
• klasifikace MeSH
• konsensus * MeSH
• lidé MeSH
• nádory genetika   klasifikace   MeSH
• vysoce účinné nukleotidové sekvenování metody   MeSH
• zárodečné mutace genetika   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• přehledy MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH