Popisujeme kazuistiku 63-ročného pacienta s Ph1 pozitívnou chronickou myeloidnou leukémiou (CML), u ktorého bola pre sekundárnu cytogenetickú rezistenciu na interferón alfa po dvoch rokoch od stanovenia diagnózy indikovaná liečba imatinibom v dávke 400 mg denne. Po iniciálnej cytogenetickej odpovedi (10 % Bcr/Abl pozitívnych buniek pri vyšetrení kostnej drene metódou interfázovej FISH po 3 mesiacoch a pokles o 1 log v kvantitatívnej RT-PCR po šiestich mesiacoch liečby) dochádza po roku liečby k cytogenetickej progresii s nedostatočnou odpoveďou i na eskalovanú dávku imatinibu 800 mg denne. To vedie k podozreniu na rezistenciu k imatinibu. In vitro testy to potvrdzujú: vysoká expresia WT1 génu, pozitivita testu na fosforylovaný CRKL a odhalenie mutácie T315I v oblasti ABL kinázovej domény. Cieľom článku je načrtnúť kroky, ktoré by mali nasledovať pri podozrení na rezistenciu k imatinibu a poskytnúť prehľad ďalších liečebných možností. Určenie rezistencie má klinický význam, pretože na jednej strane umožňuje včas ukončiť ďalej neprínosnú a ekonomicky náročnú liečbu a na druhej strane ju posúva k aplikácii nových inhibítorov tyrozínových kináz, k alogénnej transplantácii krvotvorných buniek či k experimentálnym postupom.

There is the case report of 63-years old patient with Ph1 positive chronic myeloid leukaemia (CML) who is treated with 400 mg of imatinib daily. It is because of the secondary cytogenetic resistance to interferon alpha after two years from diagnosis. After initial cytogenetic response (10 % Bcr/Abl positive cells detected by bone marrow interphase FISH examination after 3 months and 1 log decrease in quantitative RT-PCR after 6month of treatment) there is the cytogenetic progression in one year with failure of the response to the escalated dosage 800 mg daily. It leads to the suspicion of imatinib resistance. In vitro tests confirm it: there is a high expression of WT1 gene, the presence of phosphorylated CRKL and detection of T315I mutation in Abl kinase domain. This article is aimed at detection of imatinib resistance in case of suspicion and should also show the review of the new treatment modalities. The resistance detection is important from clinical point of view. It allows to stop the therapy which is not useful and economically demanding, on the other side it moves it to the application of the new tyrosine kinase inhibitors, allogenic stem cell transplantation or to experimental treatment.

• MeSH
• bcr-abl fúzové proteiny genetika   MeSH
• chronická myeloidní leukemie farmakoterapie   MeSH
• finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
• léková rezistence MeSH
• lidé MeSH
• mutace MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• regulace genové exprese u leukemie MeSH
• tyrosinkinasy antagonisté a inhibitory   terapeutické užití   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• Publikační typ
• kazuistiky MeSH

Molekulární monitorování pacientů s chronickou myeloidní leukemií je v době používání inhibitorů tyrozinkináz klíčovou součástí léčebného protokolu. Zavedení postupů pro kvantifikaci transkriptů BCR-ABL1 vyžaduje harmonizaci napříč laboratořemi u nás i v zahraničí. V České republice se podařilo vytvořit stabilní síť laboratoří, které v posledních osmi letech procházejí procesem standardizace a každoročních externích kontrol kvality. Postupné zavádění doporučení pro monitorování a hodnocení léčebné odpovědi předkládaných skupinou European LeukemiaNet vede ke zvýšení spolehlivosti analýz klíčových pro klinická rozhodování a také k jednotnosti výsledků mezi laboratořemi vyjadřovaných v mezinárodním měřítku.

Molecular monitoring of patients with chronic myeloid leukaemia has become a crucial part of therapeutic practice in the era of tyrosine kinase inhibitors. Introduction of BCR-ABL1 transcript quantification requires harmonization across laboratories worldwide. A network of BCR-ABL1 laboratories, that regularly undergo standardization and annual external quality controls, has been created in the Czech Republic since 2007. The progressive introduction of European LeukemiaNet recommendations for the management of CML and its molecular monitoring has increased in the increased reliability of BCR-ABL1 transcript level monitoring used for therapeutic decision making as well as the comparability of results from different laboratories.

• MeSH
• bcr-abl fúzové proteiny * genetika   MeSH
• chronická myeloidní leukemie * diagnóza   farmakoterapie   genetika   MeSH
• genetické techniky normy   MeSH
• inhibitory proteinkinas MeSH
• kvantitativní polymerázová řetězová reakce * normy   MeSH
• laboratoře normy   MeSH
• lidé MeSH
• messenger RNA MeSH
• referenční standardy MeSH
• reprodukovatelnost výsledků MeSH
• reverzní transkripce MeSH
• řízení kvality MeSH
• tyrosinkinasy antagonisté a inhibitory   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH

Chronic myeloid leukemia (CML) is malignant disease characterised by a presence of BCR-ABL1 fusion gene and successfully treated by tyrosine kinase inhibitors (TKI). Treatment failure can be caused by factors on the side of patient, e.g. pharmacokinetics, or by the cancer cell characteristics. Here the main reason are mutations in the BCR-ABL1 kinase domain, leading to TKI resistance, or other mutations in non-BCR-ABL1 genes. They can be detected at diagnosis, but often disappear after the start of TKI therapy, therefore their clinical significance is unclear. The reason may be the fact that they originate in more mature progenitors which are then eliminated by TKIs, while mutations originating in therapy resistant stem cells persist. This hypothesis may be confirmed by the analysis of BCR-ABL1 and non-BCR-ABL1 mutations in hierarchically sorted progenitor and stem-cell enriched populations at diagnosis and early follow-up. The expected results may explain if mutations in stem cells have higher probability to survive the TKI treatment and may lead to treatment failure or relapse.

Chronická myeloidní leukémie (CML) je nádorové onemocnění charakterizované přítomností fúzního genu BCR-ABL1 a úspěšně léčena tyrozin kinázovými inhibitory (TKI). Selhání léčby může být zapříčiněno jednak faktory na straně pacienta (např. farmakokinetika), a jednak vlastnostmi nádorové buňky. Zde jsou hlavními příčinami mutace v kinázové doméně BCR-ABL1, způsobující rezistenci k TKI, nebo jiné mutace v genech mimo BCR-ABL1. Mutace v BCR-ABL1 genu i mimo BCR-ABL1 detekované v době diagnózy často mizí po zahájení TKI terapie a jejich klinický význam je proto nejasný. Příčinou může být fakt, že nevznikají v leukemických kmenových buňkách ale až ve vyzrálejších progenitorech, které jsou následkem TKI eliminované. Zatímco mutace v leukemických kmenových buňkách rezistentních na terapii mohou přetrvávat. Objasnění může přinést analýza mutací BCR-ABL1 a jiných genů v hierarchicky roztříděných populacích progenitorů a kmenových buněk v době diagnózy a na začátku terapie. Předpokládané výsledky objasní, zda mutace v kmenových buňkách mají větší předpoklad přežít TKI léčbu a vést k selhání.

• MeSH
• bcr-abl fúzové proteiny genetika   MeSH
• chronická myeloidní leukemie genetika   MeSH
• genetické techniky MeSH
• inhibitory tyrosinkinasy MeSH
• kmenové buňky patologie   MeSH
• lidé MeSH
• mutace genetika   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• genetika, lékařská genetika
• onkologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Zavedení imatinibu do léčby chronické myeloidní leukemie s pozitivitou philadelphského chromosomu (Ph+ CML) vedlo k výraznému zlepšení prognózy onemocnění. U nově diagnostikovaných pacientů je léčba imatinibem spojena s kompletní cytogenetickou odpovědí u 87 % a odhadovaným pětiletým přežitím u 89 % nemocných. Rezistence k imatinibu se ročně vyskytne u 3–4 % pacientů. U nemocných, kteří jsou rezistentní k imatinibu nebo jej nesnášejí, jsou hledány další možnosti léčby. Nilotinib je nový perorálně účinný lék odvozený od imatinibu, vyznačující se zvýšenou cílovou specificitou. V preklinických studiích vykazoval nilotinib 30krát vyšší účinnost než imatinib a účinnost byla zachována u 32 ze 33 imatinib-rezistentních mutací BCR-ABL. Primárním cílem této klinické studie II. fáze bylo stanovit výskyt velké cytogenetické odpovědi (MCyR) u pacientů v chronické fázi Ph+ CML, u kterých se vyvinula rezistence k imatinibu nebo kteří léčbu imatinibem nesnášeli.

• Klíčová slova
• imatinib, nilotinib,
• MeSH
• bcr-abl fúzové proteiny antagonisté a inhibitory   MeSH
• chemorezistence MeSH
• chronická myeloidní leukemie farmakoterapie   MeSH
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• monoklonální protilátky škodlivé účinky   terapeutické užití   MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé MeSH
• Publikační typ
• klinické zkoušky MeSH

Spleen tyrosine kinase (SYK) and Bruton's tyrosine kinase (BTK) are attractive targets in human haematological malignancies with excessively activated B-cell receptor (BCR) signalling pathways. Entospletinib is a SYK inhibitor that has been evaluated as a clinical candidate. We designed and prepared five isosteres in which the imidazo[1,2-a]pyrazine scaffold of entospletinib was altered to pyrazolo[3,4-d]pyrimidine, pyrrolo[3,2-d]pyrimidine, imidazo[4,5-b]pyridine, imidazo[4,5-c]pyridine and purine. The last two isosteres were the most potent SYK inhibitors, with IC50 values in the mid-nanomolar range. Importantly, three compounds also inhibited BTK more effectively than did entospletinib. Further experiments then showed that BCR signalling was suppressed in Ramos cells by the potent compounds. Preliminary kinase inhibition screening also revealed LCK and SRC as additional targets. Our results further support the hypothesis that multikinase targeting compounds could produce more robust responses in the treatment of B lymphoid neoplasms.

• MeSH
• fosforylace MeSH
• indazoly aplikace a dávkování   farmakologie   MeSH
• inhibitory proteinkinas aplikace a dávkování   farmakologie   MeSH
• kinasa Syk antagonisté a inhibitory   MeSH
• lidé MeSH
• proteinkinasa BTK antagonisté a inhibitory   MeSH
• protoonkogenní proteiny c-bcr metabolismus   MeSH
• pyraziny aplikace a dávkování   farmakologie   MeSH
• signální transdukce účinky léků   MeSH
• vztah mezi dávkou a účinkem léčiva MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH

One of the indications for BCR::ABL1 mutation testing in chronic myeloid leukemia (CML) is when tyrosine kinase inhibitor therapy (TKI) needs to be changed for unsatisfactory response. In this study, we evaluated a droplet digital PCR (ddPCR)-based multiplex strategy for the detection and quantitation of transcripts harbouring mutations conferring resistance to second-generation TKIs (2GTKIs). Parallel quantitation of e13a2, e14a2 and e1a2 BCR::ABL1 fusion transcripts enables to express results as percentage of mutation positive- over total BCR::ABL1 transcripts. We determined the limit of blank in 60 mutation-negative samples. Accuracy was demonstrated by further analysis of 48 samples already studied by next generation sequencing (NGS). Mutations could be called down to 0.5% and across 3-logs of BCR::ABL1 levels. Retrospective review of BCR::ABL1 NGS results in 513 consecutive CML patients with non-optimal response to first- or second-line TKI therapy suggested that a ddPCR-based approach targeted against 2GTKI-resistant mutations would score samples as mutation-negative in 22% of patients with warning response to imatinib but only in 6% of patients with warning response to 2GTKIs. We conclude ddPCR represents an attractive method for easy, accurate and rapid screening for 2GTKI-resistant mutations impacting on TKI selection, although ddPCR cannot identify compound mutations.

• MeSH
• bcr-abl fúzové proteiny * MeSH
• chemorezistence MeSH
• chronická myeloidní leukemie * MeSH
• inhibitory proteinkinas MeSH
• lidé MeSH
• mutace MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

Chronická myelocytová leukémia (CML) je klonálne myeloproliferatívne ochorenie charakterizované dôkazom tzv. filadelfského chromozómu (Ph1 chromozóm) a/alebo patologickým fúznym génom BCR‑ABL1 v kostnej dreni. Liečba chronickej myelocytovej leukémie sa koncom 20. storočia opierala o interferón α a o transplantáciu kostnej drene, no po roku 2000 sa zavedením imatinibu liečebný prístup k pacientom s CML významne zmenil. Zlepšila sa prognóza nielen mladým, ale aj starším pacientom a predĺžilo sa ich prežívanie, ktoré je v prípade optimálnej liečebnej odpovede porovnateľné k bežnej populácii bez CML. Avšak približne 1/3 pacientov liečených imatinibom nedosahuje optimálne liečebné odpovede a vyžaduje zmenu liečby na inhibítory tyrozinkinázy 2. generácie (TKI: bosutinib, dasatinib a nilotinib). Mladší pacienti bez pridružených kardiovaskulárnych či metabolických ochorení a pacienti s vyšším rizikovým skóre pri stanovení diagnózy profitujú so zahájenia liečby TKI 2. generácie už do 1. línie s cieľom rýchlejšieho dosiahnutia hlbokej molekulovej odpovede a šance na možné prerušenie liečby v budúcnosti. U starších pacientov s komorbiditami a u pacientov s nižším rizikovým skóre má naďalej svoje miesto v 1. línii aj imatinib. Pre pacientov s rezistenciou aj na druhogeneračné TKI máme k dispo‑zícii TKI 3. generácie ponatinib, ktorý je účinný aj u pacientov s mutáciou T315I. Najväčšou bariérou účinnej liečby TKI je intolerancia a toxicita a preto by mal byť výber TKI u každého pacienta individuálny. Nevyhnutnosťou dlhodobej liečby CML je adekvátna spolupráca pacienta. Na základe viacerých klinických štúdií má približne 40–60 % pacientov v štádiu hlbokej a trvácnej molekulovej odpovede šancu na bezpečné prerušenie liečby TKI, čo predstavuje ďalší prelomový úspech v manažmente pacientov s CML.

Chronic myeloid leukemia (CML) is a clonal myeloproliferative neoplasia that is characterised by Philadelphia chromosome (Ph1 chromosome) and/or fusion gene BCR‑ABL1 in bone marrow. Interpheron α and bone marrow transplantation used to be the main treatment modalities for patients with CML 20 years ago. Due to the introduction of imatinib mesylate since the year 2000 the outcome of CML patients has dramatically improved. The survival of both younger and elderly patients in the case of an optimal response has been prolonged and currently is close to survival of healthy population. Although, one third of patients does not respond well to first line imatinib and needs to change the treatment to second line tyrosine kinase inhibitors (TKI: bosutinib, dasatinib and nilotinib). Younger patients without cardiologic and metabolic disorders and those with poor risk profile score may have benefit from TKI of 2nd generation as a 1st line treatment option with the aim of reaching deeper molecular response and the chance of treatment free remission (TFR) in future. By older patients with severe comorbidities and in patients with good risk profile score imatinib as a 1st line treatment option can be used. For patients who are resistant simultaneously to 2nd generation TKI and for patients with mutation T315I ponatinib – TKI of 3rd generation can be used effectively. Intolerance and toxicity of TKI ́s are the main barriers of effective CML treatment. TKI selection for each patient should be individual. Patient ́s cooperation with medical team is crucial and inevitable in long time treatment process. The chance for TFR has become feasible for approximately 40–60 % CML patients in deep and durable molecular remission and represents a further important milestone in the management of CML patients.

• Klíčová slova
• Bosutinib, nilotinib, Ponatinib,
• MeSH
• chronická myeloidní leukemie * terapie   MeSH
• dasatinib terapeutické užití   MeSH
• inhibitory proteinkinas terapeutické užití   MeSH
• lidé MeSH
• transplantace kostní dřeně MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• přehledy MeSH

Chronic myeloid leukemia (CML) is a clonal myeloproliferative disorder arising from chromosomal translocation producing a chimeric BCR-ABL protein with unregulated tyrosine kinase (TK) activity. Targeting of the BCR-ABL activity by the TK inhibitors (TKIs) is a frontline in treatment of the CML. While majority of the CML patients positively respond to the TKIs, their use does not cure the disease. The facts that the CML patients often acquire BCR-ABL mutations causing resistance to TKIs, that slowly proliferating cancer stem cells are poorly targeted with TKIs, and that other oncogenic pathways cooperate with the BCR-ABL in the CML development are all responsible for disease relapse. Main goal of the proposed project is to characterise the BCR-ABL interactome comprising of stably and transiently associated proteins in different clinical stages of CML along with identification of protein-protein interactions responsible for survival of the BCR-ABL positive cells. The results are to identify novel treatment strategies in CML.

Chronická myeloidní leukémie (CML) je klonální myeloproliferativní onemocnění vznikající v důsledku chromosomální translokace, jež vede k produkci chimerického BCR-ABL proteinu s neregulovanou tyrosin kinázovou (TK) aktivitou. Inhibice BCR-ABL aktivity pomocí TK inhibitorů (TKI) představuje standard v léčbě CML. Ačkoliv většina pacientů pozitivně reaguje na administraci TKI, jejich použití nevede k eradikaci choroby. Skutečnost, že: i) pacienti s CML vyvinou resistenci vůči TKI v důsledku mutací v BCR-ABL, ii) TKI jsou neefektivní pro pomalu proliferující rakovinné kmenové buňky, a iii) řada dalších onkogenických signálních drah se spolupodílí na propagaci CML, vede k relapsu onemocnění. Hlavním cílem tohoto projektu je charakterizace interaktomu BCR-ABL zahrnujícího stabilně a transientně asociované proteiny v různých klinických fázích CML a identifikace protein-proteinových interakcí zodpovědných za přežívání buněk pozitivních na BCR-ABL. Výsledky tohoto projektu umožní identifikaci nových přístupů k léčbě CML.

• MeSH
• bcr-abl fúzové proteiny MeSH
• chronická myeloidní leukemie terapie   MeSH
• klinický obraz nemoci MeSH
• mapování interakce mezi proteiny MeSH
• mapy interakcí proteinů MeSH
• proteinkinasa BTK MeSH
• signální transdukce MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• onkologie
• hematologie a transfuzní lékařství
• biochemie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

In chronic myeloid leukemia and Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia, tyrosine kinase inhibitor (TKI) therapy may select for drug-resistant BCR-ABL mutants. We used an ultra-deep sequencing (UDS) approach to resolve qualitatively and quantitatively the complexity of mutated populations surviving TKIs and to investigate their clonal structure and evolution over time in relation to therapeutic intervention. To this purpose, we performed a longitudinal analysis of 106 samples from 33 patients who had received sequential treatment with multiple TKIs and had experienced sequential relapses accompanied by selection of 1 or more TKI-resistant mutations. We found that conventional Sanger sequencing had misclassified or underestimated BCR-ABL mutation status in 55% of the samples, where mutations with 1% to 15% abundance were detected. A complex clonal texture was uncovered by clonal analysis of samples harboring multiple mutations and up to 13 different mutated populations were identified. The landscape of these mutated populations was found to be highly dynamic. The high degree of complexity uncovered by UDS indicates that conventional Sanger sequencing might be an inadequate tool to assess BCR-ABL kinase domain mutation status, which currently represents an important component of the therapeutic decision algorithms. Further evaluation of the clinical usefulness of UDS-based approaches is warranted.

• MeSH
• bcr-abl fúzové proteiny genetika   chemie   MeSH
• chemorezistence genetika   MeSH
• dospělí MeSH
• inhibitory proteinkinas MeSH
• katalytická doména genetika   MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• mutační analýza DNA metody   MeSH
• retrospektivní studie MeSH
• tyrosinkinasy MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• lidé středního věku MeSH
• lidé MeSH
• mladiství MeSH
• mladý dospělý MeSH
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH

Nedávné zavedení inhibitoru BTK ibrutinibu a inhibitoru PI3K idelalisibu představovalo revoluci v terapii malignit vznikajících z maturovaných B lymfocytů a u některých z nich se stalo primární léčebnou strategií. K všeobecnému překvapení však bylo zjištěno, že tyto inhibitory cílící na utlumení BCR dráhy fungují komplexnějším mechanismem, než se předpokládalo. Zároveň u pacientů léčených "BCR inhibitory“ vznikají bodové i chromozomální aberace a změny ve fyziologii maligních B buněk, které jim poskytují rezistenci k této léčbě. Nejdéle popsanými aberacemi je mutace PLCγ obcházející BCR komplex a mutace BTK bránící kovalentní vazbě ibrutinibu, ale stále jsou popisovány další mutace zodpovědné za rezistenci. Navíc relativní rezistence k léčbě BCR inhibitory může nastat i negenetickým adaptivním mechanismem spočívajícím v aktivaci alternativních drah a “kompenzaci“ inhibice kináz. Příkladem těchto kompenzačních mechanismů je aktivace PI3K-Akt a alternativní NFκB dráhy, či zvýšení hladiny BCL2, které dovolují přežití buněk s inhibovanou BTK. Zde se tak nabízí potenciálně účinné terapeutické kombinace BTK/PI3K inhibitorů s dalšími cílenými inhibitory pro klinické testovaní. Alternativně lze využít léčiva, která by napodobovala klinický efekt BTK/PI3K inhibice například tím, že brání adhezi či migraci maligních B buněk (inhibice chemokinové dráhy či integrinů) či blokují odpověď na podpůrné signály od T lymfocytů v mikroprostředí jako je IL4 (inhibitory STAT signalizace).

The emergence of the BTK inhibitor ibrutinib and PI3K inhibitor idelalisib represented a revolution in the therapy of B cell malignancies. In some of these malignancies, they became the primary therapeutic strategy. However "BCR inhibitors“ function by a more complex mechanism than anticipated. The evolution of point mutations, chromosomal aberrations and changes in the physiology of malignant B cells leads to resistance in some patients treated with BCR inhibitors. The most commonly described aberration is the mutation in PLC bypassing BCR signalosome or the mutation in BTK preventing the covalent binding of ibrutinib. However, additional mutations leading to resistance are still being described. Furthermore, relative resistance to "BCR inhibitors“ can be caused by non-genetic adaptive mechanisms leading to activation of alternative pathways and "compensation“ of kinase inhibition. For instance, PI3K-Akt and NFkB activation or BCL2 upregulation lead to B cell survival even after BTK inhibition. This suggests some potentially effective therapeutic combinations of BTK/PI3K inhibitors together with other targeted inhibitors for clinical trials. Alternatively, drugs mimicking the BTK/PI3K inhibition effect can be used to prevent adhesion and migration of malignant B cells (chemokine and integrin pathway inhibition) or to block the pro-proliferative signals from the microenvironment such as IL4 (STAT inhibitors).

• Klíčová slova
• Ibrutinib, idelalisib,
• MeSH
• antitumorózní látky farmakologie   terapeutické užití   MeSH
• buněčné mikroprostředí MeSH
• chemorezistence MeSH
• chronická lymfatická leukemie * farmakoterapie   patofyziologie   MeSH
• inhibitory enzymů farmakologie   terapeutické užití   MeSH
• inhibitory proteinkinas farmakologie   terapeutické užití   MeSH
• lidé MeSH
• pyrazoly farmakologie   terapeutické užití   MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH