FISH
Dotaz
Zobrazit nápovědu
- MeSH
- aneuploidie MeSH
- chromozomální aberace MeSH
- chromozomální delece MeSH
- cytogenetické vyšetření MeSH
- dospělí MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční MeSH
- lidé MeSH
- prenatální diagnóza metody MeSH
- těhotenství MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- těhotenství MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- kazuistiky MeSH
- přehledy MeSH
Cíl studie: Seznámení s preimplantační diagnostikou (PGD) metodou fluorescenční in situ hybridizace (FISH) a s některými faktory, které zásadně ovlivňují výsledky získané touto technikou z pohledu molekulárního cytogenetika. Jsou shrnuty jednotlivé kritické kroky práce s jednou buňkou při PGD-FISH jak z literárních údajů, tak z vlastních experimentálních poznatků. Jednotlivé kroky jsou analyzovány a jsou uvedeny možnosti jejich řešení. Typ studie: Přehledový článek. Název a sídlo pracoviště: Ústav lékařské genetiky a fetální medicíny FN a LF UP, Olomouc, Centrum asistované reprodukce při Porodnicko-gynekologické klinice FN, Olomouc. Předmět a metoda studie: Úvod do problematiky PGD. Přehled a rozbor faktorů, na kterých závisí úspěšnost metody FISH při PGD. – Výběr embryí pro experimentální fázi PGD-FISH. – Volba fixační metody a předzpracování (pretreatment), použití vhodných sond. – Zaměření fixované buňky. – Interpretace získaných výsledků. Navržení způsobu jejich úspěšného řešení. Závěr: V práci je podáno přehledné zpracování metody PGD-FISH. Jsou zdůrazněny a zhodnoceny některé kritické aspekty analýzy jednobuněčného preparátu a navrženy možnosti a postupy jejich optimálního řešení.
Objective: Information on preimplantation diagnostics (PGD) by means of the method of fluorescent in situ hybridization (FISH) and some factors, which principally influence the results obtained with this technique from the point of view of a molecular cytogeneticist. Critical steps of work with one cell in PGD-FISH are summarized based on data from literature as well as from the authors, own experimental experience. The individual steps are analyzed and possibilities of execution are presented. Type of study: A review. Setting: Institute of Medical Genetics and Fetal Medicine of Faculty Hospital and Medical Faculty of Palacky University, Center of Assisted Reproduction at Obstetric-Gynecological Clinic, Faculty Hospital, Olomouc. Subject and Methods of Study: Introduction into the PGD problem. A survey and analysis of factors decisive for the success of the FISH method for PGD. – Selection of embrya for the experimental phase of PGD-FISH. – Selection of fixation method and pretreatment, application of suitable probes. – Localization of the fixed cell. – Interpretation of the results obtained. Recommendation of the mode of their successful solution. Conclusion: The paper presents a survey of the PGD-FISH method. Some critical aspects in the analysis of unicellular preparation are pointed out and evaluated and possibilities and procedures of the optimal solution are suggested.
- MeSH
- aneuploidie MeSH
- blastomery MeSH
- embryo savčí patologie MeSH
- fertilizace in vitro MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- fixativa chemie MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční metody MeSH
- lidé MeSH
- preimplantační diagnóza metody MeSH
- Check Tag
- lidé MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- srovnávací studie MeSH
Přesná analýza karyotypu leukemických buněk hraje významnou roli při diagnostice, klasifikaci, stanovení prognózy a monitorování léčby nemocných s leukémiemi. U dětských ALL byla popsána řada specifických chro- mozómových aberací, které mají velký prognostický význam. K nejdůležitějším patří hyperdiploidie s více než 50 chromozómy a t(12;21), které jsou považovány za příznivý prognostický faktor a t(9;22) a přestavby MLL genu, které korelují se špatnou prognózou. Proto je včasná a přesná detekce těchto aberací velmi důležitá. Metody FISH překonávají některá omezení metod konvenční cytogenetiky a molekulární genetiky a díky své citlivosti umožňují detekovat specifické chromozómové aberace v mitózách i v nedělících se interfázních jádrech. K detekci hyperdi- ploidních buněčných klonů a strukturních přestaveb používáme dvoubarevnou fluorescenci s centromerickými, respektive lokus-specifickými sondami. K analýze složitých komplexních přestaveb používáme malovací sondy a mnohobarevnou fluorescenční in situ hybridizaci (mFISH). Během posledních 8 let jsme různými metodami vyšetřili celkem 275 dětí s ALL. Translokaci t(9;22) jsme nalezli u sedmi a přestavby MLL genu u 14 nemocných z tohoto souboru. Detekcí hyperdiploidních buněk a t(12;21) se zabýváme od roku 1988. Buňky s vysokou hyper- diploidií jsme detekovali u 35 pacientů, 10 z nich mělo v karyotypu další komplexní přestavby. Translokaci t(12;21) jsme detekovali u 37 nemocných a komplexní přestavby jsme prokázali u 22 z nich. FISH se spolu s cytogenetikou a molekulární genetikou stala v dnešní době nezbytnou součástí laboratorních vyšetření u dětí s ALL, a to nejen při diagnostice, ale i v průběhu léčby.
Classical cytogenetic analysis plays an important role in the diagnosis, classificat ion, therapy monitoring and prognosis of patients with leukemia. Many recurrent cytogenetic abnormalities with major prognostic values have been described in childhood ALL. Hyperdiploidy and/or t(12;21) are associated with good prognosis, whereas t(9;22) and/or rearrangements of MLL gene correlate with poor outcome and therefore early detection of these abnormalities is very important. FISH can overcome some limitations of conventional cytogenetic and molecular-genetic analyses and due to high sensitivity specific chromosomal aberrations in mitoses and/or interphase nuclei can be detected. In the Center of Oncocytogenetics of the 3rd Medical Department for assesment of hyperdiploidy and structural rearrangements we use double-color FISH with centromeric and/or locus-specific probes and complex aberrations are ascertained by whole chromosome painting probes and multicolor FISH. Among 275 children with ALL examined during the last 8 years by different FISH methods we found seven patients with translocation t(9;22) and 14 patients with MLL rearrangements in bone marrow cells. Since 1988 we focus on detection of hyperdiploidy and/or t(12;21). High hyperdiploidy was found in 35 children, 10 of them had further complex rearrangements. Translocation t(12;21) was proved in 37 patients and complex rearrangements were found in 22 of them. FISH, cytogenetic and molecular-genetic analyses become obligatory for the first diagnostic examination as well as for monitoring of treatment effect in children with ALL.
- MeSH
- akutní lymfatická leukemie diagnóza MeSH
- chromozomální aberace MeSH
- cytogenetické vyšetření metody MeSH
- dítě MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- genová přestavba MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční metody MeSH
- lidé MeSH
- prognóza MeSH
- translokace genetická MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- lidé MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
Východisko. Pouze asi 50 % žen s Turnerovým syndromem má podle literárních údajů karyotyp 45,X ve všech buňkách, ostatní mají mozaiky dvou nebo více buněčných klonů. S rozvojem nových metod se však ukazuje, že nemocných s mozaikami je pravděpodobně více, než se předpokládalo na základě klasických cytogenetických vyšetření. Cílem práce bylo sledovat početní odchylky chromozomu X v mitózách i v jádrech kultivovaných periferních lymfocytů žen s Turnerovým syndromem metodou FISH, určit rozdíly v citlivosti klasických a molekulárně cyto- genetických metod u těchto pacientek a porovnat je s kontrolní skupinou zdravých žen. Metody a výsledky. Vyšetřili jsme 18 žen s Turnerovým syndromem. Klasickou cytogenetickou analýzou jsme u 9 pacientek prokázali karyotyp 45,X ve všech hodnocených buňkách a u dalších 9 žen jsme nalezli mozaiku dvou nebo více buněčných klonů. Cytogenetické nálezy jsme porovnali s výsledky analýzy mitóz a interfázních buněk metodou FISH s a-satelitními sondami. Ve všech případech FISH potvrdila cytogenetické výsledky a kromě toho u 6 žen (30 %) prokázala existenci nových buněčných klonů, které nebyly zachyceny klasickou cytogenetikou. Závěry. Prokázali jsme vhodnost použití metody FISH při detekci mozaicismu u nemocných s Turnerovým syndromem. FISH díky vyšší senzitivitě umožňuje zachytit větší počet mozaikových linií než klasická cytogenetika.
Background. According to the literature approximately 50% of patients with Turner's syndrome have karyotype 45,X in every cell, the rest have two or more cell lines with mosaics of sex chromosomes. New methods have shown that the mosaicism is probably more frequent than expected from classical cytogenetics examinations. The aim of this study was to detect numerical changes of sex chromosomes in mitoses and interphase nuclei of cultivated peripheral lymphocytes of patients with Turner's syndrome by means of FISH, to compare the sensitivity of classical and molecular-cytogenetic methods and to estimate the values obtained in 10 control healthy females with karyotype 46,XX. Methods and Results. 18 females with Turner's syndrome were examined. Karyotype 45,X was found by classical cytogenetics in all cells of 9 females. The 9 remaining patients had sex chromosome mosaicism of two or more clones. In all patients FISH confirmed the results of classical cytogenetic methods and in 6 patients (30%) it revealed other clones previously not detected. Conclusions. Higher sensitivity of FISH enables more precise detection of mosaicism of cell lines than classical cytogenetics and this technique is more suitable for examinations of patients with Turner' syndrome.
- MeSH
- aneuploidie MeSH
- chromozomální aberace MeSH
- chromozomální delece MeSH
- dítě MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční MeSH
- lidé MeSH
- lidské chromozomy, pár 22 MeSH
- novorozenec MeSH
- předškolní dítě MeSH
- syndrom etiologie MeSH
- vrozené srdeční vady diagnóza MeSH
- Check Tag
- dítě MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- novorozenec MeSH
- předškolní dítě MeSH
- ženské pohlaví MeSH
Východisko. Klasickým cytogenetickým vyšetřením buněk kostní dřeně nebo periferních B-lymfocytů bylo zjištěno, že nejčastější změnou chromozómů u chronické lymfatické leukémie je trizómie 12. Molekulárně cytoge- netická metoda tzv. interfázická in situ hybridizace, kterou je možné vyšetřovat i nedělící se buňky, však dokázala, že chromozómových změn u CLL je daleko víc a že mají přímý vztah ke vzniku a průběhu onemocnění. Metody a výsledky. Během posledních dvou let vyšetřujeme buňky kostní dřeně nemocných s CLL kromě klasickou cytogenetickou metodou G-pruhováním také fluorescenční in situ hybridizací. Pomocí centromerické a-satelitní sondy pro chromozóm 12 sledujeme početní odchylky v dělících i nedělících se buňkách, dále kosmido- vými sondami hledáme drobné delece v oblasti 13q14 (Rb gen) a 17p13 (p53 protein). Tyto geny jsou zodpovědné za buněčné dělení a jsou dávány do přímé souvislosti se vznikem nádorových procesů. U CLL řešíme v současnosti otázku, zda početní (trizómie 12) a strukturní (delece) chromozómové změny jsou primární či sekundární změnou a jaký je jejich vztah k průběhu onemocnění. Sondou CEP12 jsme vyšetřili 93 nemocných, u 24 z nich (tj. 25,8 %) jsme zjistili existenci buněčného klonu s trizómií 12. Zastoupení klonu bylo 2,5-75,5 % buněk a klasickou cytogenetikou byla jeho existence prokázána jen u 2 nemocných. Delece v oblasti 13q14 byla prokázána sondou LSI D13S319 u 24 nemocných ze 73 (32,8 %), rozsah klonu 2,5-80,0 % buněk, klasickou cytogenetikou s potvrzením FISH byla delece 13q14 nalezena jen u 1 nemocného. Deleci 17p13 jsme u 61 pacientů vyšetřených sondou LSI p53 zjistili u 14 (22,9 %), a to vždy jen metodou FISH. Rozsah klonu 2,5-34,0 % buněk. Deleci del(11)(q23) jsme nezjistili u žádného z 12 vyšetřených pacientů. Všechny sondy jsou od firmy VYSIS™. Závěry. Interfázická FISH je velmi citlivou metodou, kterou lze u vysokého procenta pacientů s CLL prokázat chromozómové odchylky. Náš soubor nemocných s CLL dále rozšiřujeme a hledáme korelace mezi molekulárně- cytogenetickými, imunologickými, morfologickými a prognostickými ukazateli.
Background. Trisomy 12 was found to be the most frequent chromosomal aberration identified by conventional cytogenetic studies of bone marrow cells and peripheral lymphocytes of patients with CLL. Molecular-cytogenetic techniques which enable examination of dividing and/or non-diving interphase nuclei (I-FISH), proved existence of other chromosomal abnormalities, mainly deletions, which could have in CLL patients relation to the origin, course and prognosis of the disease. Methods and Results. During the last two years bone marrow chromosomes of all patients with CLL were examined by G-banding and by I-FISH. The numerical changes of chromosome 12 were followed by centromeric DNA probe in dividing and non-dividing cells. The small deletions were ascertained by locus specific probes for 13q14 (Rb gene), 17p13 (p53 protein) and 11q23 (MLL gene). These genes are responsible for cell division and their function is probably in connection with neoplastic process. It is of interest whether numerical and structural chromosomal rearrangements are primary or secondary changes and what is their impact on etiology of CLL. 93 patients were examined by DNA prove CEP12 and trisomy 12 was found in 24 of them (25.8 %), the range of the clone was 2.5-75.5 % of the screened cells. Deletion del(13)(q14) was examined by probe D13S319 in 73 patients and proved in 24 of them (32.8 %), pathological clone ranged 2.5-80.0 % of the cells. Deletion del(17)(p13) was found in 14 patients out of 61 examined by probe LSI p53 (22.9 %). The extent of the clone was 2.5-34.0 % of examined cells. Deletion 11q23 was not ascertained in any of 11 patients by means of probe LSI 11q23 (MLL). All probes used for FISH were manufactured by VYSIS™. Conclusions. FISH is very sensitive method, suitable for molecular-cytogenetic examination of leukemic patients. With I-FISH the deletion of 13q14 was ascertained as the most frequent chromosomal aberration in series of 73 patients with CLL. We continue to increase the number of patients screened by I-FISH with all eligible DNA probes and start the prospective study on patients with chromosomal pathology. We will correlate the immunophe- notype, morphology, clinical course and prognosis with karyotypic findings.
- MeSH
- B-lymfocyty genetika MeSH
- chronická nemoc MeSH
- delece genu MeSH
- DNA sondy diagnostické užití MeSH
- dospělí MeSH
- finanční podpora výzkumu jako téma MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- lymfoidní leukemie diagnóza genetika MeSH
- prognóza MeSH
- senioři MeSH
- trizomie MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé středního věku MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- senioři MeSH
- ženské pohlaví MeSH
Cíl studie: Seznámení čtenáře s problematikou preimplantační genetické diagnostiky a souboremlaboratorních postupů při odběru, úpravě a vyšetření pólových tělísek, spermií a embryí metodoufluorescenční in situ hybridizace (FISH) v programu fertilizace in vitro.Typ studie: Přehled.Název a sídlo pracoviště: Sanatorium REPROMEDA, Brno, Výzkumný ústav veterinárního lékařstvíBrno.Metodika: Stručný a výstižný přehled postupů při získání materiálu, přípravě vyšetřovaného vzorkua průběhu vyšetření chromosomů metodami FISH.Závěry: Práce přehledně zpracovává problematiku provedení PGD, zejména vyšetření chromosomálníchaneuploidií včetně metodiky odběru materiálu, přípravy k vlastní analýze FISH a provedenítéto analýzy.
Objective: Presentation of preimplantation genetic diagnosis and the set of laboratory processes likeaspiration, preparation and evaluation of polar bodies, sperm cells and blastomeres using FISHmethod (fluorescent in situ hybridization) in ART.Design: Review.Setting: Sanatorium REPROMEDA, Brno, Veterinary Research Institute, Brno.Methods: Overview of published data and own clinical experience with the cell aspiration methods,evaluated sample preparation and the proper chromosomes visualisation using FISH method.Conclusion: The review brings an overview of conditions and methods including sample obtaining,FISH analysis preparation and implementation, processed during PGD.
- MeSH
- blastomery MeSH
- dospělí MeSH
- fertilizace in vitro MeSH
- hybridizace in situ fluorescenční MeSH
- lidé MeSH
- odběr biologického vzorku MeSH
- oocyty MeSH
- preimplantační diagnóza metody MeSH
- spermie MeSH
- Check Tag
- dospělí MeSH
- lidé MeSH
- mužské pohlaví MeSH
- ženské pohlaví MeSH
- Publikační typ
- přehledy MeSH
