Activating mutations in fibroblast growth factor receptor 3 (FGFR3) account for the most prevalent form of dwarfism in humans, the achondroplasia. Excessive activation of FGFR3 causes premature chondrocyte growth arrest, abnormal extracellular matrix homeostasis, and altered chondrocyte differentiation, resulting in achondroplasia. Although achondroplasia is considered a curable condition, no treatment is available to date. This is mostly due to our ingnorance of the basic mechanisms governing the FGFR3 signal transduction. Prolonged activation of Erk MAP kinase, mediated by Frs2 adapter protein, is a major effector of FGFR3 activation in achondroplasia. The molecular mechanisms underlying this phenotype are not known. The dynamics of the Frs2 interaction with FGFR3, Erk and other associated proteins holds a key to understanding of pathology of achondroplasia, and will be addressed in this proposal. Via systematic mapping of interactions among FGFR3, Frs2, Erk and other proteins, we aim to identify novel treatment opportunities for achondroplasia.

Aktivující mutace v FGFR3 receptorové tyrozinové kináze způsobují nejrozšířenější formu trpasličího vzrůstu u lidí, achondroplázii. Nadměrná aktivace FGFR3 způsobuje předčasné ukončení růstu chondrocytů, abnormální homeostázu extracelulární matrix a abnormální diferenciaci chondrocytů, vedoucí k achondroplázii. I když je achondroplázie považovaná za léčitelné onemocnění, v současnosti žádná léčba neexistuje. To je především dáno naší neznalostí základních mechanismů, kterými se řídí FGFR3 signální transdukce v chrupavce. Nekontrolovatelná aktivace Erk MAP kinázy, zprostředkovaná signálním adaptérovým proteinem Frs2, představuje hlavní mediátor FGFR3 aktivace u achondroplázie. Molekulární mechanizmy tohoto fenotypu nejsou známy. Dynamika interakce Frs2 s FGFR3, Erk a dalších proteinů představují klíč k pochopení patologie achondroplázie a budou řešena v tomto návrhu. Prostřednictvím systematického mapování interakcí mezi FGFR3, Frs2, Erk a ostaních proteinů budou identifikovány nové možnosti léčby achondroplázie.

• MeSH
• achondroplazie terapie   MeSH
• adaptorové proteiny signální transdukční MeSH
• chondrocyty MeSH
• chrupavka MeSH
• extracelulárním signálem regulované MAP kinasy MeSH
• fosfatasy MeSH
• MAP kinasový signální systém MeSH
• receptor fibroblastových růstových faktorů, typ 3 MeSH
• transformující růstové faktory MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• osteologie
• genetika, lékařská genetika
• molekulární biologie, molekulární medicína
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Rhomboids are intramembrane serine proteases with diverse physiological functions in organisms ranging from archaea to humans. Crystal structure analysis has provided a detailed understanding of the catalytic mechanism, and rhomboids have been implicated in various disease contexts. Unfortunately, the design of specific rhomboid inhibitors has lagged behind, and previously described small molecule inhibitors displayed insufficient potency and/or selectivity. Using a computer-aided approach, we focused on the discovery of novel scaffolds with reduced liabilities and the possibility for broad structural variations. Docking studies with the E. coli rhomboid GlpG indicated that 2-styryl substituted benzoxazinones might comprise novel rhomboid inhibitors. Protease in vitro assays confirmed activity of 2-styryl substituted benzoxazinones against GlpG but not against the soluble serine protease α-chymotrypsin. Furthermore, mass spectrometry analysis demonstrated covalent modification of the catalytic residue Ser201, corroborating the predicted mechanism of inhibition and the formation of an acyl enzyme intermediate. In conclusion, 2-styryl substituted benzoxazinones are a novel rhomboid inhibitor scaffold with ample opportunity for optimization.

• MeSH
• benzoxaziny chemická syntéza   chemie   MeSH
• chymotrypsin chemie   MeSH
• DNA vazebné proteiny antagonisté a inhibitory   chemie   genetika   MeSH
• Drosophila chemie   MeSH
• endopeptidasy chemie   genetika   MeSH
• enzymatické testy MeSH
• Escherichia coli enzymologie   MeSH
• inhibitory serinových proteinas chemická syntéza   chemie   MeSH
• katalytická doména MeSH
• lidé MeSH
• membránové proteiny antagonisté a inhibitory   chemie   genetika   MeSH
• mutace MeSH
• objevování léků MeSH
• proteiny Drosophily metabolismus   MeSH
• proteiny z Escherichia coli antagonisté a inhibitory   chemie   genetika   MeSH
• serin chemie   MeSH
• simulace molekulového dockingu MeSH
• skot MeSH
• styreny chemická syntéza   chemie   MeSH
• transformující růstový faktor alfa metabolismus   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• skot MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

This project is intent on assesment of molecular biology markers useful in prediction of therapeutic response in ovarian cancer patients by:1)Determination of ABCB1, ABCC1, GST polymorphisms, resistance proteins Pgp, MRP1, in vitro drug resistance/sensitivity and evaluation of their correlation with medical outcome (PFS, OS, side effects). 2) Assay of polymorphisms of the Interleukin-8 gene, endoglin, FGF, angiopoetin gene expression, pro-angiogenesis markers (VEGF,TGF?,TGFß,bFGF) and their correlation with kind of primary farmacotherapy and medical outcome (PFS, OS).3) Analysis of cardiotoxicity of standard primary chemotherapy (Paclitaxel + Carboplatin) versus primary therapy (Paclitaxel + Carboplatin + Bevacizumab) by ECG, blood pressure, ECHO, markers of cardiotoxicity (NT-proBNP,cTnT,cTnI,CKMB,MYO,h-FABP,GPBB) and their correlation with genetic polymophisms and drug resistance. This project support molecular biology prediction of the therapeutic response in ovarian cancer patients.

Projekt řeší molekulární biologii ovariálních karcinomů ve vztahu k odpovědi na léčbu. 1)Zhodnocení genových polymorfismů ABCB1,ABCC1,GST, proteinů Pgp, MRP1-kódovaných těmito geny, chemorezistence/chemosensitivity in vitro (MTT test) u pacientek diagnostikovaných 2013-2015 a retrospektivně u pacientek s již stanoveným Pgp, MRP1, MTT testem 2006-2009 ve vztahu k PFS a OS. 2) Stanovení genových polymorfismů interleukinu 8, genové exprese endoglinu,FGF,angiopoetinu a proangiogenních faktorů(VEGF,TGF?,TGFß,bFGF) v závislosti na odpovědi a typu primární léčby u pacientek diagnostikovaných 2013-2015 a retrospektivně z ovariální nádorové tkáně zamražené 2006-2009. 3) Zhodnocení kardiotoxicity paklitaxel+karboplatina versus paklitaxel+karboplatina+bevacizumab (EKG,TK,ECHOsrdce,markery kardiotoxicity NTproBNP,cTnT,cTnI,CKMB,MYO,hFABP,GPBB) a její vztah k chemorezistenci a genovým polymorfismům. Projekt umožní molekulárně biologickou predikci odpovědi na léčbu u pacientek s karcinomem ovaria.

• MeSH
• ABC transportéry analýza   MeSH
• analýza přežití MeSH
• bevacizumab škodlivé účinky   MeSH
• chemorezistence MeSH
• cytotoxické testy imunologické MeSH
• echokardiografie MeSH
• ELISA metody   využití   MeSH
• fibroblastový růstový faktor 2 analýza   MeSH
• glutathion-S-transferasa fí analýza   MeSH
• kalgranulin B analýza   MeSH
• karboplatina škodlivé účinky   MeSH
• karcinom farmakoterapie   MeSH
• kardiotoxicita MeSH
• molekulární biologie MeSH
• nádorové biomarkery MeSH
• nádory vaječníků farmakoterapie   MeSH
• nežádoucí účinky léčiv MeSH
• P-glykoproteiny analýza   MeSH
• paclitaxel škodlivé účinky   MeSH
• polymerázová řetězová reakce metody   využití   MeSH
• polymorfismus genetický MeSH
• proteiny spojené s mnohočetnou rezistencí k lékům analýza   MeSH
• protokoly antitumorózní kombinované chemoterapie MeSH
• receptory vaskulárního endoteliálního růstového faktoru analýza   MeSH
• transformující růstový faktor alfa analýza   MeSH
• transformující růstový faktor beta analýza   MeSH
• výsledek terapie MeSH
• ženy MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• gynekologie a porodnictví
• onkologie
• biologie
• genetika, lékařská genetika
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

• Klíčová slova
• metody přípravy krevních derivátů,
• MeSH
• autologní krevní transfuze MeSH
• fibrin bohatý na krevní destičky * MeSH
• hojení ran účinky léků   MeSH
• králíci MeSH
• modely u zvířat MeSH
• plazma bohatá na destičky * MeSH
• regenerace účinky léků   MeSH
• růstové látky krev   MeSH
• somatomediny * farmakologie   MeSH
• transformující růstové faktory * farmakologie   MeSH
• trombocyty MeSH
• vaskulární endoteliální růstové faktory * farmakologie   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• králíci MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• práce podpořená grantem MeSH
• srovnávací studie MeSH

The role of the local microenvironment in influencing cell behavior is central to both normal development and cancer formation. Here, we show that sprouty 1 (SPRY1) modulates the microenvironment to enable proper mammary branching morphogenesis. This process occurs through negative regulation of epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling in mammary stroma. Loss of SPRY1 resulted in up-regulation of EGFR-extracellular signal-regulated kinase (ERK) signaling in response to amphiregulin and transforming growth factor alpha stimulation. Consequently, stromal paracrine signaling and ECM remodeling is augmented, leading to increased epithelial branching in the mutant gland. By contrast, down-regulation of EGFR-ERK signaling due to gain of Sprouty function in the stroma led to stunted epithelial branching. Taken together, our results show that modulation of stromal paracrine signaling and ECM remodeling by SPRY1 regulates mammary epithelial morphogenesis during postnatal development.

• MeSH
• adaptorové proteiny signální transdukční nedostatek   metabolismus   MeSH
• amfiregulin farmakologie   MeSH
• buňky stromatu účinky léků   metabolismus   MeSH
• časosběrné zobrazování MeSH
• epitel růst a vývoj   metabolismus   MeSH
• epitelové buňky cytologie   účinky léků   MeSH
• erbB receptory metabolismus   MeSH
• extracelulární matrix metabolismus   MeSH
• extracelulárním signálem regulované MAP kinasy metabolismus   MeSH
• fibroblasty účinky léků   metabolismus   MeSH
• fosfoproteiny nedostatek   metabolismus   MeSH
• fosforylace účinky léků   MeSH
• kolagen metabolismus   MeSH
• ligandy MeSH
• membránové proteiny nedostatek   metabolismus   MeSH
• mléčné žlázy zvířat účinky léků   metabolismus   MeSH
• morfogeneze * účinky léků   MeSH
• mutace genetika   MeSH
• myši knockoutované MeSH
• myši nahé MeSH
• parakrinní signalizace * účinky léků   MeSH
• pohyb buněk účinky léků   MeSH
• protoonkogenní proteiny c-akt metabolismus   MeSH
• signální transdukce * účinky léků   MeSH
• transformující růstový faktor alfa farmakologie   MeSH
• vývojová regulace genové exprese účinky léků   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• mužské pohlaví MeSH
• ženské pohlaví MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH
• Research Support, N.I.H., Extramural MeSH

Rhomboid intramembrane proteases are the enzymes that release active epidermal growth factor receptor (EGFR) ligands in Drosophila and C. elegans, but little is known about their functions in mammals. Here we show that the mammalian rhomboid protease RHBDL4 (also known as Rhbdd1) promotes trafficking of several membrane proteins, including the EGFR ligand TGFα, from the endoplasmic reticulum (ER) to the Golgi apparatus, thereby triggering their secretion by extracellular microvesicles. Our data also demonstrate that RHBDL4-dependent trafficking control is regulated by G-protein coupled receptors, suggesting a role for this rhomboid protease in pathological conditions, including EGFR signaling. We propose that RHBDL4 reorganizes trafficking events within the early secretory pathway in response to GPCR signaling. Our work identifies RHBDL4 as a rheostat that tunes secretion dynamics and abundance of specific membrane protein cargoes.

• MeSH
• endoplazmatické retikulum metabolismus   MeSH
• exozómy metabolismus   MeSH
• Golgiho aparát metabolismus   MeSH
• membránové proteiny sekrece   MeSH
• myši MeSH
• transformující růstový faktor alfa sekrece   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• myši MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

• MeSH
• angiogenní proteiny * fyziologie   genetika   MeSH
• fibroblastový růstový faktor 2 fyziologie   MeSH
• mezibuněčné signální peptidy a proteiny * fyziologie   genetika   MeSH
• nádorové biomarkery MeSH
• nádory vaječníků * MeSH
• proliferace buněk účinky léků   MeSH
• regulace genové exprese MeSH
• transformující růstový faktor alfa fyziologie   MeSH
• transformující růstový faktor beta fyziologie   účinky léků   MeSH

INTRODUCTION: Competitive binding assays can be used to decipher not only the binding kinetics of studied ligands but also the binding site preference. Such assays are an essential step in the characterization of radioligands. However, the currently used competition assays require high concentrations of usually expensive ligands and still provide only binding site preference. By employing the time-resolved competition assay presented in this paper, binding characteristics including binding site preference can be obtained using less ligand. METHODS: To demonstrate the appropriateness of the time-resolved competition assay, we developed an assay in which the ligand binding was interrupted with a competitor. Experiments were performed on human carcinoma cell lines expressing epidermal growth factor receptor (EGFR). The targeting of the receptor was performed with radio-iodinated epidermal growth factor (EGF). The employed competitors involved either natural ligand transforming growth factor alpha (TGF-α) or anti-EGFR antibodies cetuximab and panitumumab targeting the same EGFR domain. RESULTS: Radio-iodinated EGF bound to EGFR was displaced with either low concentrations of cetuximab or high concentrations of panitumumab. In the case of TGF-α, we observed no competitive displacement of bound EGF at either high or low concentrations. When comparing the time-resolved competition assay with a manual competition assay, the resulting data of measured inhibition constants were in agreement. DISCUSSION: The results summarised in this study confirm the appropriateness of the time-resolved competition assay for assessing ligand binding properties. The assay has the potential to complement or replace conventional competition assays for determining binding site preference in the future.

• MeSH
• časové faktory MeSH
• epidermální růstový faktor chemie   metabolismus   MeSH
• erbB receptory antagonisté a inhibitory   chemie   metabolismus   MeSH
• humanizované monoklonální protilátky chemie   farmakologie   MeSH
• kompetitivní vazba účinky léků   MeSH
• lidé MeSH
• ligandy MeSH
• monoklonální protilátky chemie   farmakologie   MeSH
• nádorové buňky kultivované MeSH
• substrátová specifita MeSH
• transformující růstový faktor alfa chemie   metabolismus   MeSH
• vztah mezi dávkou a účinkem léčiva MeSH
• vztahy mezi strukturou a aktivitou MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

BACKGROUND: Ursodeoxycholic acid (UDCA) is used to treat primary biliary cirrhosis, intrahepatic cholestasis, and other cholestatic conditions. Although much has been learned about the molecular basis of the disease pathophysiology, our understanding of the effects of UDCA remains unclear. Possibly underlying its cytoprotective, anti-apoptotic, anti-oxidative effects, UDCA was reported to regulate the expression of TNFα and other inflammatory cytokines. However, it is not known if this effect involves also modulation of ADAM family of metalloproteinases, which are responsible for release of ectodomains of inflammatory cytokines from the cell surface. We hypothesized that UDCA modulates ADAM17 activity, resulting in amelioration of cholestasis in a murine model of bile duct ligation (BDL). METHODS: The effect of UDCA on ADAM17 activity was studied using the human liver hepatocellular carcinoma cell line HepG2. Untransfected cells or cells ectopically expressing human ADAM17 were cultured with or without UDCA and further activated using phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA). The expression and release of ADAM17 substrates, TNFα, TGFα, and c-Met receptor (or its soluble form, sMet) were evaluated using ELISA and quantitative real-time (qRT) PCR. Immunoblotting analyses were conducted to evaluate expression and activation of ADAM17 as well as the level of ERK1/2 phosphorylation after UDCA treatment. The regulation of tissue inhibitor of metalloproteinases-1 (TIMP-1) by UDCA was studied using zymography and qRT-PCR. A mouse model of acute cholestasis was induced by common BDL technique, during which mice received daily orogastric gavage with either UDCA or vehicle only. Liver injury was quantified using alkaline phosphatase (ALP), relative liver weight, and confirmed by histological analysis. ADAM17 substrates in sera were assessed using a bead multiplex assay. RESULTS: UDCA decreases amount of shed TNFα, TGFα, and sMet in cell culture media and the phosphorylation of ERK1/2. These effects are mediated by the reduction of ADAM17 activity in PMA stimulated cells although the expression ADAM17 is not affected. UDCA reduced the level of the mature form of ADAM17. Moreover, UDCA regulates the expression of TIMP-1 and gelatinases activity in PMA stimulated cells. A BDL-induced acute cholangitis model was characterized by increased relative liver weight, serum levels of ALP, sMet, and loss of intracellular glycogen. UDCA administration significantly decreased ALP and sMet levels, and reduced relative liver weight. Furthermore, hepatocytes of UDCA-treated animals retained their metabolic activity as evidenced by the amount of glycogen storage. CONCLUSIONS: The beneficial effect of UDCA appears to be mediated in part by the inhibition of ADAM17 activation and, thus, the release of TNFα, a strong pro-inflammatory factor. The release of other ADAM17 substrates, TGFα and sMet, are also regulated this way, pointing to a general impact on the release of ADAM17 substrates, which are pivotal for liver regeneration and function. In parallel, UDCA upregulates TIMP-1 that in turn inhibits matrix metalloproteinases, which destroy the hepatic ECM in diseased liver. This control of extracellular matrix turnover represents an additional beneficial path of UDCA treatment.

• MeSH
• buňky Hep G2 MeSH
• cholagoga a choleretika farmakologie   MeSH
• cholestáza MeSH
• hepatocyty účinky léků   MeSH
• játra účinky léků   MeSH
• kyselina ursodeoxycholová farmakologie   MeSH
• lidé MeSH
• ligace MeSH
• MAP kinasový signální systém účinky léků   MeSH
• myši MeSH
• proteiny ADAM účinky léků   MeSH
• protoonkogenní proteiny c-met účinky léků   metabolismus   MeSH
• TNF-alfa účinky léků   metabolismus   MeSH
• transformující růstový faktor alfa účinky léků   metabolismus   MeSH
• žlučové cesty chirurgie   MeSH
• zvířata MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH
• myši MeSH
• zvířata MeSH
• Publikační typ
• časopisecké články MeSH
• práce podpořená grantem MeSH

Autorka se zaměřila na destičkové faktory z alfa granulí trombocytů, konkrétně PDGF, IGF 1, TGF a VEGF. Trombocyty byly nejprve destruovány termodestrukcí, aby se faktory vyplavily do plazmy. Plazma byla defibrinovaná tepelně, čímž došlo jak k vysrážení koagulačních faktorů, tak k inaktivaci komplementu. Po centrifugaci byl destičkový lyzát přetlačen plazmaextraktorem do ozařovacího vaku. Byl přidán roztok Riboflavinu a destičkový lyzát byl virově a bakteriálně inaktivován systémem Mirasol. Konečný roztok byl lyofilizován. Autorka validovala každý kritický výrobní krok. Destičkové faktory byly měřeny na začátku procesu, po mikrobiální inaktivaci a po lyofilizaci. Výrobní proces neměl významný vliv na hladinu destičkových faktorů. Toto zjištění je zásadní pro další využití destičkového lyzátu.

The author focused on factors from platelet alpha granules, specifically the PDGF, IGF-1, a VEGF and TGF. Platelets were first broken by deep frozen that had washed factors into the plasma. Plasma was heat-treated, thereby leading to precipitation of coagulation factors, as well as to inactivate the complement. After centrifugation platelet lysate was pushed to the bag. Riboflavin solution was added and platelet lysate was viral and bacterial inactivated by Mirasol system. The final solution was freeze-dried. The author of validated each critical step. Platelet factors were measured at the beginning of the process, following the inactivation of microbial and after freeze-dried. The production process had not a significant impact on the level of platelet factors. This finding is crucial for the other using of platelet lysate.

• MeSH
• dárci krve MeSH
• destičkový růstový faktor * MeSH
• imunoanalýza * metody   MeSH
• imunochemie MeSH
• insulinu podobný růstový faktor I analýza   MeSH
• klinické laboratorní techniky MeSH
• lidé MeSH
• luminiscenční měření metody   MeSH
• lyofilizace * MeSH
• plazma bohatá na destičky * MeSH
• separace krevních složek MeSH
• transformující růstové faktory MeSH
• trombocyty * chemie   metabolismus   MeSH
• vaskulární endoteliální růstové faktory MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH