Niemann-Pickova choroba typu C (NPC) se může projevit poprvé v jakémkoli věku a zejména v dospělosti může být diagnostikována pozdě nebo chybně. Nový kvantitativní diagnostický test pro NPC, který podstatně usnadní diagnostiku nemoci, je založen na zátěži buněk cholesterol-dextranovými nanočásticemi (Chol/Dex) pro zvýraznění rozdílů v koncentracích metabolitů mezi pacienty s NPC a kontrolami. Deuterovaný cholesterol v Chol/Dex dovolí kvantifikaci endocytovaného cholesterolu tandemovou hmotnostní spektrometrií. Optimalizovaný test bude proveden ve více než 25 kulturách kožních fibroblastů pacientů s různými formami NPC a bude vypočítán poměr cholesterol/cholesteryl ester. Technikou CRISPR-Cas9 připravíme buněčné linie homozygotní pro časté varianty v genu NPC1 spojované s dospělou formou nemoci a pomocí testu určíme jejich patogenitu. Test bude upraven pro užití v bílých krvinkách a kultivovaných lymfocytech a bude zhodnoceno jeho možné diagnostické využití.; Niemann-Pick type C disease (NPC) can present in any age and especially in adulthood it may be misdiagnosed or detected late. The novel diagnostic test for NPC is based on loading of cells with cholesterol-dextran nanoparticles (Chol/Dex) in order to amplify the differences in metabolite levels between NPC controls and patients. Deuterium-labeled cholesterol in Chol/Dex will enable quantification of endocytosed cholesterol by tandem-mass spectrometry. Optimized test will be evaluated in more than 25 skin fibroblast cell lines from patients with different forms of NPC; cholesterol/cholesteryl ester ratio will be calculated. Cell lines homozygous for frequent variants in NPC1 gene implicated in adult forms of NPC will be created by genome editing using CRISPR-Cas9 and evaluated using the Chol/Dex-based test to determine their pathogenicity. The test will be adapted to white blood cells and cultured lymphocytes and its usefulness for diagnostics of NPC will be evaluated.

• MeSH
• alely MeSH
• cholesterol MeSH
• dextrany MeSH
• hmotnostní spektrometrie metody   MeSH
• lidé MeSH
• nemoci s pozdním začátkem diagnóza   MeSH
• Niemannova-Pickova nemoc typu C diagnóza   MeSH
• protein Cas9 MeSH
• Check Tag
• lidé MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• neurologie
• genetika, lékařská genetika
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu AZV MZ ČR

Niemann-Pickova choroba typ C1 (NPC1) je závažné neuroviscerální lysosomální střádací onemocnění s významnými psychosociálními dopady pro postižené rodiny a z hlediska finančního i pro zdravotní systém jako celek. Kauzální terapie NPC1 není v tuto chvíli dostupná. Aplikace přípravků zaváděných do klinické praxe je nákladná a proto je rychlá a efektivní diagnostika NPC1 nutným předpokladem úspěchu terapeutického zásahu, stejně jako racionalizace jejich podání. V projektu navrhovaná specifikace molekulárně patofysiologických důsledků mutací genu NPC1 na úrovni mRNA a proteinu pomůže určit efekt nových způsobů léčby. Funkční studie promotorové oblasti genu NPC1 ukáže, zda polymorfismy nebo další nalezené genetické změny ovlivňují úroveň transkripce a tím se podílejí na molekulární patogenezi NPC1. Navrhovaná laboratorní vyšetření v korelaci s klinickými údaji umožní určit nejen postupy vhodné k zařazení mezi diagnostické standardy ale i jejich využitelnost v nově vytvářeném diagnostickém algoritmu NPC1.; Niemann-Pick disease type C1 (NPC1) is a severe neurovisceral lysosomal storage disorder with significant psychosocial impacts for affected families and, due to financial costs, also for the healthcare systems. Accurate NPC1 diagnostics are fundamental prerequisites for any therapy. Moreover, drugs currently used for clinical treatment of NPC, even though not targeting the primary cause, are expensive and their application must be rationalized. The aim of the project is to characterize molecular consequences of NPC1 mutations on mRNA and protein levels and to test selected mutants for their responsiveness to chaperone treatment. NPC1 promoter will be studied to show if its polymorphisms or other sequence variants influence transcription levels and thus contribute to NPC1 pathogenesis. The results of the laboratory analyses correlated to clinical severity and quality-of-life data will enable a critical selection of standards to be embedded into newly introduced diagnostic algorithm of NPC1 disease.

• MeSH
• algoritmy MeSH
• diagnostické techniky molekulární metody   normy   MeSH
• diferenciální diagnóza MeSH
• dospělí MeSH
• genetická transkripce MeSH
• imunohistochemie MeSH
• kvalita života MeSH
• messenger RNA analýza   MeSH
• mladiství MeSH
• mutace MeSH
• Niemannova-Pickova nemoc typu C diagnóza   MeSH
• polymorfismus genetický MeSH
• psychosociální deprivace MeSH
• socioekonomické faktory MeSH
• Check Tag
• dospělí MeSH
• mladiství MeSH

• Konspekt
• Patologie. Klinická medicína
• NLK Obory
• neurologie
• genetika, lékařská genetika
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Cílem projektu je charakterizovat strukturání a biochemické změny a expresi genů u myšího knock-out modelu dědičného lysosomálního onemocnění mukopolysacharidosy typu IIIC (MPS IIIC), který byl vyvinut ve spolupráci s Prof.Pshezhetským (Montréal). Střádací proces bude charakterizován v neuronálních a viscerálních tkáních na histologické, histochemické, bicohemické a ultrastruktuální úrovni v 0, 2, 5, 10 měsících věku a při úmrtí. Zvláštní důraz bude kladen na neuropatologii. Koncentrace glykolipidů, jež pravděpodobně přispívají k patogenezi MPS IIIC budou analyzovány imunohistochemicky, tandemovou hmotnostní spektrometrií, a hmotnostně spektrometrickým zobrazováním. Exprese genů bude studována DNA čipy. Projekt bude detailně charakterizovat první myší model MPS IIIC a cíleně se bude zabývat rolí střádání glykolipidů a neuroinflamativních změn. Další aspekty modelu bude studovat Prof.Pshezhetsky a výsledkem bude společná publikace.; The goal of the project is to characterize structural, biochemical and transcriptional changes in knock-out mouse model of hereditary lysosomal disorder, mucopolysaccharidosis type IIIC (MPS IIIC), which was developed as a joint effort with Prof Pshezhetsky (Montréal). Storage process will be characterized in neuronal and visceral tissues at histological, histochemical, biochemical and ultrastructural levels at 0, 2, 5, 10 month of age and at death, with special emphasis on neuropathology. Levels of glycolipids, which possibly contribute to the pathogenesis of MPS IIIC, will be analyzed by immunohistochemistry, tandem mass spectrometry, mass spectrometry imaging. Gene expression in the brain will be studied by microarrays. The project will characterize in detail the first MPSIIIC animal model and address the role of glysosphingolipid accumulation and neuroinflammation in MPS IIIC. Other aspects of the model will be studied by Prof Pshezhetsky and result in a joint publication.

• MeSH
• glykosfingolipidy MeSH
• lyzozomální nemoci z ukládání MeSH
• modely nemocí na zvířatech MeSH
• mukopolysacharidóza III MeSH
• myši MeSH
• sekvenční analýza hybridizací s uspořádaným souborem oligonukleotidů MeSH
• tandemová hmotnostní spektrometrie MeSH
• vrozené poruchy metabolismu MeSH
• Check Tag
• myši MeSH

• Konspekt
• Pediatrie
• NLK Obory
• pediatrie
• genetika, lékařská genetika
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Acetyl-koenzym A:glukosaminid N-acetyltransferasa (HGSNAT) katalysuje lysosomální odbourávání glykosaminoglykanu heparansulfátu. Dědičný deficit HGSNAT vede k jeho lysososomálnímu střádání a rozvoji klinického fenotypu mukopolysacharidosy IIIC. Biochemickými a proteomickými přístupy budou charakterizovány partnerské molekuly HGSNAT (proteiny a lipidy), které mohou sehrávat významnou roli nejen v normální enzymatické funkci HGSNAT, ale i ve vyšším stupni organizace lysosomálních membrán. Na buněčné úrovni bude HGSNAT studována ve smyslu organelové distribuce, lysosomálního cílení, sub-kompartmentalizace v lysosomálních membránách a ve vztazích k partnerským molekulám (substrátu nebo ostatním lysosomálním proteinům). Cílem projektu je detailní charakterizace vlastností, molekulárních partnerů a nitrobuněčného transportu HGSNAT. Na základě výsledků bude možné zhodnotit vhodnou strategii pro cílení HGSNAT do lysosomů pro eventuální terapeutické aplikace u MPSIIIC.; Acetyl-coenzyme A:glucosaminide N-acetyltransferase (HGSNAT) catalyses lysosomal degradation of glycosaminoglycan heparan sulfate. The inherited deficiency of HGSNAT results in its lysosomal storage and in clinical phenotype of MPSIIIC. Biochemical and proteomic approaches will be employed to characterize partner molecules of HGSNAT (lipids and proteins), which can participate in the normal enzymatic function of HGSNAT, but also in higher ordering of lysosomal membranes. Cellular context of HGSNAT willbe evaluated both in terms of organellar distribution, lysosomal targeting and sub-compartmentalization of lysosomal membranes as well as by defining HGSNAT molecular partners (substrate or other lysosomal proteins). The aim of the project is the detailed characterization of the properties, molecular partners and intracellular transport of HGSNAT. Strategy for targeting of HGSNAT to the lysosomal compartment could thus be proposed for therapeutic applications.

• MeSH
• acetyltransferasy MeSH
• biologie buňky MeSH
• lyzozomy MeSH
• mukopolysacharidóza III MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biochemie
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Bude vyšetřen kandidátní soubor dětských nemocných eventuálně i dospělých do 30ti let věku s idiopatickou cholelitiázou na přítomnost defektů v genu ABCB4(MDR3). Bude vyšetřen soubor nemocných transplantovaných v IKEM pro kryptogenní cirhózu na přítomnost defektů v genu ABCB4(MDR3). U příbuzných probandů, u kterých budou nalezeny mutace v genu pro MDR3, bude provedeno vyšetření příslušné mutace. Bude provedena podrobná analýza sekvence regulačních oblastí genu ABCB4.; We will investigate a candidate group of paediatric patients and eventually adult patients up to 30 years of age with idiopathic cholelithiasis on the presence of defect in ABCB4(MDR3) gene. We will investigate a candidate group of patients transplantedin the Institute for Clinical and Experimental Medicine (IKEM) for cryptogenic cirrhosis on the presence of defect in ABCB4(MDR3) gene. We will perform an investigation of the mutation in the relatives of probands, in whom have been found the mutation ingene for MDR3. We will perform a detail analysis of sequence of regulation areas of ABCB4 gene.

• MeSH
• cholelitiáza etiologie   patofyziologie   MeSH
• dítě MeSH
• intrahepatální cholestáza etiologie   patofyziologie   MeSH
• jaterní cirhóza etiologie   MeSH
• mutace MeSH
• proteiny přenášející fosfolipidy nedostatek   MeSH
• Check Tag
• dítě MeSH

• Konspekt
• Pediatrie
• NLK Obory
• pediatrie
• gastroenterologie
• hepatologie
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Budeme vyhledávat rodiny s nenáhodnou inaktivací chromozomu X a zjišťovat zda v některých rodinách je nenáhodná inaktivace děděna. Inaktivaci budeme zjišťovat metodou založenou na vyšetření polymorfismů v genu HUMARA nebo jiných genech. Budeme také hledat polymorfismy v genech Xist/TSIX. V tkáních budeme zjišťovat rozdíly v inaktivaci chromozomu X. Výsledky napomohou lépe interpretovat výsledky vyšetření inaktivace běžně prováděné např. jen z krevních buněk. Budeme zkoumat vztah mezi inaktivací chromozomu X a fenotypem u žen heterozygotních pro častá gonozomálně recesivní metabolická onemocnění. Budeme zjišťovat zda lze výsledek vyšetření inaktivace použít pro predikci fenotypu a prognosy.; : We will search families with X-inactivation skewing to find out if the skewing is inherited in some families. We will study the inactivation by the HUMARA and similar assays. We will also study polymorphisms in Xist/TSIX. We will study tissue difference in X-inactivation. This will help to better interpretation of X-inactivation studies. We will study the relationship between X-inactivation and phenotype in females heterozygous for common X-linked metabolic disorders. We will examine how the X-inactivation studies can be used for prediction of phenotype.

• MeSH
• genetické nemoci vázané na chromozom X etiologie   MeSH
• inaktivace chromozomu X MeSH
• metylace DNA MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• polymorfismus genetický MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• biologie
• genetika, lékařská genetika
• vnitřní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Sborník textů, které se zaměřují na biochemickou genetiku a dědičné metabolické poruchy. Výstup projektu na podporu celoživotního vzdělávání a odborného vzdělávání o tomto tématu. Určeno odborné veřejnosti.

• MeSH
• kontinuální vzdělávání MeSH
• molekulární biologie MeSH
• pilotní projekty MeSH
• vrozené poruchy metabolismu MeSH
• Publikační typ
• sborníky MeSH

• Konspekt
• Biochemie. Molekulární biologie. Biofyzika
• NLK Obory
• molekulární biologie, molekulární medicína
• výchova a vzdělávání pracovníků ve zdravotnictví

Dna diagnostika Fabryho nemoci X-vázané adrenoleukodystrofie umožní spolehlivé určení heterozygotek v rodinách a cílené genetické poradenství. Mutace budou u hemizygotů určeny sekvenováním, u členů rodiny PCR/RFLP nebo ARMS technikami. Míra inaktivace X-chromozomu u přenašeček bude korelována s jejich fenotypem.; DNA-diagnosis in Fabry disease and X-linked adrenoleucodystrophy will enable reliable detection of heterozygous females in famil. and genetic counseling. Mutations in hemizygotes will be analyzed by sequencig,in otther famil. members by PCR/RFLP or ARMSDegree of X-chromosome inactivation in heterozygous females will be correlated with their phenotype.

• MeSH
• adrenoleukodystrofie genetika   MeSH
• angiokeratom genetika   MeSH
• chromozomální aberace MeSH
• mutace MeSH
• polymerázová řetězová reakce MeSH
• prenatální diagnóza MeSH

• Konspekt
• Obecná genetika. Obecná cytogenetika. Evoluce
• NLK Obory
• genetika, lékařská genetika
• biologie
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Budeme studovat mutace genu pro glukocerebrosidasu u českých pacientů s Gaucherovou chorobou.Zjištěný genotyp bude korelován s fenotypem a bude sloužit pro predikci klinického průběhu,spolehlivé určení heterozygotů a prenatální diagnostiku.

• MeSH
• DNA primery diagnostické užití   analýza   MeSH
• Gaucherova nemoc genetika   MeSH
• genetické poradenství MeSH
• glukosylceramidasa diagnostické užití   genetika   analýza   MeSH
• incidence MeSH
• polymerázová řetězová reakce využití   metody   MeSH
• Geografické názvy
• Česká republika MeSH

• Konspekt
• Biologické vědy
• NLK Obory
• embryologie a teratologie
• biologie
• genetika, lékařská genetika
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR

Nové diagnostické metody pro akutní dědičné metabol. poruchy(vč.SIDS) za použití netradičních biologických materiálů XXX XXX XXX

• MeSH
• biologické markery MeSH
• komplikace těhotenství MeSH
• prenatální diagnóza metody   MeSH
• vrozené poruchy metabolismu diagnóza   MeSH

• Konspekt
• Fyziologie člověka a srovnávací fyziologie
• NLK Obory
• vnitřní lékařství
• NLK Publikační typ
• závěrečné zprávy o řešení grantu IGA MZ ČR